1、芽孢桿菌屬的介紹 第二十二章 芽胞桿菌屬芽胞桿菌屬（Bacillus）200多個(gè)種，致病的的5個(gè)種 炭疽芽胞桿菌（B.anthracis） 蠟樣芽胞桿菌（B.cereus） 蕈狀芽胞桿菌（B.mycoides） 巨大芽胞桿菌（B.megaterium） 蘇云金芽胞桿菌（B.thuringiensis）2一、炭疽芽胞桿菌（Bacillus anthracis，B.anthraci ) 炭疽是人畜共患的急性傳染病 主要是牛、羊等食草類(lèi)動(dòng)物的傳染病，人可通過(guò)接觸或攝食病畜及畜產(chǎn)品而感染 皮膚炭疽、腸炭疽、肺炭疽等， 并發(fā)敗血癥，甚至炭疽性腦膜炎3形態(tài)染色:致病菌中最大的G+桿菌，兩端平切、竹節(jié)狀有毒

2、株可有明顯莢膜生物學(xué)性狀 炭疽芽胞桿菌 亞甲基藍(lán)染色 1000 革蘭染色 10004芽胞橢圓形，小于菌體，位于菌體中央多在有氧條件下形成，2530，在培養(yǎng)基中、土壤內(nèi)、動(dòng)物尸體解剖后暴露在空氣中，都易形成芽胞在活體或完整未解剖尸體內(nèi)不形成芽胞，尸 體嚴(yán)禁解剖5培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧，生長(zhǎng)條件不嚴(yán)格，最適溫 度3035普通培養(yǎng)基扁平、粗糙、不透明、灰白色、 無(wú)光澤，邊緣不整齊的菌落，低倍鏡下菌落邊 緣呈卷發(fā)狀6BAP：1215h不溶血，1824h輕微溶血其他需氧芽胞桿菌大多溶血明顯而快速炭疽桿菌在血瓊脂平板中菌落 7肉湯絮狀沉淀生長(zhǎng)明膠371824h表面液化成漏斗狀，由于細(xì)菌沿穿刺線向四周擴(kuò)散

3、形成倒松樹(shù)狀。NaHCO3BAP： -有毒株5%CO2、372448h、產(chǎn)生莢膜 呈黏液型菌落，挑取時(shí)呈粘絲狀(鑒別要點(diǎn)) -無(wú)毒株粗糙型菌落8生化反應(yīng)：分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、蕈糖，有些菌能遲緩發(fā)酵甘油和水楊素產(chǎn)酸不產(chǎn)氣水解淀粉、還原硝酸鹽不產(chǎn)生吲哚和硫化氫、不利用檸檬酸鹽、不 分解尿素在牛乳中生長(zhǎng)24天牛乳凝固緩慢胨化觸酶（+）、卵磷脂酶弱（+）9 抗原構(gòu)造：菌體多糖抗原： -與毒力無(wú)關(guān)，耐熱、耐腐敗，長(zhǎng)時(shí)間煮沸仍能與特異性抗體發(fā)生環(huán)狀沉淀反應(yīng)（Ascoli熱沉淀反應(yīng)）。 -特異性不高，能與其他需氧芽胞桿菌、14型肺炎鏈球菌、人A血型抗原發(fā)生交叉反應(yīng)。10莢膜多肽抗原： -與毒力有關(guān)，有

4、抗吞噬作用，有利于細(xì) 菌生長(zhǎng)和擴(kuò)散 -莢膜腫脹試驗(yàn)，對(duì)本菌鑒定有意義芽胞抗原： 有免疫原性和血清學(xué)診斷價(jià)值11炭疽毒素：-保護(hù)性抗原（PA)、致死因子（LF）、水腫 因子（EF）三個(gè)組分-單獨(dú)皆無(wú)致病性，與PA結(jié)合才顯示出致病性-具有抗吞噬和免疫原性12抵抗力：-芽胞抵抗力很強(qiáng)，煮沸10min或干熱140 3h才能殺滅-在干燥土壤中或皮毛中常溫下存活數(shù)十年致 病力不減，牧場(chǎng)一旦污染，傳染性可持續(xù)數(shù) 十年-生物武器13-芽胞對(duì)化學(xué)消毒劑抵抗力不一，對(duì)碘和氧化 劑較敏感，常用以下方法殺菌： 1：2500碘 10min、 3%H2O2 1h、 4%高錳酸鉀 15min、 0.5%過(guò)氧乙酸 10min

5、 -對(duì)磺胺、青霉素、鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、 氯酶素均敏感14臨床意義 炭疽是人畜共患的急性傳染病 主要是牛、羊等食草類(lèi)動(dòng)物的傳染病，人可通過(guò)接觸或攝食病畜及畜產(chǎn)品而感染 皮膚炭疽、腸炭疽、肺炭疽等， 并發(fā)敗血癥，甚至炭疽性腦膜炎15致病物質(zhì)莢膜：抗吞噬，有利于細(xì)菌在組織內(nèi)繁殖擴(kuò)散炭疽毒素：保護(hù)性抗原、致死因子、水腫因子16所致疾病 炭疽?。簜魅驹矗夯疾∈巢輨?dòng)物及其制品或被污染物傳播途徑：接觸皮膚炭疽 食用腸炭疽 吸入肺炭疽可并發(fā)敗血癥，死亡率極高1718乙類(lèi)傳染病發(fā)生肺炭疽按甲類(lèi)處理病后可獲得持久免疫力19要求快速檢出、分離鑒定病原菌，以利早期確診、查清疫源、及時(shí)治療和采取預(yù)防對(duì)策三、微生物

6、學(xué)檢驗(yàn)20標(biāo)本的采集與處理皮膚炭疽：病灶深部標(biāo)本肺炭疽：痰和血液腸炭疽：糞、嘔吐物腦膜炭疽：CSF、血液死于敗血癥的動(dòng)物，嚴(yán)禁宰殺和解剖，可消 毒皮膚后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局 限性病灶可取病變組織或附近淋巴結(jié)。21無(wú)雜菌污染標(biāo)本：直接接種肉湯增菌或固體培養(yǎng)基污染雜菌固體標(biāo)本：加10倍量生理鹽水充分浸泡，振 蕩1015min 、靜置10min，取懸液65水浴30min或 855min殺死雜菌，保留芽胞活性，再增菌和培養(yǎng)污染雜菌液體標(biāo)本：離心 ，棄上清液后，加0.5%洗滌 劑振蕩1015min ，離心取沉淀物增菌和分離培養(yǎng) 22生化反應(yīng)噬菌體裂解青霉素抑制毒力試驗(yàn)檢驗(yàn)程序皮毛、腐敗臟器等血

7、液Ascoli試驗(yàn)以NG制成懸液經(jīng)加溫或飽和尿素處理肉湯增菌培養(yǎng)BAP或戊烷脒平板2%兔血清肉湯4-8hG染色鏡檢菌落特征動(dòng)力觀察串珠試驗(yàn)確定報(bào)告莢膜腫脹試驗(yàn)23痰、嘔吐物、CSF及炎癥分泌物2%兔血清肉湯快速增菌374h莢膜腫脹試驗(yàn)直接涂片莢膜染色 G染色初步報(bào)告0.2ml注射小白鼠腹腔，8h后解剖涂片G染色、莢膜染色初步報(bào)告24涂片染色：-G染色、莢膜染色、芽胞染色初步報(bào)告-莢膜熒光抗體染色核酸檢測(cè)：核酸雜交分離培養(yǎng)：-BAP、戊烷脒多粘菌素B平板-2%兔血清肉湯增菌分離培養(yǎng)25鑒定試驗(yàn)：形態(tài)和菌落特征生化試驗(yàn):表11-1串珠試驗(yàn):-接種于含青霉素(0.050.5U/ml)的肉湯 中，37

8、 6h，大而均勻成串的圓球狀菌體-與青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成有關(guān)-類(lèi)炭疽無(wú)此現(xiàn)象26青霉素抑制試驗(yàn)：接種于含青霉素5、10、100U/ml瓊脂平板，3724h 生長(zhǎng) 受抑制不生長(zhǎng) 串珠和青霉素抑制聯(lián)合試驗(yàn)：兔血瓊脂平板抑菌環(huán)青霉素紙片27 噬菌體裂解試驗(yàn)：AP631炭疽噬菌體 NaHCO3毒力試驗(yàn)： 接種于含0.5%NaHCO3和10%馬血清的平板， 10%CO2、37、2448h 有毒株形成莢膜黏液型菌落 無(wú)毒株不形成莢膜粗糙型菌落 動(dòng)物試驗(yàn)： 小鼠、家兔或豚鼠皮下接種28植物凝集素試驗(yàn)：Ascoli熱沉淀試驗(yàn)：可作追溯性診斷29Plaque30二、 蠟樣芽胞桿菌(Bacillus cere

9、us, B. cereus )31形態(tài)與染色：- G+大桿菌-生長(zhǎng)6h后即形成圓形芽胞、位于 菌體中心或次末端、不突出菌體-菌體兩端平截，多數(shù)呈鏈狀排列-引起食物中毒的菌株多有周鞭 毛、無(wú)莢膜微生物特性32培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧營(yíng)養(yǎng)要求不高最適溫度3035普通瓊脂平板：菌落較大， 灰白色，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，有 蠟樣光澤33BAP 有溶血 卵黃平板生長(zhǎng)迅速，培養(yǎng)3h后，雖看不到菌落，但該菌可分解卵磷脂而形成白色的混濁環(huán)，稱乳光反應(yīng)或卵黃反應(yīng)34生化反應(yīng)：能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、水楊素、糊 精，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣能胨化牛乳，液化明膠，VP（+）、卵磷脂 酶（+） 多次傳代后生化特性?？筛淖?/p>

10、 35抵抗力：耐熱，肉湯中細(xì)菌需10020min才能殺死，食物中毒菌株的游離芽胞耐受10030min、干熱12060min才能殺死對(duì)氯霉素、紅霉素、慶大霉素敏感，對(duì)青霉素、磺胺、呋喃類(lèi)耐藥36臨床意義食物中毒含菌量達(dá)105/g以上嘔吐型耐熱腸毒素腹瀉型不耐熱腸毒素全眼球炎（外傷后）心內(nèi)膜炎、敗血癥和腦膜炎37夏、秋季多見(jiàn)食物有米飯、乳品、禽畜肉類(lèi)、果汁飲料等，大多為加熱烹調(diào)過(guò)的熟食在米飯中極易繁殖，由米飯受污染引起的食物中毒在國(guó)內(nèi)、外均為常見(jiàn)中毒食物大多無(wú)腐敗、變質(zhì)現(xiàn)象，感官性狀正常，應(yīng)引起注意38微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本采集： 可疑食物、糞便、嘔吐物，因食品暴露于空氣中，在一定程度都會(huì)受到本菌污染，

11、所以不能分離出該菌就認(rèn)為是引起食物中毒的病原菌。39確診由該菌引起的食物中毒必須：從食物中分離出菌數(shù)105CFU/g，提示本菌活躍生長(zhǎng)，構(gòu)成潛在危險(xiǎn)從可疑食物分離到的菌株與從病人糞便和(或)嘔吐物中分離到的菌株屬同一血清型40檢驗(yàn)程序嘔吐物、殘留食物等活菌計(jì)數(shù) 接種 普通瓊脂平板、BAP 、卵黃平板3718-24h純培養(yǎng)動(dòng)物試驗(yàn)（腸毒素測(cè)定）生化反應(yīng)血清凝集（分型）報(bào)告結(jié)果直接涂片染色鏡檢41檢驗(yàn)方法：直接鏡檢分離培養(yǎng)與活菌計(jì)數(shù) 普通瓊脂平板、BAP、卵黃平板鑒定與分型： 根據(jù)菌落特點(diǎn)、形態(tài)染色、生化反應(yīng)等初步鑒定 生化分型、血清分型、噬菌體分型，腸毒素檢測(cè)42第五節(jié) 棒狀桿菌屬43 棒狀桿菌

12、屬是一群革蘭染色陽(yáng)性桿菌，菌體形態(tài)特征是在其一端或兩端常呈棒狀膨大，故名，歸屬放線菌科。 棒狀桿菌屬概述44棒狀桿菌屬種類(lèi)繁多，主要有：白喉棒狀桿菌（C.diphtheriae）假白喉棒狀桿菌（C.pseudodiphtheriticum）干燥棒狀桿菌（C.xerosis）化膿棒狀桿菌（C.pyogenes）潰瘍棒狀桿菌（C.ulcerans）假結(jié)核棒狀桿菌（C.pseudotuberculosis）溶血棒狀桿菌（C.haemolyticum）J-K群棒狀桿菌（C.jeikeium-CDC group JK）45G+桿菌、一端或兩端膨大成棒狀染色不均勻，兩端濃染或有異染顆粒無(wú)鞭毛、無(wú)芽胞排列不

13、規(guī)則，呈柵欄狀白喉棒狀桿菌致病菌類(lèi)白喉棒狀桿菌條件致病菌46白喉棒狀桿菌 C.diphtheriae47一、生物學(xué)特性形態(tài)與染色: G +細(xì)長(zhǎng)微彎的桿菌 一端或兩端膨大呈棒狀 常排列呈V、L、X等文字形 異染顆粒形態(tài)上的鑒別特征 無(wú)莢膜、無(wú)芽胞、無(wú)鞭毛白喉棒狀桿菌異染顆粒 100048培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧，最適溫度3537營(yíng)養(yǎng)要求高，在含血液、血清、雞蛋的培養(yǎng)基上生 長(zhǎng)良好呂氏（Loeffler)血清斜面或雞蛋斜面： 生長(zhǎng)最快，6h即生長(zhǎng)，1012h長(zhǎng)出灰白色、 濕潤(rùn)、有光澤的光滑型菌苔/菌落，菌體形 態(tài)典型、異染顆粒明顯，連續(xù)傳代可保持形 態(tài)和產(chǎn)毒性能不變49 BAP中菌落BAP：菌落灰

14、白色、光滑型、 直徑12mm、有狹窄 溶血環(huán)（輕型）多次傳代后菌體變?yōu)榍?型50亞碲酸鉀BAP：選擇鑒別培養(yǎng)基黑色菌落鑒別依據(jù)不同菌型還原能力不同，呈現(xiàn)黑色或灰黑色 菌落根據(jù)菌落特征及生化反應(yīng)特點(diǎn)可將本菌分為： 重型、中間型、輕型白喉棒狀桿菌在亞碲酸鉀BAP中菌落51液體培養(yǎng)基：生長(zhǎng)較好，但菌型不同其生長(zhǎng)特點(diǎn)也不相同52生化反應(yīng)：分解葡萄糖、半乳糖、麥芽糖、果糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖、甘露糖，一般不分解蔗糖，吲哚 （-）、硝酸鹽還原（+）、觸酶（+）、氧化酶（-）、明膠液化（-）尿素（-）重型能分解淀粉、糖原、糊精，遲緩分解蔗糖53抵抗力：對(duì)干燥、寒冷和日光抵抗力較其他無(wú)芽胞細(xì)菌強(qiáng)，在干燥的假

15、膜中可生存3個(gè)月對(duì)濕熱和消毒劑敏感，5%石炭酸、1：1000升汞1min，1001min、6010min均可滅菌對(duì)青霉素、紅霉素等敏感，對(duì)磺胺不敏感54致病物質(zhì) (一)白喉外毒素毒力強(qiáng)，130ng/kg可使人死亡抗原性強(qiáng)編碼外毒素的tox基因-棒狀桿菌噬菌體二、臨床意義55作用機(jī)制： A亞單位可使細(xì)胞延伸因子-2（EF-2）滅活，影響蛋白質(zhì)的合成作用特點(diǎn)：毒性作用大，1分子能殺一個(gè)細(xì)胞作用于多種細(xì)胞，心肌、神經(jīng)細(xì)胞均有毒素受體腫瘤細(xì)胞對(duì)此毒素敏感56（二）索狀因子細(xì)菌表面的一種糖脂，能破壞細(xì)胞的線粒體，影響細(xì)胞的呼吸與磷酸化（三）K抗原-細(xì)胞壁外面的一種不耐熱糖蛋白-抗吞噬-有利于細(xì)菌在黏膜表

16、面的定植57所致疾病：白喉-急性呼吸道傳染病傳染源：患者及帶菌者傳播途徑：飛沫或污染臨床表現(xiàn)細(xì)菌-上呼吸道粘膜， 生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生毒素 細(xì)菌與毒素共同作用引起局部炎癥：炎性滲出，壞死，纖維蛋白 假膜窒息毒素血液全身中毒癥狀外周N-N炎：膈肌麻痹-呼吸困難 聲帶麻痹-聲音嘶啞 軟頜麻痹-吞咽困難心肌-心肌炎58 白喉假膜59抗毒素免疫感染后機(jī)體可獲得牢固的免疫力機(jī)體還可通過(guò)其它方式獲得免疫力：六月以下嬰兒-母親成人-隱性感染、人工主動(dòng)免疫易感者：15歲兒童成人-也有可能免疫性：60錫克試驗(yàn)（Schick test）（白喉外毒素皮內(nèi)試驗(yàn)）調(diào)查人群在感染或預(yù)防接種后對(duì)白喉是否產(chǎn)生免疫力根據(jù)外毒素與抗毒

17、素中和的原理，以少量白喉外毒素測(cè)定機(jī)體有無(wú)相應(yīng)抗毒素缺點(diǎn)觀察時(shí)間長(zhǎng)、操作繁瑣，不易進(jìn)行廣泛測(cè)試61錫克試驗(yàn) 白喉?xiàng)U菌所含的毒素對(duì)機(jī)體組織有損傷作用，而引起一系列病理變化。對(duì)白喉具有免疫力的個(gè)體，血清中有白喉抗毒素，能中和白喉毒素的有害作用。皮內(nèi)注射白喉毒素后，觀察局部皮膚反應(yīng)，可以判斷受試者是否對(duì)白喉有免疫力。 于前臂屈側(cè)皮膚乙醇消毒，皮內(nèi)注射白喉毒素，0.1ml，另一側(cè)前臂皮內(nèi)注射等量對(duì)照液(經(jīng)加熱80，5min處理過(guò)的白喉毒素)。24h48h后觀察結(jié)果。 1出現(xiàn)下列情況之一為陽(yáng)性。（1）試驗(yàn)臂局部皮膚紅腫，第4日直徑可達(dá)10mm-20mm，7d-14d開(kāi)始消退，對(duì)照臂無(wú)反應(yīng)。（2）于注射后

18、6h-12h，兩臂同時(shí)出現(xiàn)同樣大小的紅斑，顏色較淺，24h后對(duì)照臂紅斑開(kāi)始消退，而試驗(yàn)臂的皮膚反應(yīng)繼續(xù)發(fā)展。2陰性：兩臂注射部位均無(wú)反應(yīng)。3假陽(yáng)性：雙臂注射部位6h-12h后同時(shí)出現(xiàn)同樣大小的紅斑，顏色較淺，24h后均開(kāi)始消退。 62 主要用于檢查人群對(duì)白喉的免疫狀態(tài)，也可指導(dǎo)臨床治療。1陽(yáng)性：表示機(jī)體對(duì)白喉無(wú)免疫力，應(yīng)進(jìn)行白喉疫苗接種，然后再用本試驗(yàn)測(cè)定免疫效果。2陰性：表示機(jī)體已產(chǎn)生了免疫力。3假陽(yáng)性：也表示機(jī)體對(duì)白喉具有免疫力。雙臂注射部位均出現(xiàn)紅斑，屬于機(jī)體對(duì)白喉毒紊蛋白質(zhì)的變態(tài)反應(yīng)。4.對(duì)于臨床疑診的白喉患者，可同時(shí)做本試驗(yàn)與咽拭子細(xì)菌培養(yǎng)，根據(jù)兩種試驗(yàn)結(jié)果，分別給予不同的處理。（1）白喉?xiàng)U菌培養(yǎng)陽(yáng)性，本試驗(yàn)陰性，按白喉病例處理。（2）白喉?xiàng)U菌培養(yǎng)與本試驗(yàn)均陰性，應(yīng)留觀察。（3）培養(yǎng)陰性，本試驗(yàn)陽(yáng)性，應(yīng)進(jìn)行預(yù)防接種。 疑診白喉，人群白喉免疫狀態(tài)篩查。 局部皮膚感染者。 同狄克試驗(yàn)。 63 致敏紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)測(cè)定血清中抗毒素水平0.1ml血清，倍比稀釋+外毒素致敏紅細(xì)胞37、1h敏感度可達(dá)10-4單位，簡(jiǎn)便快速64防治原則：-人工主動(dòng)免疫白喉類(lèi)毒素DPT混合疫苗：白喉類(lèi)毒