1、微生物檢驗(yàn)(jinyn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)把控湖南省第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科湖南中醫(yī)藥大學(xué)臨床(ln chun)醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)教研室黃露萍共八十三頁(yè)2 標(biāo)本采集與運(yùn)送環(huán)節(jié) 細(xì)菌的分離培養(yǎng) 涂片(t pin)、染色、鏡檢技術(shù)規(guī)范共八十三頁(yè)一、標(biāo)本(biobn)采集和運(yùn)送標(biāo)本采集和運(yùn)送是細(xì)菌培養(yǎng)成功的最最重要的環(huán)節(jié)由于標(biāo)本的采集和運(yùn)送常有護(hù)士(h shi)或醫(yī)生或病人自己完成，所以也是最不容易把控的環(huán)節(jié)造成的后果是：陽(yáng)性率低、假陽(yáng)性（污染造成，對(duì)病人危害最大）共八十三頁(yè)（一）痰標(biāo)本(biobn)的采集采集時(shí)間：用抗生素前采集方法： 1.咳痰： 咳痰前,患者用無(wú)菌生理鹽水漱口；咳出深部痰，勿留取唾液和鼻咽腔分泌物。

2、2.氣管吸出物 :當(dāng)氣管插管的患者出現(xiàn)肺炎癥狀時(shí)，從氣管中吸痰留取氣管吸出物標(biāo)本。 3.氣管鏡：可采集到感染部位高質(zhì)量的標(biāo)本，包括支氣管肺泡(fipo)灌洗液標(biāo)本（BAL）、支氣管灌洗液標(biāo)本(BS)、保護(hù)毛刷標(biāo)本（PSB）及支氣管穿刺活檢標(biāo)本，均由呼吸科醫(yī)生或經(jīng)培訓(xùn)醫(yī)生采集。 4.誘導(dǎo)痰（通常不用于細(xì)菌培養(yǎng)）標(biāo)本運(yùn)送：在1h-2h內(nèi)室溫關(guān)至微生物室驗(yàn)室。 共八十三頁(yè)篩選并拒收下呼吸道細(xì)菌(xjn)培養(yǎng)標(biāo)本拒收24h內(nèi)重復(fù)采集的痰細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本。唾液。鼻沖洗液和分泌物、鼻孔拭子。咽部標(biāo)本。未經(jīng)保護(hù)套管收集(shuj)的支氣管刷培養(yǎng)標(biāo)本。痰的厭氧菌培養(yǎng)標(biāo)本。除支氣管穿刺吸出物、PSP、活檢標(biāo)本、胸水

3、或其他末經(jīng)污染以外的標(biāo)本做厭氧菌培養(yǎng)均不合格。誘導(dǎo)痰：此標(biāo)本只適用于檢測(cè)卡氏肺孢子菌和結(jié)核分枝桿菌，對(duì)其他病原菌檢出效果差。共八十三頁(yè)（二）泌尿標(biāo)本(biobn)的采集采集時(shí)間：多數(shù)藥物從尿道排泄，所以不管用哪種方法都應(yīng)在用藥前采集，標(biāo)本管不應(yīng)含防腐劑和消毒劑。要盡量采集晨尿，使尿液在膀胱內(nèi)潴留一夜或潴留至少4h以上，這樣可降低假陰性率。恥骨弓上穿刺采集尿 - 此法為“金標(biāo)準(zhǔn)”。直接膀胱導(dǎo)尿，可導(dǎo)致繼發(fā)性感染，一般不推薦此法清潔中段尿：采集中段尿時(shí)要先用肥皂清洗(qngx)女性的外陰和男性的外生殖器包括包皮內(nèi)，然后用清水沖洗。長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿管的患者應(yīng)在更換新管時(shí)留取尿標(biāo)本。兒童尿液采集袋：此法培

4、養(yǎng)結(jié)果陰性更有意義。采集后的標(biāo)本應(yīng)立即送檢，不能2h送到的尿標(biāo)本，在保存和運(yùn)送中均需要4冷藏，且不能超過(guò)24小時(shí)。共八十三頁(yè)尿液標(biāo)本(biobn)拒收超過(guò)2h而未冷藏的尿液標(biāo)本。未提供采集時(shí)間及采集方法(fngf)的尿液標(biāo)本。過(guò)夜的標(biāo)本。不適于尿道感染診斷的導(dǎo)尿管尖的培養(yǎng)。來(lái)自導(dǎo)尿患者尿袋中的尿液。送檢時(shí)容器有滲漏的尿液。除恥骨弓上穿刺采集標(biāo)本以外的申請(qǐng)做厭氧菌培養(yǎng)的尿液。 如果以上不合格標(biāo)本臨床要求必須培養(yǎng)時(shí)，要求在報(bào)告中注明，并強(qiáng)調(diào)此培養(yǎng)結(jié)果僅供參考。共八十三頁(yè)（三）分泌物的采集(cij)1、對(duì)開(kāi)放性病灶的采集：如眼結(jié)膜膿性分泌物、扁桃體、外耳道、手術(shù)后切口、導(dǎo)管治療感染、瘺管內(nèi)膿液、生殖

5、道分泌物等均屬于開(kāi)放性病灶。應(yīng)先用滅菌生理鹽水沖洗(chngx)表面污染菌，去除舊的分泌物，用滅菌拭子采集病灶深部的分泌物，也可取感染部位下的組織送檢。共八十三頁(yè)（三）分泌物的采集(cij)2、閉鎖性膿腫：如淋巴膿腫、肺膿腫、肝膿腫、腹腔膿腫、盆腔膿腫等，對(duì)封閉的膿腫常采用穿刺(chunc)或引流的的方法采樣，應(yīng)在用藥前采集，應(yīng)注意膿液的氣味、性狀、顏色注意厭氧菌存在的可能。不能及時(shí)送檢應(yīng)運(yùn)用輸送培養(yǎng)基。共八十三頁(yè)（四）便標(biāo)本(biobn)的采集1、采集時(shí)間：腹瀉患者應(yīng)在用藥前、急性期采集；沙門(mén)菌感染、腸熱癥應(yīng)在2周內(nèi)采；厭氧菌出現(xiàn)癥狀即采集。2、采集方法：自然排便者可用小木棒挑取有膿血和黏液

6、的部位的糞便2-3克，如液狀糞便取絮狀物盛于無(wú)菌的、密封的、不吸水的、容器(rngq)內(nèi)或直接盛于增菌液或保存液中；對(duì)不易獲得糞便患者及幼兒，可用直腸拭子采集后置保存液或輸送培養(yǎng)基中送檢。共八十三頁(yè)（五）血液(xuy)及骨髓標(biāo)本的采集1、采血時(shí)間：盡可能在用抗生素前，心內(nèi)膜炎例外。2、采血量：采一次或采一瓶是錯(cuò)誤的，至少應(yīng)采一套2瓶，分需氧和厭氧。2瓶血量不少于16-20ml，先將10ml注入需氧瓶，再將剩余血采血注入?yún)捬跗俊?、采血方法：不要與血?dú)夂脱翗?biāo)本(biobn)一起采血；不推薦血入瓶前換針頭；不推薦靜脈血直接入瓶；不宜在靜脈導(dǎo)管或靜脈留置口采血。共八十三頁(yè)（五）血液(xuy)及骨髓

7、標(biāo)本的采集4、采血間隔(jin g)：如第一次采集2套（4瓶）血培養(yǎng)標(biāo)本，在以后的2-5天不必采血，但除外心內(nèi)膜炎和導(dǎo)管相關(guān)性敗血癥。5、兒童：采血量是總血量的1%。6、延遲培養(yǎng)瓶處理: 延遲培養(yǎng)瓶不要放冰箱或孵箱，放常溫，盡早送往臨床細(xì)菌室。7、皮膚消毒液推薦：建議先用70-80%異丙醇去脂，再用葡萄糖酸氯乙定消毒。共八十三頁(yè)關(guān)于(guny)夜班血培養(yǎng)的送檢培養(yǎng)瓶夜班(ybn)未能及時(shí)送到檢驗(yàn)科，存在室溫即可，不能冷藏也不能放入35 的溫箱 。過(guò)夜不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響，但仍需盡快送檢。冷藏可能導(dǎo)致對(duì)溫度敏感的耐瑟氏菌等死亡。溫箱會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌進(jìn)入生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，從而錯(cuò)過(guò)檢測(cè)的最佳時(shí)期。共八十三頁(yè)血標(biāo)本

8、(biobn)采集間隔時(shí)間對(duì)于非持續(xù)性菌血癥，同時(shí)或短時(shí)間內(nèi)采集23套血培養(yǎng)，因?yàn)轶w內(nèi)巨噬細(xì)胞吞噬系統(tǒng)會(huì)在1530min內(nèi)清除掉進(jìn)入人體內(nèi)的細(xì)菌?？梢杉毙孕膬?nèi)膜炎患者要立即取血作血培養(yǎng)，30分鐘內(nèi)完成3套血培養(yǎng)的采集，采集后立即進(jìn)行抗菌藥的經(jīng)驗(yàn)(jngyn)治療。如果24小時(shí)內(nèi)報(bào)告陰性，則繼續(xù)采集2套血培養(yǎng)?？梢傻膩喖毙孕膬?nèi)膜炎患者每間隔30分鐘至1h采集1套，連續(xù)采集3套標(biāo)本。如果24小時(shí)內(nèi)報(bào)告陰性，則繼續(xù)采集2套血培養(yǎng)。共八十三頁(yè)腦脊液標(biāo)本(biobn)的采集無(wú)菌操作，由醫(yī)生腰椎穿刺采樣最少1 mL，最好5 mL打入3個(gè)小管中，以第一根小管送檢(sn jin)培養(yǎng) 即時(shí)送檢，一般不能超過(guò)1

9、小時(shí)。絕對(duì)不能冷藏！共八十三頁(yè)二、分離培養(yǎng)(piyng)基本操作規(guī)范 合格的標(biāo)本是保證培養(yǎng)成功的重要條件，但如果(rgu)沒(méi)有適宜的分離培養(yǎng)基、培養(yǎng)環(huán)境以及正確的處理方法同樣不能獲得好的結(jié)果，為此制定如下基本操作規(guī)范以保證致病細(xì)菌分離成功。共八十三頁(yè)（一）平板(pngbn)的劃線分離方法17共八十三頁(yè)18共八十三頁(yè)19共八十三頁(yè)分區(qū)(fn q)劃線法第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)共八十三頁(yè)圖示共八十三頁(yè)2022/7/2622連續(xù)(linx)劃線法共八十三頁(yè)Maki 滾動(dòng)(gndng)法共八十三頁(yè)24共八十三頁(yè)錯(cuò)誤(cuw)涂法共八十三頁(yè)（二）正確(zhngqu)的

10、培養(yǎng)基放置方法1、加蓋、倒置（底朝上） 3、放置于合適的培養(yǎng)(piyng)環(huán)境2、不可疊加太高（不超過(guò)4個(gè)） 共八十三頁(yè)（三）各種標(biāo)本的培養(yǎng)(piyng)基及培養(yǎng)(piyng)條件 1、痰標(biāo)本 培養(yǎng)基：5%羊血瓊脂、5%兔血巧克力瓊脂、中國(guó)(zhn u)蘭瓊脂。 培養(yǎng)環(huán)境：5%羊血瓊脂、5%兔血巧克力瓊脂、置5-7%CO2、35環(huán)境培養(yǎng)，其他培養(yǎng)基置35空氣培養(yǎng)。 真菌培養(yǎng)：沙保弱瓊脂培養(yǎng)基，28空氣培養(yǎng)。共八十三頁(yè)2、尿標(biāo)本(biobn) 培養(yǎng)基：5%羊血瓊脂、中國(guó)蘭、伊紅美藍(lán)瓊脂或CLED平板。 菌落計(jì)數(shù)：每個(gè)標(biāo)本都要做，用加樣器或定量 接種環(huán)取樣本10ul分別接種于上述培養(yǎng)基均勻 涂布整

11、個(gè)平皿，次日作菌落計(jì)數(shù)。 培養(yǎng)(piyng)環(huán)境：35空氣環(huán)境培養(yǎng)(piyng) 共八十三頁(yè)3、大便(dbin)標(biāo)本培養(yǎng)基：中國(guó)蘭、SS瓊脂。 培養(yǎng)(piyng)環(huán)境：35空氣環(huán)境培養(yǎng)(piyng)。 疑似偽膜性腸炎：5%羊血瓊脂、沙保弱 瓊脂，5%羊血瓊脂置35空氣環(huán)境培 養(yǎng)。沙保弱瓊脂置28空氣環(huán)境培養(yǎng)。其他特殊腸道致病菌培養(yǎng)按國(guó)家CDC要求執(zhí)行。 共八十三頁(yè)4、分泌物標(biāo)本(biobn) 培養(yǎng)基： 5%羊血瓊脂、中國(guó)(zhn u)蘭。 培養(yǎng)環(huán)境：35，空氣環(huán)境培養(yǎng)。共八十三頁(yè)5、靜脈導(dǎo)管尖端(jindun)標(biāo)本 靜脈導(dǎo)管尖端 ： 培養(yǎng)靜脈導(dǎo)管尖端是為了明確細(xì)菌來(lái)源。最常用的方法是半定量的方

12、法，方法是用5cm長(zhǎng)的導(dǎo)管末端部分在血液瓊脂平板上滾動(dòng)4次。培養(yǎng)物出現(xiàn)15個(gè)以上(yshng)的菌落，提示有潛在的導(dǎo)管相關(guān)性感染。共八十三頁(yè)6、腦脊液標(biāo)本(biobn) 培養(yǎng)基：5%羊血瓊脂、5%兔血巧克力瓊脂、葡萄糖肉湯 培養(yǎng)(piyng)環(huán)境：置5 % CO2、35環(huán)境培養(yǎng)(piyng)。共八十三頁(yè)7、膽汁或胸水或腹水(fshu)標(biāo)本 培養(yǎng)基：如標(biāo)本量大時(shí)可按血液培養(yǎng)方法直接取16-20ml分別種入需氧和厭氧培養(yǎng)瓶。如標(biāo)本 量有限，可接種5%羊血瓊脂(qingzh)、中國(guó)蘭、葡萄糖肉湯。 培養(yǎng)環(huán)境：35空氣環(huán)境培養(yǎng)。共八十三頁(yè)8、膿液標(biāo)本(biobn) 培養(yǎng)基：5%羊血瓊脂、中國(guó)(zhn

13、u)蘭。 培養(yǎng)環(huán)境：35，空氣環(huán)境培養(yǎng)。共八十三頁(yè)9、生殖道標(biāo)本(biobn)普通細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本接種(jizhng)： 培養(yǎng)基：5%羊血瓊脂和5%兔血巧克力瓊脂。 培養(yǎng)環(huán)境：置5%CO2、35環(huán)境培養(yǎng)。淋球菌標(biāo)本的接種： 培養(yǎng)基：接種于專用MTM平皿上。 培養(yǎng)環(huán)境：置5%CO2、35環(huán)境培養(yǎng)。共八十三頁(yè)36共八十三頁(yè)37共八十三頁(yè)三、細(xì)菌涂片、染色與鏡檢操作(cozu)規(guī)范共八十三頁(yè)共八十三頁(yè)1、標(biāo)本(biobn)涂片 接種(jizhng)平板后用剛接種(jizhng)平板的拭子涂抹玻片，如為痰，重新挑取膿性或無(wú)血部位痰或氣管吸出物涂抹玻片，涂片應(yīng)薄且均勻（透過(guò)涂片部位可看清楚下面印刷品的字跡）

14、。共八十三頁(yè)2、固定(gdng)使細(xì)菌的細(xì)胞凝固，使菌體與玻片粘得更牢固 可改變菌體對(duì)染料的通透性 加熱(ji r)固定可殺死細(xì)菌，比較安全自然干燥或恒溫干燥器上干燥后，經(jīng)甲醇固定或火焰快速固定3次。 共八十三頁(yè)3、染 色臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備最基本的染色技術(shù)(jsh) 革蘭氏染色 抗酸染色 墨汁染色共八十三頁(yè)涂片(t pin)干燥(gnzo)固定 染色水洗、吸干鏡檢染色一般程序制備涂片標(biāo)本染色共八十三頁(yè)革蘭染色(rns)革蘭染色原理 細(xì)菌的等電點(diǎn)較低，約在pH 25之間，故在中性、堿性或弱堿性溶液(rngy)中，菌體蛋白質(zhì)電離后帶負(fù)電荷，易與帶正電荷的堿性染料如龍膽紫及堿性復(fù)紅等結(jié)合，使細(xì)菌被染成

15、紫色或紅色。共八十三頁(yè)革蘭染色(rns)的步驟45共八十三頁(yè)革蘭氏染色(rns)注意事項(xiàng) 革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色，革蘭染色脫色時(shí)間因選用不同的脫色劑而異。如脫色 過(guò)度，革蘭氏陽(yáng)性菌也可被脫色而染成陰性 菌；如脫色時(shí)間過(guò)短，革蘭氏陰性菌也會(huì)被 染成革蘭氏陽(yáng)性菌。 菌齡也有影響。若菌齡太老，由于(yuy)菌體死亡 或自溶常使革蘭氏陽(yáng)性菌轉(zhuǎn)呈陰性反應(yīng)。 不要涂片太厚，會(huì)造成假陰性或假陽(yáng)性。 共八十三頁(yè)革蘭染色報(bào)告必須(bx)包括染色反應(yīng)或微生物種類和類別描述物種的形態(tài)或結(jié)構(gòu) 如革蘭染色見(jiàn)到革蘭陽(yáng)性球菌，呈葡萄(p to)狀排列； 又如革蘭染色見(jiàn)到真菌小分生孢子及菌絲。共八十三頁(yè)用革蘭氏染色來(lái)

16、評(píng)估呼吸道標(biāo)本(biobn)是否合格10鱗狀上皮細(xì)胞/LPF拒收(j shu)！彈性纖維，中性粒細(xì)胞多，鱗狀上皮細(xì)胞少，有代表性的好標(biāo)本共八十三頁(yè)纖毛(xinmo)拄狀上皮細(xì)胞共八十三頁(yè) 紅色(hngs)革蘭陰性菌、紫色革蘭陽(yáng)性菌共八十三頁(yè)呈堆或四聯(lián)排列的革蘭陽(yáng)性球菌(qijn)提示葡萄球菌(qijn) 革蘭氏陽(yáng)性(yngxng)球菌共八十三頁(yè)鏈狀的革蘭陽(yáng)性球菌：提示鏈球菌短鏈，6個(gè)細(xì)胞）提示化膿鏈球菌或草綠色鏈球菌 革蘭氏陽(yáng)性球菌共八十三頁(yè)外型奇特的酵母菌，不要遺忘革蘭陰性(ynxng)桿菌。共八十三頁(yè)革蘭氏陰性(ynxng)球菌共八十三頁(yè)細(xì)胞(xbo)內(nèi)細(xì)菌共八十三頁(yè)共八十三頁(yè)共八十三頁(yè)5

17、8共八十三頁(yè)痰標(biāo)本(biobn)報(bào)告原則a) 白細(xì)胞和優(yōu)勢(shì)菌（不粘附在鱗狀上皮細(xì)胞上）有助于預(yù)測(cè)肺部致病菌，應(yīng)該報(bào)告； b) 每個(gè)油鏡視野可見(jiàn)大于10個(gè)或小于10個(gè)單一形態(tài)細(xì)菌并與白細(xì)胞相關(guān)，有助于預(yù)測(cè)肺部致病菌，應(yīng)該報(bào)告；涂片中少于1個(gè)菌/20個(gè)油鏡視野的少量細(xì)菌不必報(bào)告； c) 雖然由兩種致病菌同時(shí)引起的感染不常見(jiàn)，但當(dāng)兩種形態(tài)的細(xì)菌均與白細(xì)胞相關(guān)時(shí)也應(yīng)報(bào)告；d) 即使涂片未見(jiàn)細(xì)菌時(shí)仍有助于評(píng)價(jià)患者(hunzh)狀況，可能隱藏著某些特殊菌，如軍團(tuán)菌、內(nèi)源性真菌、結(jié)核分枝桿菌或其他可引起非典型肺炎的致病菌； e) 質(zhì)量合格的標(biāo)本中，涂片有正常菌群及多種細(xì)菌（通常白細(xì)胞內(nèi)有空泡或液泡），提示有

18、吸入性肺炎，應(yīng)該報(bào)告。共八十三頁(yè)60顯微鏡觀察(gunch)革蘭染色結(jié)果 痰涂片在低倍物鏡下檢測(cè)20個(gè)40個(gè)視野，氣管吸出物涂片分別在低倍鏡視野（LPF）和油鏡視野（OIF）下觀察。計(jì)算有細(xì)胞(xbo)視野的細(xì)胞(xbo)平均數(shù)量，記錄鱗狀上皮細(xì)胞(xbo)（SECs）和多形核白細(xì)胞（WBCs)的數(shù)量。 注1：低倍鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)：1+（偶見(jiàn)）：少于1個(gè)/LPF；2+（少量）：1個(gè)9個(gè)/LPF；3+（中量）：10個(gè)25個(gè)/LPF；4+（大量）：大于25個(gè)/LPF. 注2：油鏡下細(xì)菌計(jì)數(shù)：1+（偶見(jiàn)）：少于1個(gè)/ OIF；2+（少量）：1個(gè)5個(gè)/ OIF；3+（中量）：6個(gè)30個(gè)/OIF；4+（大量

19、）：大于30個(gè)/OIF. 共八十三頁(yè)抗酸染色(rns)抗酸染色原理(yunl):分枝桿菌細(xì)胞壁含脂質(zhì)較多,其中主要成分為分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色時(shí)與石炭酸復(fù)紅結(jié)合牢固,能抵抗酸性乙醇的脫色作用,因此抗酸菌能保持復(fù)紅的顏色,達(dá)到染色目的。共八十三頁(yè)621、涂片包括(boku)涂片、干燥、固定三步。 涂片 干燥 固定抗酸染色(rns)染色(rns)步驟共八十三頁(yè)63抗酸染色(rns)步驟2、染色(rns)包括初染、脫色、復(fù)染三步。 沖洗 干燥 油鏡觀察石炭酸復(fù)紅維持 3-5 3%鹽酸酒精30 1 美藍(lán)復(fù)染1 沖洗沖洗初染脫色復(fù)染共八十三頁(yè)64抗酸菌呈紅色，常堆積成團(tuán)，排列無(wú)序，偶呈分枝(fn

20、 zh)狀生長(zhǎng)。背景及非抗酸性細(xì)菌呈蘭色。共八十三頁(yè) 抗酸染色(rns)注意事項(xiàng) 無(wú)菌操作 涂片厚度要適中 染色時(shí)間要充分 脫色是關(guān)鍵步驟，要徹底 初染加熱(ji r)勿沸騰勿干涸。共八十三頁(yè)形態(tài)：細(xì)長(zhǎng)，略彎曲的桿菌，常堆積成團(tuán)，排列無(wú)序，偶可見(jiàn)(kjin)呈分枝狀生長(zhǎng)，無(wú)鞭毛和芽胞。染色性：不易著色，抗酸染色陽(yáng)性。菌體呈紅色，背景及非抗酸性細(xì)菌呈蘭色。結(jié)核(jih)分枝桿菌共八十三頁(yè)結(jié)核(jih)分枝桿菌共八十三頁(yè)結(jié)核(jih)分枝桿菌共八十三頁(yè)69共八十三頁(yè)涂片結(jié)果(ji gu)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)陰性300 視野0條報(bào)告菌數(shù)300 視野18條陽(yáng)性1100視野39條陽(yáng)性210視野19條陽(yáng)性3每視野19

21、條陽(yáng)性4每視野 10條共八十三頁(yè)抗酸染色涂片結(jié)果(ji gu)報(bào)告抗酸染色報(bào)告應(yīng)顯示找到或未找到或可疑抗酸桿菌三種結(jié)果(ji gu)，報(bào)告中應(yīng)以加號(hào)體現(xiàn)標(biāo)本中抗酸桿菌的存在量。如找到抗酸桿菌+；見(jiàn)到染色不典型抗酸桿菌+，建議再送標(biāo)本。不能報(bào)告找到結(jié)核桿菌但可報(bào)告未找到結(jié)核桿菌71共八十三頁(yè)結(jié)核菌檢測(cè)(jin c)方法抗酸染色結(jié)核桿菌培養(yǎng)結(jié)核菌素試驗(yàn)結(jié)核桿菌血清學(xué)檢查結(jié)核桿菌的抗原、抗體(kngt)檢查結(jié)核桿菌基因檢測(cè)（PCR）72共八十三頁(yè)73墨汁(mzh)負(fù)染色目的 墨汁負(fù)染色法觀察新型(xnxng)隱球菌的形態(tài)。原理 新型隱球菌的莢膜較厚，一般不易著色，同時(shí)菌體折光性較強(qiáng)，用墨汁負(fù)染色法可

22、在黑色背景下看到透亮菌體。共八十三頁(yè)墨汁(mzh)染色染色步驟取腦脊液第一管標(biāo)本3000r離心15分鐘，移去上清液，試管內(nèi)留下0.5ml左右，混勻。分別取2滴混勻了的腦脊液和1滴墨汁放入清潔小試管底部，混勻。取一張清潔載玻片，把2滴腦脊液和1滴墨汁的混合物混勻放在載玻片，把蓋玻片覆蓋于菌液上，避免(bmin)產(chǎn)生氣泡。放置2分鐘左右后鏡檢。共八十三頁(yè)墨汁(mzh)負(fù)染色法鏡檢隱球菌可于黑色背景下見(jiàn)一圓形或卵圓形透亮菌體，外有一層透明的寬厚莢膜，莢膜較菌體大1-3倍，折光性強(qiáng)。急球菌大小不一，有的孢子生芽，芽頸甚細(xì)。微調(diào)觀察有雙圈。在低倍鏡下，把光線調(diào)暗，并調(diào)整微調(diào)，能清楚(qng chu)看到菌體有雙層反射光圈。菌體次中央或偏側(cè)有一空泡。共八十三頁(yè)新型隱球菌(qijn)形態(tài)酵母菌，芽生繁殖(fnzh)在腦脊液、痰液組織中