1、大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)水平。用純化的大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)，再與HRP 標(biāo)記的葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的葡萄糖

2、-6-磷酸酶(G-6-P)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)濃度。試劑盒組成1 30 倍濃縮洗滌液20ml1 瓶7 終止液6ml1 瓶2 酶標(biāo)試劑6ml1 瓶8 標(biāo)準(zhǔn)品（400U/L） 0.5ml1 瓶3 酶標(biāo)包被板12 孔8 條9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml1 瓶4 樣品稀釋液6ml1 瓶10 說明書1 份5 顯色劑A 液6ml1 瓶11 封板膜2 張6 顯色劑B 液6ml1/瓶12 密封袋1 個標(biāo)本要求1標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20保

3、存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。200U/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品150l 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100U/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品150l 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50U/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品150l 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液25U/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品150l 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液12.5U/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品150l 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對

4、照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l（樣品最終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37溫育30 分鐘。4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50l，空白孔除外。7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37避光顯色15 分鐘.10. 終止：每孔加終止液50l，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋