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1、關(guān)于骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察第一張,PPT共十一頁,創(chuàng)作于2022年6月骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆罩苽浞椒?,?jì)算分裂中期染色體數(shù)目,觀察端著絲點(diǎn)的形態(tài)特點(diǎn)實(shí)驗(yàn)原理:小鼠骨髓細(xì)胞中的造血干細(xì)胞,具有高度的分裂能力,可得到較多的細(xì)胞中期的分裂相第二張,PPT共十一頁,創(chuàng)作于2022年6月骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察 實(shí)驗(yàn)用品:材料:小白鼠(2n=42)用品:顯微鏡、冰箱、恒溫箱、恒溫水浴鍋、離心機(jī)、注射器、解剖剪、 鑷子、移液器、載玻片、燒杯等。藥品:0.1%(W/V)秋水仙素、2%(W/V)檸檬酸鈉溶液、0.07M氯化鉀溶液、 (或0.35%氯化鉀溶液)、蒸餾水、Giemsa原液,甲醇、
2、乙酸等。第三張,PPT共十一頁,創(chuàng)作于2022年6月骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察實(shí)驗(yàn)步驟:預(yù)處理 取股骨 沖洗骨髓 離心 低滲 固定 離心 滴片染色 觀察 第四張,PPT共十一頁,創(chuàng)作于2022年6月骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察1、取健康小白鼠(約65-90天齡),腹腔注射0.1%秋水仙素溶液0.1ml,劑量為4ml/Kg動物體重。2、2-3小時后,用損傷脊椎法處死小白鼠,取出股骨,把肌肉刮凈,剪下,用2%檸蒙酸鈉溶液洗凈血污及殘?jiān)?、剪去關(guān)節(jié)頭,用3-5ml2%檸檬酸鈉溶液沖洗股骨斷面至粉白色,制備了骨髓細(xì)胞懸浮液。第五張,PPT共十一頁,創(chuàng)作于2022年6月骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察4、將骨髓細(xì)胞
3、懸液,1000rpm離心10分鐘。5、吸去上清液,加入0.075M氯化鉀溶液5ml,立即將細(xì)胞團(tuán)吹打均勻,置37水浴25-30分鐘。6、加入卡諾氏固定液5-6滴,攪拌均勻進(jìn)行預(yù)固定10分。7、再以1000rpm離心10分鐘 。 第六張,PPT共十一頁,創(chuàng)作于2022年6月骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察8、棄上清液,僅留約0.2-0.3ml的細(xì)胞團(tuán)與部分上清液,吹均勻制成細(xì)胞懸浮液涂片觀察。注意:如果細(xì)胞分散的不好,可再按上述方法再固定1-2次,使染色體進(jìn)一步分散。9、取預(yù)先冰凍的載玻片,滴2-3滴細(xì)胞懸浮液于其上,立即吹氣均勻打散、過火、置室溫中自然干燥。第七張,PPT共十一頁,創(chuàng)作于2022年6月骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察10、用Giemsa染液,染色15-20分鐘,自來水沖洗,空氣干燥。11、在低倍鏡下觀察中期分裂相細(xì)胞,計(jì)算染色體的數(shù)目,以確定其細(xì)胞2n的染色體數(shù)目。第八張,PPT共十一頁,創(chuàng)作于2022年6月骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察繪圖:繪制一個圖像清晰、形態(tài)典型的小白鼠染色體組形圖。思考:思考實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的事項(xiàng),積累經(jīng)驗(yàn)。第九張,PPT共十一頁,創(chuàng)作于2022年6月骨髓細(xì)胞染色
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