1、四、苷分子中苷元和糖、糖和糖之間 連接位置的確定（一）苷元和糖之間連接位置的確定 1、通過化學(xué)降解或酶解所得產(chǎn)物2、通過NMR譜-尤13C-NMR： 判斷端基碳原子-苷化位移規(guī)律（GS） 苷元羥基的成苷碳原子（碳） 與其相鄰的碳原子（碳）的信號(hào)發(fā)生位移， ，1 而其它距苷鍵較遠(yuǎn)的碳原子的信號(hào)幾乎不變； 同時(shí)苷分子上的糖部分，其端基碳原子的信號(hào)與游離單糖端基碳信號(hào)比較，也發(fā)生了位移（苷化位移規(guī)律-GS）苷元羥基性質(zhì)不同，位移方向不同醇類羥基： 苷元碳低場(chǎng)移(4-10ppm) 碳高場(chǎng)移(-0.94.6ppm)2酚類羥基： 苷元碳高場(chǎng)移 碳低場(chǎng)移比較苷和苷元碳譜-找出苷元與糖連接處33、近年2D-N

2、MR譜中HMBC譜已廣泛應(yīng)用可確定糖和苷元的連接位置（二）糖與糖之間連接位置的確定 化學(xué)法及光譜NMR法41、化學(xué)法：甲基化甲醇解 5苷的甲基化反應(yīng)常用的方法四種： 經(jīng)典兩種Haworth法：試劑，較弱、需多次反 應(yīng)、Purdie法：試劑，不能用于還原糖 半微量現(xiàn)代法兩種 kuhn改良法：試劑，反應(yīng)較緩慢 Hakomari法（箱守法）：試劑， 6 室溫連續(xù)、反應(yīng)迅速完全、無需 特殊裝置。最常用。2、NMR法：應(yīng)用碳譜的苷化位移規(guī)律如:苷中兩單糖的連接位置,可將該糖的碳譜數(shù)據(jù)與單糖比較-內(nèi)端糖連糖的碳原子會(huì)向低場(chǎng)移47,其相鄰兩碳略高移14應(yīng)用HMBC譜也十分有效而常用.7五、苷中糖和糖之間連接

3、順序的確定 -部分水解法和波譜解析法（一）部分水解法1、緩和酸水解 試劑-低濃度無機(jī)強(qiáng)酸或中強(qiáng)度的 有機(jī)酸82、全甲基化甲醇解3、乙酰解（二）波譜分析1、MS法 EI-MS中：全乙酰化、全三甲基硅 醚化物等的MS譜中，有各種特征 性的糖基離子峰，全乙?；膯翁?及低聚糖的特征性的碎片離子峰， 可證明糖鏈及末端糖。9 FD-MS，或FAB-MS譜中，有各種脫去不同程度糖基的碎片離子峰，證明糖與糖的連接順序。例如：人參皂苷Rb2(P67)102、NMR法 13C-NMR 碳原子的自旋-馳豫時(shí)間（T1）的 大小。 苷中糖的NT1隨糖鏈距離的增加而 增加11六、 苷鍵構(gòu)型的確定（一）利用酶水解 麥芽糖

4、酶 -苷鍵 苦杏仁苷酶 -苷鍵（二）利用Klyne經(jīng)驗(yàn)公式進(jìn)行計(jì)算計(jì)算公式：(表3-3糖甲苷分子比旋數(shù)值） 12實(shí)例：豆甾醇-D-葡萄糖的苷鍵構(gòu)型豆甾醇-D-葡萄糖的D (旋光度)=-47.56 M=574 MD苷元=D =-50.9813MD =MD苷-MD苷元=-273.03-(-210.04)= -62.99查表可知:-D-葡萄糖甲苷的 MD =+308.6-D-葡萄糖甲苷的 MD =-66.4-62.99與-66.4接近可確定其苷鍵為構(gòu)型14（三）利用NMR譜確定苷鍵構(gòu)型1、1H-NMR（PMR）法：組成苷的糖上端基質(zhì)子的偶合常數(shù)判斷苷鍵的構(gòu)型?？芍苯訉?duì)苷進(jìn)行測(cè)定糖上端基質(zhì)子與其它質(zhì)子相比較,較低場(chǎng)如葡萄糖苷(糖為優(yōu)勢(shì)構(gòu)象)的透視式和部分紐曼式中152、13C-NMR法（CMR） 利用、J 值推測(cè)苷鍵構(gòu)型 糖與苷元連接后，糖中端基碳原子 的值明顯增大，其它變化不大； 某些-和-構(gòu)型的甲苷中， 端基糖碳原子值常相差很大(下圖)16表3-4幾個(gè)-和-甲基吡喃糖端基碳的值（溶劑D2O）-大多相差4 構(gòu) 型 甲基吡喃糖苷D-木糖D-葡萄糖L-阿拉伯糖 100.6100.6105.1 105.1104.6101.117利用C譜的J 值推測(cè)苷鍵構(gòu)型 (表3-5) 幾種糖甲苷和構(gòu)型的JC1