1、無菌保證基本原理與實(shí)際應(yīng)用馬濤人員要求足夠的數(shù)量、適當(dāng)資質(zhì)、實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)書面的崗位工作職責(zé)崗位職責(zé)不得遺漏、交叉的職責(zé)應(yīng)有明確規(guī)定個(gè)人承擔(dān)的職責(zé)不應(yīng)當(dāng)過多 所有人員必須經(jīng)過培訓(xùn)并考核職責(zé)委托人員衛(wèi)生-3-前言基本概念藥典和GMP對(duì)無菌保證水平的定義系指無菌藥品中存在活微生物的概率最終滅菌產(chǎn)品：無菌保證水平不超過一百萬分之一非最終滅菌產(chǎn)品：以培養(yǎng)基灌裝零污染為目標(biāo)，實(shí)際污染率低于1/5000-4-藥品達(dá)到法定標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)鍵三個(gè)關(guān)鍵方面能充分殺滅污染微生物已滅菌的產(chǎn)品不被再污染消除帶菌產(chǎn)品混入已滅菌產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)三個(gè)核心問題產(chǎn)品和滅菌工藝設(shè)計(jì)達(dá)標(biāo)的基礎(chǔ)工程設(shè)計(jì)和建設(shè)實(shí)現(xiàn)設(shè)計(jì)目標(biāo)的硬件日常的運(yùn)作管理實(shí)現(xiàn)設(shè)計(jì)目標(biāo)

2、的軟件-5-解決問題的鑰匙知識(shí)無菌保證的理論技能應(yīng)用知識(shí)解決問題的能力消除威脅無菌保證的潛在風(fēng)險(xiǎn)因素-6-7-第一部分無菌保證基本原理-8-微生物基礎(chǔ)常見微生物種類基本特點(diǎn)細(xì)菌0.5 5 m，生長(zhǎng)態(tài)時(shí)不耐熱，部分能形成耐熱芽孢真菌5 m 50 m，形成芽孢隨空氣擴(kuò)散，不耐熱病毒小于0.1 m，一般不耐熱-9-微生物分布特點(diǎn)氣源性微生物革蘭氏陽性菌較多它們可形成芽孢水源性則革蘭氏陰性菌居多不會(huì)形成芽孢，耐熱性差但會(huì)產(chǎn)生細(xì)菌內(nèi)毒素G+G-10-芽孢及其特點(diǎn)（一）當(dāng)某些細(xì)菌遇到不良生存環(huán)境條件時(shí)，為保護(hù)自身，在細(xì)胞內(nèi)形成一外壁厚而堅(jiān)硬的休眠體，該休眠體即稱芽孢（Spore）或孢子。對(duì)不良環(huán)境如熱、化

3、學(xué)消毒劑的耐受性遠(yuǎn)高于生長(zhǎng)態(tài)細(xì)胞環(huán)境條件適宜，恢復(fù)生長(zhǎng)和繁殖-11-芽孢及其特點(diǎn)（二）耐熱80 下長(zhǎng)期存活100 下有相當(dāng)高的存活率100 以上死亡過程符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程影響芽孢耐熱性的因素芽孢存在的介質(zhì)受熱時(shí)的濕度-12-熱對(duì)微生物的作用當(dāng)高溫破壞了細(xì)胞中起生命作用的蛋白質(zhì)、酶及核酸時(shí)，細(xì)胞死亡。實(shí)驗(yàn)證明微生物受熱死亡速度符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，簡(jiǎn)稱對(duì)數(shù)規(guī)則-13-微生物存活數(shù)與滅菌時(shí)間關(guān)系圖 半對(duì)數(shù)座標(biāo)Y軸：活微生物數(shù)量的對(duì)數(shù)X軸：時(shí)間為10進(jìn)制普通座標(biāo)tlgN102030123-14-芽孢的耐熱參數(shù)：D值指一定溫度下將微生物殺滅90 或下降一個(gè)對(duì)數(shù)單位所需要的時(shí)間。lgNt1234t1t2D

4、D=t2-t1單位：分鐘-15-滅菌溫度對(duì)D值的影響 滅菌溫度低時(shí)，達(dá)到同一滅菌效果的時(shí)間就長(zhǎng)115121125lgNtlgN=1D125D121D115-16-F0值：達(dá)到同一滅菌效果的概念 F0值即標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間指產(chǎn)品在滅菌過程中獲得的與標(biāo)準(zhǔn)參照條件（121）相同滅菌效果的曝?zé)釙r(shí)間lgNtLgNoLgNt121117LgNFot1t2-17-不同滅菌溫度下的滅菌率滅菌溫度 滅菌率L1000.0081050.0251120.1261150.2511160.3161180.5011200.7941211.0001221.251231.59滅菌率：為達(dá)到與某一溫度下滅菌1分鐘相同的滅菌效果，在12

5、1下滅菌所需要的滅菌時(shí)100滅菌時(shí)1分鐘，相當(dāng)于121 滅菌0.008分鐘，即Fo值為0.008分鐘105滅菌40分鐘時(shí)，F(xiàn)o約為 1分鐘，能使D值為1分鐘的芽孢數(shù)量下降1個(gè)對(duì)數(shù)單位lgN2345-2-3-41-5-6-101234576891012分11-lgSAL F0/D lgN0SAL: 無菌保證水平N0:滅菌前微生物污染量無菌保證水平與F0、D值及帶菌量的關(guān)系-18-19-滅菌過程的Fo 示意-20-“無菌”的標(biāo)準(zhǔn)及理論“每批產(chǎn)品中，污染品概率不得超過一百萬分之一”，無菌的這一量化標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)當(dāng)可以用試驗(yàn)來證明的。用無菌檢查法顯然是不可能的。然而，每瓶產(chǎn)品微生物存活的概率卻可計(jì)算的。這就需

6、要測(cè)試產(chǎn)品滅菌前微生物污染數(shù)、D值，使用對(duì)數(shù)規(guī)則，并用生物指示劑試驗(yàn)來證實(shí)。量化指標(biāo) + 計(jì)算 + 試驗(yàn)，使無菌標(biāo)準(zhǔn)成為工業(yè)界可執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn) -21-無菌保證水平舉例假定滅菌開始時(shí)產(chǎn)品中的污染微生物總數(shù)（N0）為100cfu/瓶，污染微生物的耐熱參數(shù)（D）為1分鐘，要達(dá)到藥典規(guī)定的SAL的標(biāo)準(zhǔn)，滅菌F0值應(yīng)達(dá)到多少？相當(dāng)于121 和115 下滅菌多少分鐘？答：F0=（-lgSALlgN0）D =（6+ lg100）1= 8分鐘，需在121下滅菌8分鐘。 換算成115 下的滅菌時(shí)間是： F0 /L115=8/0.25=32分鐘。-22-某復(fù)方氨基酸注射液采用110，30分鐘的滅菌程序，起始污染微生

7、物仍為100cfu/瓶，D值為0.5分鐘，請(qǐng)計(jì)算無菌保證值和殘存微生物污染的概率。答：-lgSAL= F0/D - lgN0 = L110t /D - lg100 = 0.0830/0.5-2 = 2.8殘存微生物的概率SAL為10-2.80.00158通過無菌檢查的概率為(1-0.00158)20=0.969無菌保證水平舉例二-23-第二部分實(shí)際應(yīng)用滅菌工藝的選擇歐盟滅菌工藝決策樹-24-能否121，15分鐘 濕熱滅菌121，15分鐘濕熱滅菌是否能否采用F08的濕熱滅菌，以達(dá)到SAL10-6采用F08的濕熱滅菌，以達(dá)到SAL10-6是否能否對(duì)藥液除菌過濾藥液除菌過濾及無菌灌封無菌原料，無菌配

8、制無菌灌封是否-25-滅菌工藝與滅菌前微生物控制的關(guān)系滅菌工藝滅菌前微生物風(fēng)險(xiǎn)與控制要求類別過度殺滅F012低，不必每批監(jiān)控污染菌最終滅菌工藝，無菌保證值6殘存概率F08高，應(yīng)每批監(jiān)控污染菌，盡量加入除菌過濾器，應(yīng)有原料微生物標(biāo)準(zhǔn)F01.0 滅菌設(shè)備的狀態(tài)和維護(hù)關(guān)鍵儀表的校驗(yàn)滅菌工藝再驗(yàn)證狀態(tài)設(shè)備工作日志、故障、修理、確認(rèn)設(shè)備變更管理設(shè)備預(yù)修計(jì)劃和實(shí)施防止二次污染系統(tǒng)的日常檢查方法與記錄-55-滅菌現(xiàn)場(chǎng)管理防止混淆的措施滅菌過程中設(shè)備故障中止滅菌程序的管理措施-56-57-總結(jié)細(xì)菌芽孢死亡規(guī)律符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程無菌檢查有明顯的局限性藥典規(guī)定最終滅菌產(chǎn)品的污染概率不超過百萬分之一，即無菌保證水平SAL不超過10-6-lgSAL F0/D lgN0F0值標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間D值微生物耐熱參數(shù)N0滅菌開始前微生