1、卵巢癌組織中尿激酶型纖溶酶原激活物與骨橋蛋白表達(dá)的臨床意義【摘要】 目的 探討尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)和骨橋蛋白(osteopontin，OPN)在卵巢癌組織中的表達(dá)及其與卵巢癌的臨床病理特征的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)uPA、OPN在卵巢癌組織以及卵巢良性腫瘤組織及正常卵巢組織中的表達(dá)。結(jié)果 uPA、OPN 在卵巢癌中的陽性表達(dá)率分別為59.70%和80.59%，uPA、OPN在卵巢癌組織中的表達(dá)與卵巢良性腫瘤、正常卵巢組織中的表達(dá)比較均有顯著性差異(P0.05)。卵巢癌組織中uPA和OPN的表達(dá)均與腫瘤臨床分期及病理分化程度有關(guān)，而與卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。OPN與uPA的表

2、達(dá)呈顯著正相關(guān)(P0.05)。結(jié)論 OPN和uPA可能在卵巢癌的發(fā)生、進(jìn)展中起重要作用，聯(lián)合檢測(cè)OPN、uPA可作為判斷卵巢癌患者預(yù)后和術(shù)后復(fù)發(fā)的重要指標(biāo)。 【關(guān)鍵詞】 尿激酶型纖溶酶原激活物;骨橋蛋白;卵巢腫瘤惡性腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移是個(gè)復(fù)雜的過程，包括腫瘤細(xì)胞的增殖、從原發(fā)部位脫落、黏附繼發(fā)部位、降解基質(zhì)、新生血管形成、轉(zhuǎn)移灶形成等。研究表明，尿激酶型纖溶酶原激活劑(uPA) 是一種絲氨酸蛋白酶，對(duì)細(xì)胞的遷移和腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移起著重要作用，其活性與腫瘤的惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)1，2;而骨橋蛋白(osteopontin，OPN)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種糖磷酸化蛋白，是一種與轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白，能夠促進(jìn)腫瘤組

3、織細(xì)胞的生存、增殖和遷移，參與腫瘤組織中毛細(xì)血管床的形成，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用35。本研究觀察卵巢腫瘤中uPA和OPN的表達(dá)，探討其與臨床病理特征的關(guān)系。1 材料與方法1.1 一般資料 選取卵巢癌患者的癌組織標(biāo)本67例，年齡3371歲，平均(43.410.2)歲。其中黏液性囊腺癌28例，漿液性囊腺癌39例;按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO，2000年)臨床分期期14例，期21例，期24例，期8例;高分化14例，中分化22例，低分化31例。所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)，且均未經(jīng)放療、化療或其他治療。同時(shí)選取卵巢良性腫瘤23例，正常卵巢組織20例。1.2 方法 標(biāo)本均在癌灶中央常規(guī)取材，

4、福爾馬林固定，石蠟包埋，4 m厚連續(xù)切片4張，進(jìn)行HE染色及免疫組化研究。兔抗人OPN多克隆抗體購自Neomarkers公司，兔抗人uPA多克隆抗體及SP免疫組化試劑盒購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)操作按說明書進(jìn)行?？筄PN和抗uPA按1100和150稀釋，每批染色均用已證實(shí)的OPN和uPA染色陽性乳癌切片作陽性對(duì)照，同時(shí)用PBS替代一抗作陰性對(duì)照。1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) 采用低倍鏡和高倍鏡觀察切片。陽性反應(yīng)判定：按切片中顯色癌細(xì)胞數(shù)比例計(jì)分：0分，無細(xì)胞顯色;1分，顯色細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)3分記為陽性，3分記為陰性。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行檢驗(yàn)。2 結(jié) 果2.1 uPA

5、和OPN在不同卵巢組織中的表達(dá)及其相關(guān)性分析 見表1。OPN蛋白陽性顆粒主要位于腫瘤細(xì)胞的胞漿內(nèi)，uPA蛋白則主要定位于細(xì)胞膜或胞漿中，陽性物質(zhì)為黃棕色顆粒狀。uPA、OPN在卵巢癌中的陽性表達(dá)率分別為59.70%和80.59%，uPA、OPN在卵巢癌組織中的表達(dá)與卵巢良性腫瘤、正常卵巢組織中的表達(dá)比較均有顯著性差異(P0.05)。而OPN、uPA在卵巢漿液性囊腺癌及黏液性囊腺癌中的陽性表達(dá)率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表1 uPA及OPN蛋白在不同類型的卵巢組織中的表達(dá)與卵巢癌比較：1)P0.052.2 卵巢癌組織中uPA與OPN表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析 見表2。卵巢上皮癌中37例OPN與uPA同時(shí)表達(dá)，10例不

6、表達(dá)，OPN與uPA表達(dá)之間存在正相關(guān)(P0.05)。表2 卵巢上皮癌組織中OPN與uPA表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析2.3 uPA、OPN在卵巢癌中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 見表3。uPA在組織學(xué)低分化組的表達(dá)明顯高于高中分化組(P0.05);但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，晚期(期)uPA表達(dá)的表達(dá)率高于早期(I期)(P0.05)。OPN在組織學(xué)低分化組的表達(dá)明顯高于高中分化組(P0.05);但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，OPN表達(dá)在臨床晚期(期)高于早期(I期)(P0.05)。表3 OPN、uPA在卵巢癌中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系n(%)與低分化比較：1)P0.05，與期比較：2)P0.053 討 論惡性腫瘤轉(zhuǎn)移過程

7、包括一系列相關(guān)步驟，其中以細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜的降解為最關(guān)鍵，它需要一系列蛋白溶解酶參與1，2。uPA介導(dǎo)的纖溶酶原激活系統(tǒng)參與細(xì)胞的分化、遷移、組織重建、基質(zhì)降解等多種生理病理過程。腫瘤組織中uPA能特異激活纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶，降解腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜成分(纖維蛋白、纖維連接蛋白、蛋白多糖和Laminin)，使腫瘤細(xì)胞易發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移1，2。本研究顯示，uPA在卵巢惡性腫瘤中的表達(dá)率均明顯高于良性和正常組織，良性組和正常組間無明顯差異，而且uPA在卵巢癌低分化組表達(dá)率程度明顯高于高中分化組，晚期(期)uPA表達(dá)的表達(dá)率高于早期(期),提示 uPA與卵巢惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。此與已有的研究

8、相符6，7。OPN是一種具有多種生物學(xué)功能的分泌性、糖基化的磷酸蛋白，在細(xì)胞的黏附與遷移、組織修復(fù)、細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中具有重要作用35。OPN廣泛分布于腎臟、甲狀腺、胃腸、乳腺、睪丸、骨、軟骨、子宮、胎盤、白細(xì)胞、平滑肌、激活的T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞中，研究發(fā)現(xiàn)，OPN在胃癌、肝癌、肺癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、卵巢癌等原發(fā)性腫瘤及轉(zhuǎn)移瘤組織中高表達(dá)，認(rèn)為OPN的過度表達(dá)與腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)35。Kim等8研究發(fā)現(xiàn)，健康女性的卵巢上皮組織中OPN的表達(dá)水平明顯低于卵巢腫瘤組織;但同時(shí)發(fā)現(xiàn)，在漿液性、黏液性、透明細(xì)胞性和內(nèi)膜樣卵巢癌患者血清中OPN表達(dá)差異無顯著性，說明OPN在卵巢癌中的

9、表達(dá)與細(xì)胞的組織學(xué)類型無關(guān)，這與OPN在多數(shù)惡性腫瘤均高表達(dá)的現(xiàn)象吻合35。Coppola等5研究表明，在卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌組織中表達(dá)強(qiáng)度和臨床分期相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，OPN在卵巢癌組織中的陽性表達(dá)明顯高于在卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織中的陽性表達(dá)，OPN表達(dá)與組織學(xué)分化程度、臨床分期有關(guān)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。但卵巢漿液性囊腺癌及黏液性囊腺癌中的陽性表達(dá)率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示OPN與卵巢癌腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖相關(guān)。這與多數(shù)研究相一致3，8，9。Das等10研究發(fā)現(xiàn)，OPN與整合素v3結(jié)合后，通過PI3K/Akt/IKK信號(hào)途徑激活NFB，上調(diào)uPA mRNA，并使酶活性增加，從而降解細(xì)胞外質(zhì)，促進(jìn)

10、腫瘤細(xì)胞浸潤、轉(zhuǎn)移。本研究顯示，OPN蛋白在卵巢癌中的表達(dá)與uPA蛋白一致，且兩者的表達(dá)呈正相關(guān)，提示二者在卵巢癌浸潤和轉(zhuǎn)移過程中起協(xié)同作用。聯(lián)合檢測(cè)OPN和uPA可以一方面探索卵巢癌浸潤和轉(zhuǎn)移的原因，另一方面為卵巢癌臨床治療的研究尋找靶作用點(diǎn)，以期提高腫瘤患者的生存期?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 Sidenius N，Blasi F.The urokinase plasminogen activator system in cancer：recent advances and implication for prognosis and therapyJ.Cancer Metastasis Rev，20

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