1、不 同 金 屬 離 子 對 酶 活 性 的 影 響學(xué)習(xí) 好資料金屬離子對酶活性的影響 試驗(yàn)?zāi)康模?1、明白金屬離子對酶活性的影響； 2、把握不同金屬離子對酶活性作用結(jié)果的測量方 法 試驗(yàn)原理：酸性磷酸酯酶廣泛分布于動物和植物中,植物的種子、霉菌、肝臟和人體的前列腺中；它對生物體核苷酸、磷蛋白 和磷脂的代謝,骨的生成和磷酸的利用,都起著重要作用；磷酸酶是一種能夠?qū)?yīng)底物去磷酸化的酶,通過水解磷酸 單酯將底物分子上的磷酸基團(tuán)除去,并生成磷酸根離子和自 由的羥基；磷酸酶的作用與激酶的作用正相反,激酶是磷酸化酶,可以利用能量分子,如 物分子上；ATP ,將磷酸基團(tuán)加到對應(yīng)底本試驗(yàn)選用綠豆芽作材料,從

2、中提取酸性磷酸酯酶；以人工合成的對硝基苯磷酸酯（NPP）作底物,水解產(chǎn)生對硝基苯酚和磷酸；在堿性溶液中,對硝基酚鹽離子在 405nm 處 光吸取劇烈,而底物沒有這種特性；凡是能提高酶活性的物 質(zhì)統(tǒng)稱為酶的激活劑；無機(jī)離子和一些金屬離子對酶有激活 作用,可以作為酶的激活劑；其中鉀離子是酸性磷酸酯酶的 一種激活劑,它在酶與底物之間起了橋梁作用,形成了酶金屬離子底物三元復(fù)合物,從而更有利于底物與酶的活性 中心部位的結(jié)合；而氯離子和鈉離子對酸性磷酸酯酶的活性精品資料學(xué)習(xí) 好資料沒有什么影響 .一些重金屬離子如銅離子,對酶活性具有抑制 作用；試驗(yàn)用品：1、儀器：恒溫水浴箱、試管架、試管、分光光度計(jì)、比色

3、皿、吸頭、滴管、移液槍、移液管 2、試劑： 1.2mmol/L NPP 100ml 、 0.3mol/L NaOH 250ml 、 酸性磷酸酯酶、 pH5.0 的檸檬酸緩沖液1000ml 、2mmol/L FeSO 4 、2mmol/LCuSO4 、MnCl 22mmol/L 、MgSO 42mmol/L 、 KCl 2mmol/L EDTA、試驗(yàn)步驟：調(diào)零FeSOCuSOMnClMgSOEDTA KCl 6 空白4 4 2 4 對比0 1 2 3 4 5 7 NPP（ml）1 1 1 1 1 1 1 1 酶液ml 1 1 1 1 1 1 1 1 金屬離 子（ml）1 1 1 1 1 1 1

4、1 精品資料學(xué)習(xí) 好資料NaOHml 3 3 3 3 3 3 3 3 注：反應(yīng)均在37 度水浴箱中進(jìn)行, 0 號管先加入1.0mlNPP 后保溫 15 分鐘,然后加入NaOH 3ml ,混勻后再加酶液 1ml ,在波長 405nm 處觀看 OD 值,以 0 號管調(diào)零 試驗(yàn)結(jié)果試管號調(diào)零FeSOCuSOMnClMgSOEDTA KCl 空白4 4 2 4 對比0 1 2 3 4 5 6 7 OD0 0.680.301.260.350.340.340.28（abs）4 9 2 7 1 2 4 由試驗(yàn)數(shù)據(jù)得到的圖標(biāo)如下：精品資料學(xué)習(xí) 好資料試驗(yàn)作業(yè)：以各金屬離子為橫坐標(biāo),A405 縱坐標(biāo),繪制不同金屬離子與酶活力曲線,觀看金屬離子與酶活力的關(guān)系,分析哪些是 酶活性激活劑,哪些是酶活性抑制劑；結(jié)果分析：通過試驗(yàn)組與對比組的OD 值對比可知,保證在相宜的溫度、 pH 等外界條件下,再加入 1ml 2mmol/L 濃度的各種金屬離子溶液,對酸性磷酸酯酶的活力均有激活作用；它們對酸性磷酸酯酶激活作用