1、第 PAGE43 頁 共 NUMPAGES43 頁2023年最新的還原糖是什么7篇1、掌握還原糖和總糖測定的基本原理 2、學習比色法測定還原糖的操作方法和分光光度計的使用 二、實驗原理 還原糖的測定是糖定量測定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，其中乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，對沒有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進行測定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量(還原糖以葡萄糖含量計)。 還原糖在堿性條件下加熱可被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，而氧

2、化劑3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關系，利用分光光度計在540nm波長下測定光密度值，查對標準曲線并計算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由于多糖水解為單糖時，每斷裂一個糖苷鍵需加入一分子水，所以在計算多糖含量時應乘以系數(shù)0.9。 3、實驗材料和試劑 1、實驗材料 面粉 2、實驗試劑 1mg/ml葡萄糖標準液 3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑 碘-碘化鉀溶液： 酚酞指示劑： 6M HCl和6M NaOH 四 、 實驗器材 具塞玻璃刻度試管，50ml離心管，100ml燒杯，100ml三角瓶，100ml容量瓶

3、，移液管：1ml；2ml；10ml，恒溫水浴鍋， 離心機，天平，分光光度計。 5、操作步驟 1、制作葡萄糖標準曲線 取7支具塞刻度試管編號，按表1分別加入濃度為1mg/ml的葡萄糖標準液、蒸餾水和DNS試劑，配成不同濃度的葡萄糖反應液。 將各管搖勻，在沸水浴中準確加熱5min取出，冷卻至室溫，用蒸餾水補足至10ml，加塞后顛倒混勻，在分光光度計上進行比色。調(diào)波長540nm，用0號管調(diào)零點，分別測出16號管的光密度值。以光密度值為縱坐標，葡萄糖含量(mg)為橫坐標，在坐標紙上繪出標準曲線。 2、樣品中還原糖和總糖的測定 還原糖的提取 準確稱取2.00g食用面粉，放入100ml燒杯中，先用少量蒸餾

4、水調(diào)成糊狀，然后補足至50ml蒸餾水，攪勻，置50恒溫水浴中保溫20min，使還原糖浸出。，將浸出液用塞棉花的長頸漏斗過濾，沉淀可用20ml蒸餾水洗一次，將過濾的溶液收集在100ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，混勻，作為還原糖待測液。 總糖的水解和提取 準確稱取1.00g食用面粉，放入100ml三角瓶中，加15ml蒸餾水及10ml 6M HCl，置沸水浴中加熱水解30min(水解是否完全可用碘-碘化鉀溶液檢查)。待三角瓶中的水解液冷卻后，加入1滴酚酞指示劑，用6mol/l NaOH中和至微紅色，用蒸餾水定容在100ml容量瓶中，混勻。將定容后的水解液過濾，取濾液10ml，移入另一100ml容

5、量瓶中定容，混勻，作為總糖待測液。 6、實驗數(shù)據(jù) 第一天葡萄糖標準曲線的測定 還原糖的測定 第二天葡萄糖標準曲線的測定 總糖的測定 7、結(jié)果與計算 計算出7、8號管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值，在標準曲線上分別查出相應的還原糖毫克數(shù)，按下式計算出樣品中還原糖和總糖的百分含量。 8、注意 1.標準曲線制作與樣品測定應同時進行顯色，并使用同一空白調(diào)零點和比色。 2.實驗分兩次進行，每次都要重新測定并繪制標準曲線。 思考題 1、3,5-二硝基水楊酸比色法是如何對總糖進行測定的 通過測定波長為540nm處“標準葡萄糖濃度梯度的吸光度”和樣品溶液的吸光度，繪制標準曲線，查對標準曲線并計算

6、，便可求得樣品中還原糖的含量。 3，5二硝基水楊酸，3,5-Dinitrosalicylic acid ，簡稱DNS。在堿性條件下，還原糖與3,5-二硝基水楊酸共熱，3,5-二硝基水楊酸被還原為3-氨基-5-硝基水楊酸(棕紅色物質(zhì))，還原糖則被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色深淺的程度量呈一定的比例關系，在540nm波長下測定棕紅色物質(zhì)的吸光值，查對標準曲線可求出樣品中還原糖的含量 2、如何正確繪制和使用標準曲線 標準曲線應在坐標紙上繪制，橫坐標軸距坐標紙底邊1.52cm，標示出刻度和葡萄糖的毫克數(shù)；縱坐標軸距坐標紙左邊1.52cm，標示刻度和光密度值；曲線為過原

7、點的直線，測定點均勻分布在直線的兩側(cè)；標準曲線只能在測試條件完全相同的情況下，用于確定樣品中的物質(zhì)含量。對于重復的測定，應取吸光度的平均值查標準曲線；測定數(shù)據(jù)不應記在標準曲線上。 還原糖是什么(2) 牛奶中還原糖的測定(實驗) 1、實訓內(nèi)容 采用直接滴定法測定牛奶中還原糖 2、實訓目的 1、通過本實驗了解牛奶中還原糖的測定方法 2、通過本實驗了解原理及操作要點 3、儀器和用具 150mL三角瓶、匹配的膠塞、25mL酸式滴定管、電爐、移液管 4、試劑 堿性酒石酸銅甲液:稱取15g硫酸銅及0.05g亞甲基藍，溶于水中，并稀釋至1000mL； 堿性酒石酸銅乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉、75g氫氧化鈉，

8、溶于水中，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至1000mL，儲存于橡膠塞玻璃瓶中 乙酸鋅溶液：稱取21.9g乙酸鋅，加3mL冰醋酸，加水溶解，并稀釋至100mL 亞鐵氰化鉀溶液：稱取10.6g亞鐵氰化鉀，加水溶解，并稀釋至100mL 葡萄糖標準溶液：準確稱取1.000g至962干燥2h的純葡萄糖，加水溶解，并以水稀釋至1000mL，充分搖勻。此溶液每毫升相當于1.0mg葡萄糖 5、步驟 1.樣品處理：準確量取25ml牛奶加50ml水溶解，加入10ml乙酸鋅和10ml亞鐵氰化鉀溶液加水至刻度，定容至250mL容量瓶，搖勻備用 2.標定堿性酒石酸銅溶液 1）吸取5ml堿性酒石酸銅甲液及5m

9、l乙液，置150ml三角錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒 2）滴定管滴加9ml葡萄糖標液，搖勻，置電爐上加熱至沸（2min內(nèi)沸騰） 3）趁熱以每兩秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖或其他還原糖標準溶液，直至溶液藍色剛好退去，顯示淡黃色即為終點，記錄消耗葡萄糖總體積 4）同時平行操作3份，取平均值，計算每10ml堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質(zhì)量m1 M1=v M110ml堿性酒石酸銅溶液（甲液乙液各5ml）相當于葡萄糖的質(zhì)量，mg 某種還原糖標準溶液的濃度，mg/mL V標定時消耗某種還原糖標準溶液的總體積，mL 3.樣品溶液預滴定 1）吸取5mL堿性酒石酸銅甲液和5mL乙液，置于150mL三角

10、錐形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，搖勻 2）在電路上加熱至沸（2min內(nèi)），趁熱以先快后慢的速度從滴定管中滴加樣品溶液，并保持溶液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時，以每兩秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色剛好退去為終點，記錄樣品溶液消耗體積 3）樣液中還原糖濃度過高時應適當稀釋再進行測定，使每次滴定消耗樣液的體積控制在與標定堿性酒石酸銅溶液時所消耗的還原糖標準溶液的體積相近，約在10mL左右，記錄消耗樣液的總體積，作為正式滴定參考用 4.樣品溶液的測定 1）吸取5mL堿性酒石酸銅甲液及5mL乙液，置150mL三角錐瓶，加水10mL，加入玻璃珠2粒 2）從滴定管加入比預測定體積少1mL的樣品溶液至三

11、角錐瓶，搖勻，同上法滴定至終點 3）同法平行操作3份，得到平均消耗體積 5.結(jié)果計算 M1 100 X= m2v/2501000 式中，x試樣中還原糖的含量，g/100g M110mL堿性酒石酸銅溶液相當于某種還原糖的質(zhì)量，mg M2樣品的質(zhì)量，g V測定時平均消耗樣品溶液的體積，mL 250樣品溶液的總體積，mL 需配制的溶液 堿性酒石酸銅甲液:稱取15g硫酸銅及0.05g亞甲基藍，溶于水中，并稀釋至1000mL； 堿性酒石酸銅乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉、75g氫氧化鈉，溶于水中，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至1000mL，儲存于橡膠塞玻璃瓶中 乙酸鋅溶液：稱取21.9g乙酸鋅

12、，加3mL冰醋酸，加水溶解，并稀釋至100mL 亞鐵氰化鉀溶液：稱取10.6g亞鐵氰化鉀，加水溶解，并稀釋至100mL 葡萄糖標準溶液：準確稱取1.000g至962干燥2h的純葡萄糖，加水溶解，并以水稀釋至1000mL，充分搖勻。此溶液每毫升相當于1.0mg葡萄糖 準備的儀器 三角瓶150ml（11*3） 50mL酸式滴定管（11） 電爐（11） 移液管（25ml、5ml、10ml各11） 量筒（50ml，11） 玻璃珠（22） 容量瓶（11） 實驗原理 首先將5ml的堿性酒石酸銅甲液、乙液等量混合，我們看到的現(xiàn)象是什么？立即生成天藍色的氫氧化銅沉淀，這種沉淀很快與酒石酸鉀鈉反應，生成深藍色的

13、可溶性酒石酸鉀鈉銅配合物。然后，在電爐上迅速加熱兩分鐘內(nèi)沸騰，以亞甲基藍作為指示劑，先用還原糖進行標定，還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應生成紅色的氧化亞銅沉淀，待二價銅全部被還原后，稍過量的還原糖將甲基藍還原，滴定終點的顏色變化是藍色剛好退去，溶液出現(xiàn)淺黃色，平行操作三次，記錄消耗葡萄糖標準溶液的體積，計算10ml堿性酒石酸銅溶液相當于某種還原糖的質(zhì)量。然后，再用同樣的方法進行標定樣液，記錄樣品溶液消耗的體積。在標定樣品溶液之前，我們要先做一個預標定，以更好地確定滴定終點，同樣平行測定三次，根據(jù)消耗樣品的平均值來計算牛奶中還原糖的含量 還原糖是什么(3) 實驗一 還原糖和總糖含量的測定 原理 3，5-

14、二硝基水楊酸溶液與還原糖溶液共熱后被還原成棕紅色的氨基化合物，在一定范實驗圍內(nèi)還原糖的量和棕紅色物質(zhì)顏色深淺的程度成一定比例關系，可用比色測定。操作簡便，快速，雜質(zhì)干擾較少。 實驗方法 一 葡萄糖標準曲線的制定 葡萄糖標準曲線的制定：準確稱取100mg分析純的無水葡萄糖（預先在105干燥至恒重），用少量蒸餾水溶解后，定量轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，再定容至刻度，搖勻。濃度為1mg/Ml。 取9支25mm250mm的試管，分別按下表加入試劑：（ml） 項 目 0 1 2 3 4 5 6 7 8 G標液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 G的量 0 0.2 0.4

15、0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 H2O 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 3，5-二硝基水楊酸 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 將各管溶液混合均勻,在沸水浴中加熱5分鐘,取出后立即用冷水冷卻到室溫,再向每管加入21.5mL蒸餾水,搖勻。于520nm波長處測A值。以葡萄糖mg數(shù)為橫坐標，光吸收值為縱坐標，繪制標準曲線。 二 樣品中總糖和還原糖含量的測定 以測定山芋中總糖和還原糖含量為例。 1樣品中還原糖的提?。簻蚀_稱取2g山芋粉，放在100mL燒杯中，先以少量水調(diào)成糊狀，然后加工50-60mL蒸餾水，于

16、50oC恒溫水浴中保溫20分鐘，過濾，將濾液收集在100mL容量瓶中，再定容至100mL。 2樣品中總糖的水解及提?。簻蚀_稱取1g山芋粉，放在錐形瓶中，加入10mL6mol/L鹽酸，15mL水，在沸水浴中加熱半小時，取出一、二滴置于白瓷板上，加1滴碘-碘化鉀溶液檢查水解是否完全。如已水解完全，則不呈藍色。冷卻后加1滴酚酞指示劑，以10%氫氧化鈉溶液中和至溶液呈微紅色，過濾并定容到100mL。再精確吸取上述溶液10mL于100mL容量瓶中，定容到刻度，混勻備用。 3樣品中糖含量的測定：取7支隊5mm250mm試管分別按下表加入試劑： 項目 空白 還原糖 總糖 0 1 2 3 4 5 6 樣液ml

17、 H2Oml 3，5-二硝基水楊酸 0 2 1.5 1.0 1.0 1.5 1.0 1.0 1.5 1.0 1.0 1.5 1.0 1.0 1.5 1.0 1.0 1.5 1.0 1.0 1.5 加完試劑后，其余操作均與制作標準曲線時相同。測定后，取樣品的A平均值在標準曲線上查出相應的糖量。用下式計算出山竽粉中還原糖與總糖的百分含量。 數(shù)據(jù)處理推薦同學們用origin軟件處理！ 最小二乘法求標準曲線方程的公式： X：G的濃度（gmL）Y：吸光度AT 本實驗要求相關系數(shù)r0.99 還原糖是什么(4) 檢測還原糖 實驗目的：學習檢測還原糖 實驗原理：斐林試劑是新配制的溶液，它在加熱條件下與醛基反應

18、，被還原成磚紅色的沉淀，可用于鑒定可溶性還原糖的存在。用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時，溶液的顏色變化過程為：淺藍色棕色磚紅色（沉淀）。 試劑及材料：蘋果，研缽及研杵，試管若干，試管架，試管夾，燒杯，小量筒，滴管，酒精燈，三腳架，石棉網(wǎng)，火柴；斐林試劑NaOH ，CuSO4粉末，蒸餾水 實驗步驟：1.研磨蘋果獲得濾液待用 2.配制斐林試劑：甲液：質(zhì)量濃度為0.1g/ml的NaOH溶液，乙液：質(zhì)量濃度為0.05g/ml的CuSO4溶液 3取六支試管編號按下表添加試劑 試管號 1 2 3 4 5 葡萄糖 0 2ml樣品 2ml 2ml 2ml 斐林試劑 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 蒸餾水

19、2ml 0 0 0 0 葡萄糖濃度 0 待測 0.01 0.1 1 顏色變化 淡藍色-磚紅色沉淀 淺橙色 深橙色 橙色 磚紅色 4按最接近顏色試管濃度重新配濃度梯度 試管號 1 2 3 4 葡萄糖 2ml 2ml 2ml 2ml 斐林試劑 1ml 1ml 1ml 1ml 蒸餾水 0 0 0 0 葡萄糖濃度 待測 0.05 0.1 0.5 顏色變化 淺橙色 淺綠 茶色 淺橙色 5.探究： 試管號 1 2 葡萄糖 2ml 2ml 斐林試劑 先加入A液，后加入B液 1ml 水浴溫度 55-60 5580 顏色變化 橙色 褐色 實驗結(jié)果： 討論： 1不足之處，制備蘋果勻漿時，樣品過多，研磨時間過長組織

20、中氧化酶將一部分組織氧化，影響實驗結(jié)果：滴管在使用過程中造成了交叉污染，此外滴管和量筒的精度太低很難達到定量研究。 2.在實驗之前葡萄糖的濃度梯度沒有把握好 3.檢測蘋果中還原糖應出現(xiàn)的顏色變化為淺藍色棕色磚紅色沉淀。而本實驗樣品中都出現(xiàn)棕色，而混有葡萄糖雜質(zhì)的對照組卻出現(xiàn)了磚紅色沉淀。說明組織還原糖濃度還須稀釋，此外組織中被氧化的物質(zhì)與生成的磚紅色沉淀混合也會干擾實驗結(jié)果。 還原糖是什么(5) 還原糖檢測注意事項 1.費林試劑甲液和乙液應分別貯存，用時才混合，否則酒石酸鉀鈉銅絡合物長期在堿性條件下會慢慢分解析出氧化亞銅沉淀，使試劑有效濃度降低。 2.滴定必須是在沸騰條件下進行，其原因一是加快

21、還原糖與Cu2的反應速度；二是亞甲基藍的變色反應是可逆的，還原型的亞甲基藍遇空氣中的氧時會再被氧化為氧化型。此外，氧化亞銅也極不穩(wěn)定，易被空氣中的氧所氧化。保持反應液沸騰可防止空氣進入，避免亞甲基藍和氧化亞銅被氧化而增加消耗量。 3.滴定時不能隨意搖動錐形瓶，更不能把錐形瓶從熱源上取下來滴定，以防止空氣進入反應溶液中。 4.本方法測定的是一類具有還原性質(zhì)的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖等，只是結(jié)果用葡萄糖或其他轉(zhuǎn)化糖的方式表示，所以不能誤解為還原糖=葡萄糖或其他糖。但如果已知樣品中只含有某一種糖，如乳制品中的乳糖，則可以認為還原糖=某糖。 5.分別用葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖標準品配制標準

22、溶液分別滴定等量已標定的費林氏液，所消耗標準溶液的體積有所不同。證明即便同是還原糖，在物化性質(zhì)上仍有所差別，所以還原糖的結(jié)果只是反映樣品整體情況，并不完全等于各還原糖含量之和。如果已知樣品只含有某種還原糖，則應以該還原糖做標準品，結(jié)果為該還原糖的含量。如果樣品中還原糖的成分未知，或為多種還原糖的混合物，則以某種還原糖做標準品，結(jié)果以該還原糖計，但不代表該糖的真實含量。 6.乙酸鋅可去除蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂等，使它們形成沉淀，經(jīng)過濾除去。如果鈣離子過多時，易與葡萄糖、果糖生成絡合物，使滴定速度緩慢；從而結(jié)果偏低，可向樣品中加入草酸粉，與鈣結(jié)合，形成沉淀并過濾。）A、裵林試劑的最終標定及樣品的最終滴

23、定在1 min內(nèi)完成. 7.配制葡萄糖標準溶液應非常準確.一定控制好滴定速度.每班測定一次C標，將濃度值填寫在記錄表格中。滴定終點則為蘭色褪去出現(xiàn)明亮顏色（如亮紅亮黃色） 8、堿性酒石酸銅甲液中的硫酸銅的銅離子為此化學反應定量的標物，次甲基蘭為氧化還原指示劑（氧化型為藍色、還原型為無色） 9、此實驗為什么要在堿性條件下進行，主要是在酸性條件下，還原糖會形成酯（不具有氧化性或氧化性不強的含氧酸如乙酸）、有機酸（如被硝酸氧化），樣液中的二糖及多糖與淀粉會水解成還原糖，結(jié)果可想而知。 10、堿性酒石酸銅乙液中的酒石酸鉀鈉的作用：既然實驗得在堿性條件下進行，那么硫酸銅遇堿生成氫氧化銅沉淀后，不能使實驗

24、正常進行，必需使其（銅離子）在可溶狀態(tài)下才行，酒石酸鉀鈉與銅離子絡合就達到了目的。 11、影響實驗結(jié)果的主要因素為： a)反應液堿度：堿度越高，反應速度越快，樣液消耗也越多，故樣品測定時樣液的滴定體積要與標準相近，原理在此，這樣誤差要小。 b)錐形瓶規(guī)格：不同體積的錐形瓶會致使加熱的面積及樣液的厚度有變化，同時瓶壁的厚度不同影響傳熱速率，故有時甚至是同一規(guī)格但不同批的錐形瓶也會引起誤差。 c)加熱功率：加熱的目的一是加快反應速度，二是防止次甲基蘭與滴定過程中形成的氧化亞銅被氧氣氧化，使結(jié)果偏高。加熱功率不同，樣液沸騰時間不同，時間短樣液消耗多，同時反應液蒸發(fā)速度不同，即時堿度的變化也就不同，故

25、實驗的平行性也就受影響。 d)滴定速度：滴定速度越快，樣液消耗也越多，結(jié)果會偏低。 12、滴定終點有時不顯無色而顯暗紅色，是由于樣液中亞鐵氰化鉀量不夠，不能有效絡合氧化亞銅成無色的原故。故可在反應液中適量添加亞鐵氰化鉀，標準與樣液添加量一樣。 13.滴定點是在靜止加熱沸騰中的顏色瞬間變化，如果人為搖晃會造成額外氧化反應的疊加，造成滴定量加大，結(jié)果漂高。用同一型號的滴定錐形瓶作空白，即可避免加熱不均造成的熱量差異。 14、堿性酒石酸銅甲液中的硫酸銅的銅離子為此化學反應定量的標物，次甲基蘭為氧化還原指示劑（氧化型為藍色、還原型為無色）1。 、滴定速度要保持均衡一致，速度每12秒一滴為好（速度不要受

26、滴定時間的長短而改變） 、空白滴定和樣品滴定一定要保證預加標準糖液量與最終數(shù)值差0.50.7mL（最好0.5mL）比如空白測定是22mL，再滴空白時標準糖液預加入到21.5mL。如果這個空白又滴成了22.3mL，則下次空白滴定就預加到21.8mL，樣品檢測也依此類推。 、電爐的溫度對檢測結(jié)果也有影響，所以要保證電爐充分預熱，同時三角瓶在電爐上的放置位置要保持一致。 、測定時液體沸騰后的開始滴定的時間也要保持一致，一般等液體充分沸騰后開始滴定。 、滴定終點的判斷也要保持一致。一般等液面半邊變透明為滴定終點。 、糖液稀釋及取樣也要注意精確，注意吸管正確使用方法。 、折光糖度精心檢測，依此數(shù)據(jù)輔導還

27、原糖的檢測。 、注意輸液膠管漏液、變形，滴定管尖端氣泡等對檢測數(shù)值的影響。 、三角瓶使用后清洗干凈。 樣品檢測注意加水體積，加水量為滴定數(shù)與空白數(shù)之差，使樣品檢測總體積與空白滴定總體積大致相等 還原糖是什么(6) 食品中還原糖的測定方法 食物中還原糖的測定方法：高錳酸鉀滴定法和直接滴定法。 一、高錳酸鉀滴定法 1.原理 樣品經(jīng)除去蛋白質(zhì)后，其中還原糖在堿性環(huán)境下將銅鹽還原為氧化亞銅，加硫酸鐵后，氧化亞銅被氧化為銅鹽，以高錳酸鉀溶液滴定氧化作用后生成的亞鐵鹽，根據(jù)高錳酸鉀消耗量計算氧化亞同含量，再查表得還原糖量。 2.適用范圍 GB5009.7-85，本法適用于所有食品中還原糖的測定以及通過酸水

28、解或酶水解轉(zhuǎn)化成還原糖的非還原性糖類物質(zhì)的測定。 3.儀器 （1） 滴定管 （2） 25ml古氏坩堝或G4垂融坩堝 （3） 真空泵 （4） 水浴鍋 4.試劑 除特殊說明外，實驗用水為蒸餾水，試劑為分析純。 4.1 6 mol/L鹽酸：量取50ml鹽酸加水稀釋至100 ml。 4.2 甲基紅指示劑：稱取10mg甲基紅，用100ml乙醇溶解。 4.3 5 mol/L氫氧化鈉溶液：稱取20g氫氧化鈉加水溶解并稀釋至100ml。 4.4 堿性酒石酸銅甲液：稱取34.639g 硫酸銅（CuSO45H2O），加適量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀釋至500ml，用精制石棉過濾。 4.5 堿性酒石酸銅乙液

29、：稱取173g酒石酸鉀鈉與50g氫氧化鈉，加適量水溶解，并稀釋至500ml，用精制石棉過濾，貯存于橡膠塞玻璃瓶中。 4.6 精制石棉：取石棉先用3mol/L鹽酸浸泡23天，用水洗凈，再加2.5mol/L氫氧化鈉溶液浸泡23天，傾去溶液，再用熱堿性酒石酸銅已液浸泡數(shù)小時，用水洗凈。再以3 mol/L 鹽酸浸泡數(shù)小時，以水洗至不呈酸性。然后加水振搖，使成微細的漿狀軟縣委，用水浸泡并貯存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩堝用。 4.7 0.1000mol/L高錳酸鉀標準溶液。 4.8 1mol/L氫氧化鈉溶液：稱取4g 氫氧化鈉，加水溶解并稀釋至100ml。 4.9 硫酸鐵溶液：稱取50g硫酸鐵，加入2

30、00ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷卻后加水稀釋至1L。 4.10 3mol/L鹽酸：量取30ml鹽酸，加水稀釋至120ml。 5. 操作方法 5.1 樣品處理： 5.1.1 乳類、乳制品及含蛋白質(zhì)的食品：稱取約0.52 g固體樣品（吸取210 ml液體樣品），置于250 ml容量瓶中，加50 ml水，搖勻。加入10 ml堿性酒石酸銅甲液及4 ml1mol/L氫氧化鈉溶液，加水至刻度，混勻。靜置30min，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。（注：此步驟目的是沉淀蛋白） 5.1.2 酒精性飲料：吸取100 ml樣品，置于蒸發(fā)皿中，用1 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發(fā)至

31、原體積1/4后（注：如果蒸發(fā)時間過長，應注意保持溶液pH為中性），移入250 ml容量瓶中。加50 ml水，混勻。以下按5.1.1自加10ml堿性酒石酸銅甲液起依法操作。 5.1.3 含多量淀粉的食品：稱取210 g樣品，置于250 ml容量瓶中，加200 ml水，在45水浴中加熱1 h，并時時振搖。（注意：此步驟是使還原糖溶于水中，切忌溫度過高，因為淀粉在高溫條件下可糊化、水解，影響檢測結(jié)果。）冷卻后加水至刻度，混勻，靜置。吸取200 ml上清液于另一250 ml容量瓶中，以下按5.1.1自加10ml堿性酒石酸銅甲液起依法操作。 5.1.4 含有脂肪的食品：稱取210 g樣品，先用乙醚或石油

32、醚淋洗3次，去除醚層。加入50ml水混勻，以下按5.1.1自加10ml堿性酒石酸銅甲液起依法操作。 5.1.5 汽水等含有二氧化碳的飲料：吸取100 ml樣品置于蒸發(fā)皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250 ml容量瓶中，并用水洗滌蒸發(fā)皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻后，備用。 5.2 樣品測定： 吸取50ml處理后的樣品溶液，于400ml燒杯中，加入25ml堿性酒石酸銅甲液及25ml乙液，于燒杯上蓋一表面皿，加熱，控制在4min內(nèi)沸騰，再準確煮沸2min，乘熱用鋪好石棉的古氏坩堝或G4垂融坩堝抽濾，并用60熱水洗滌燒杯及沉淀，至洗液不成堿性為止。（注：還原糖與堿性酒石酸銅試劑的反應一

33、定要在沸騰狀態(tài)下進行，沸騰時間需嚴格控制。煮沸的溶液應保持藍色，如果藍色消失，說明還原糖含量過高，應將樣品溶液稀釋后重做。）將古氏坩堝或垂融坩堝放回原400ml燒杯中，加25 ml硫酸鐵溶液及25ml水，用玻棒攪拌使氧化亞銅完全溶解，以0.1mol/L高錳酸鉀標準液滴定至微紅色為終點。 同時吸取50ml水，加與測樣品時相同量的堿性酒石酸銅甲、乙液，硫酸鐵溶液及水，按同一方法做試劑空白實驗。 6. 計算： X1=（V-V0）N71.54 （1） 式中： X1-樣品中還原糖質(zhì)量相當于氧化亞銅的質(zhì)量，mg； V-測定用樣品液消耗高錳酸鉀標準液的體積，ml； V0-試劑空白消耗高錳酸鉀標準液的體積，m

34、l； N-高錳酸鉀標準溶液的濃度； 71.54-1ml 1mol/L高錳酸鉀溶液相當于氧化亞銅的質(zhì)量，mg。 根據(jù)（1）式中計算所得氧化亞銅質(zhì)量，查附表氧化亞銅質(zhì)量相當于葡萄糖、果糖、乳糖、轉(zhuǎn)化糖的質(zhì)量表，再計算樣品中還原糖含量。 X2=（m1V2）（m2V1）（1001000） (2) 式中： X2-樣品中還原糖的含量，g/100g（g/100ml）； m1-查表得還原糖質(zhì)量，mg； m2-樣品質(zhì)量（或體積）， g（ml）； V1-測定用樣品處理液的體積，ml； V2-樣品處理后的總體積，ml。 7.舉例： 稱取某食物樣品3.00g，經(jīng)過處理后用水定容至250ml。取50ml進行測定，消耗0

35、.1003 mol/L高錳酸鉀標準液5.20ml，同時測試劑空白為0.36ml，則樣品中還原糖質(zhì)量相當于氧化亞銅的質(zhì)量為： X1（mg） =（5.20-0.36）0.100371.54 = 34.73 查表得還原糖質(zhì)量為相當于葡萄糖16.22 mg， 樣品中還原糖含量（以葡萄糖計）為： X2（g/100g）=（16.22250）（3.0050）（1001000）= 2.70 8.注釋： 本法用堿性酒石酸銅溶液作為氧化劑。由于硫酸銅與氫氧化鈉反應可生成氫氧化銅沉淀，氫氧化銅沉淀可被酒石酸鉀鈉緩慢還原，析出少量氧化亞銅沉淀，使氧化亞銅計量發(fā)生誤差，所以甲、乙試劑要分別配制及貯藏，用時等量混合。 二

36、、直接滴定法 1.原理 樣品經(jīng)除去蛋白質(zhì)后，在加熱條件下，直接滴定已標定過的費林氏液，費林氏液被還原析出氧化亞銅后，過量的還原糖立即將次甲基藍還原，使藍色褪色。根據(jù)樣品消耗體積，計算還原糖量。 2.適用范圍 GB5009.7-85，本方法適用于所有食品中還原糖的檢測。檢出限0.1mg。 3.主要儀器 滴定管 4.試劑 除特殊說明外，實驗用水為蒸餾水，試劑為分析純。 （1） 費林甲液：稱取15 g硫酸銅（CuSO45H2O），及0.05 g次甲基藍，溶于水中并稀釋至1 L。 （2） 費林乙液：稱取50 g酒石酸鉀鈉與75 g氫氧化鈉，溶于水中，再加入4 g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至500

37、 ml，貯存于橡膠塞玻璃瓶內(nèi)。 （3） 乙酸鋅溶液：稱取21.9 g乙酸鋅，加3 ml冰乙酸，加水溶解并稀釋至100 ml。 （4）亞鐵氰化鉀溶液。稱取10.6g亞鐵氰化鉀，用水溶解并稀釋至100ml。 （5） 鹽酸。 （6） 葡萄糖標準溶液：精密稱取1.000 g經(jīng)過80 干燥至恒量的葡萄糖（純度在99%以上），加水溶解后加入5 ml鹽酸，并以水稀釋至1 L。此溶液相當于1 mg/ml葡萄糖。（注：加鹽酸的目的是防腐，標準溶液也可用飽和苯甲酸溶液配制） 5.操作方法 5.1樣品處理： 5.1.1乳類、乳制品及含蛋白質(zhì)的食品：稱取約0.52 g固體樣品（吸取210 ml液體樣品），置于100

38、ml容量瓶中，加50 ml水，搖勻。邊搖邊慢慢加入5 ml乙酸鋅溶液及5 ml亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻。靜置30 min，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。（注意：乙酸鋅可去除蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂等，使它們形成沉淀，經(jīng)過濾除去。如果鈣離子過多時，易與葡萄糖、果糖生成絡合物，使滴定速度緩慢；從而結(jié)果偏低，可向樣品中加入草酸粉，與鈣結(jié)合，形成沉淀并過濾。） 5.1.2酒精性飲料：吸取50 ml樣品，置于蒸發(fā)皿中，用1 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發(fā)至原體積1/4后，移入100 ml容量瓶中。加25 ml水，混勻。以下按4.1.1自加5 ml乙酸鋅溶液起依法操作。 5.1.

39、3含多量淀粉的食品：稱取25 g樣品，置于100 ml容量瓶中，加50 ml水，在45水浴中加熱1 h，并時時振搖（注意：此步驟是使還原糖溶于水中，切忌溫度過高，因為淀粉在高溫條件下可糊化、水解，影響檢測結(jié)果。）。冷后加水至刻度，混勻，靜置。吸取50 ml上清液于另一100 ml容量瓶中，以下按4.1.1自5 ml乙酸鋅溶液起依法操作。 5.1.4汽水等含有二氧化碳的飲料：吸取50 ml樣品置于蒸發(fā)皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入100 ml容量瓶中，并用水洗滌蒸發(fā)皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻后，備用。 （注意：樣品中稀釋的還原糖最終濃度應接近于葡萄糖標準液的濃度。） 5. 2標

40、定費林氏液溶液：吸取5.0 ml費林氏甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml錐形瓶中（注意：甲液與乙液混合可生成氧化亞銅沉淀，應將甲液加入乙液，使開始生成的氧化亞銅沉淀重溶），加水10 ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9 ml葡萄糖標準溶液，控制在2 min內(nèi)加熱至沸，趁沸以每兩秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標準溶液，直至溶液蘭色剛好褪去并出現(xiàn)淡黃色為終點，記錄消耗的葡萄糖標準溶液總體積，平行操作三份，取其平均值，計算每10 ml（甲、乙液各5 ml）堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質(zhì)量（mg）。（注意：還原的次甲基藍易被空氣中的氧氧化，恢復成原來的藍色，所以滴定過程中必須保持溶液成沸騰狀態(tài)，

41、并且避免滴定時間過長。） 5.3樣品溶液預測：吸取5.0 ml費林氏甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml錐形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，控制在2 min內(nèi)加熱至沸，趁沸以先快后慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，并保持溶液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時，以每秒1滴的速度滴定，直至溶液蘭色褪去，出現(xiàn)亮黃色為終點。如果樣品液顏色較深，滴定終點則為蘭色褪去出現(xiàn)明亮顏色（如亮紅），記錄消耗樣液的總體積。（注意：如果滴定液的顏色變淺后復又變深，說明滴定過量，需重新滴定。） 5.4樣品溶液測定：吸取5.0 ml堿性酒石酸銅甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml錐形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠

42、2粒，在2 min內(nèi)加熱至沸，快速從滴定管中滴加比預測體積少1 ml的樣品溶液，然后趁沸繼續(xù)以每兩秒1滴的速度滴定直至終點。記錄消耗樣液的總體積，同法平行操作兩至三份，得出平均消耗體積。 6.計算 X3 =（Cv1 V）（m v2 1000）100 式中： X-樣品中還原糖的含量(以葡萄糖計)，%； C-葡萄糖標準溶液的濃度，mg/ml； v1- 滴定10 ml費林氏溶液（甲、乙液各5 ml）消耗葡萄糖標準溶液的體積，ml； v2-測定時平均消耗樣品溶液的體積，ml； V-樣品定容體積，ml； m-樣品質(zhì)量，g； 7.注意事項 （1） 本方法測定的是一類具有還原性質(zhì)的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖

43、、麥芽糖等，只是結(jié)果用葡萄糖或其他轉(zhuǎn)化糖的方式表示，所以不能誤解為還原糖=葡萄糖或其他糖。但如果已知樣品中只含有某一種糖，如乳制品中的乳糖，則可以認為還原糖=某糖。 （2）分別用葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖標準品配制標準溶液分別滴定等量已標定的費林氏液，所消耗標準溶液的體積有所不同。證明即便同是還原糖，在物化性質(zhì)上仍有所差別，所以還原糖的結(jié)果只是反映樣品整體情況，并不完全等于各還原糖含量之和。如果已知樣品只含有某種還原糖，則應以該還原糖做標準品，結(jié)果為該還原糖的含量。如果樣品中還原糖的成分未知，或為多種還原糖的混合物，則以某種還原糖做標準品，結(jié)果以該還原糖計，但不代表該糖的真實含量。 還原糖是什

44、么(7) GB 551385 本標準適用于商品糧食中還原糖和非還原糖含量的測定。其中鐵氰化鉀法主要適用于小麥粉。 1 還原糖測定 1.1 鐵氰化鉀法 1.1.1 儀器和用具 磨口帶塞錐形瓶：100 ml； 量筒：50 ml、25 ml； 移液管：5 ml； 玻璃漏斗； 試管：直徑1.82.0 cm，高約18 cm； 鋁鍋：作沸水浴用； 電爐：2023 W； 鐵絲籠：放置試管用； 試管架； 錐形瓶：100 ml； 微量滴定管：5 ml或10 ml（刻度0.02 ml）； 分析天平：感量0.0001 g。 1.1.2 試劑 95乙醇； 乙酸緩沖液：3 ml冰乙酸、6.8 g乙酸鈉和比重1.84的硫酸4.5 ml，混合后用水稀釋至1000 ml； 12鎢酸鈉溶液：12 g鎢酸鈉Na2WO42H2O溶于100 ml水中； 0.1 N鐵