1、超聲波輔助熱回流技術(shù)提取馬鞭石斛多糖的工藝研究【摘要】目的優(yōu)選超聲波輔助熱回流法提取馬鞭石斛多糖工藝。方法以多糖的提取率作為指標(biāo)，通過(guò)單因素及正交實(shí)驗(yàn)對(duì)提取工藝進(jìn)展優(yōu)化，主要考察因素為提取時(shí)間、溫度和次數(shù)。結(jié)果超聲波輔助熱回流提取馬鞭石斛多糖的最優(yōu)工藝條件：溫度95，時(shí)間16in，提取4次，采用此工藝提取的馬鞭石斛多糖提取率為18.640.396%，顯著高于傳統(tǒng)熱回流法的提取率。結(jié)論該工藝具有良好的精細(xì)度和穩(wěn)定性，重復(fù)性好，適用于馬鞭石斛多糖的提齲【關(guān)鍵詞】超聲波輔助提?。欢嗵?；馬鞭石斛；提取工藝Abstrat：bjetiveTptiizetheextratinpressfplysaharid

2、efrD.fibriatuHk.var.ulatuHkbyultrasnihtrefluxassisted.ethdsnthebasisfsinglefatrexperients,theextratinpressasptiizedbyrthgnalexperientaldesignneffetsfextratinteperature,ultrasni-irradiatintieandextratinties.Theyieldfplysaharideasusedtevaluatethefatrlevels.ResultsTheptiunditinseredeterinedasflls:ultra

3、sni-irradiatin16inat95andextratinfurties.Theextratinratefplysaharidereahed18.640.40%byusingtheethd,hihasuhbetterthanhtrefluxextratinethd.nlusinThattheethdissipleithhighauray,gdstabilityandreprduibility,andanbeusedtextratplysaharidefrD.fibriatuHk.var.ulatuHk.2方法2.1超聲波輔助熱回流提取流程馬鞭石斛60枯燥粉碎過(guò)40目篩稱(chēng)取石斛干粉石油醚

4、回流去脂80%乙醇回流去低聚糖超聲波輔助熱回流提鰓紫外分光光度計(jì)檢測(cè)吸光度。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備對(duì)照品溶液的制備：精細(xì)稱(chēng)取105枯燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品0.0250g，加水溶解，250l容量瓶定容，即得0.1gl-1的葡萄糖對(duì)照品液。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備：精細(xì)量取上述對(duì)照品液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0l于具塞試管中，分別加水至2.0l，各參加5%苯酚溶液1.0l，搖勻，迅速參加濃硫酸5.0l，搖勻，放置10in，置40水浴保溫15in，取出迅速冷卻至室溫，紫外分光光度計(jì)490n處測(cè)定吸光度，空白對(duì)照以2.0l蒸餾水代替葡萄糖液。以吸光度為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，回歸方程為：Y=

5、0.0686X-0.0003r=0.999式中Y濃度gl-1；X吸光度值A(chǔ)多糖的提取率按下式計(jì)算：多糖的提取率%=濃度稀釋倍數(shù)樣品溶液體積樣品質(zhì)量100%2.3單因素實(shí)驗(yàn)溫度對(duì)多糖提取的影響分別考察40，50，60，70，80，90對(duì)多糖提取率的影響。時(shí)間對(duì)多糖提取的影響主要考察4，8，12，16，20，24，28in7個(gè)程度；以挑選的最正確溫度和提取時(shí)間考察超聲波提取次數(shù)1，2，3，4次對(duì)馬鞭石斛多糖提取的影響。2.4提取工藝正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)在單因素實(shí)驗(yàn)根底上，對(duì)提取溫度、提取時(shí)間和提取次數(shù)進(jìn)展L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，挑選最優(yōu)提取工藝。對(duì)挑選出來(lái)的最優(yōu)提取工藝進(jìn)展精細(xì)度、重復(fù)性、穩(wěn)定性等方法學(xué)考察

6、，同時(shí)將其與傳統(tǒng)熱回流工藝的提取效率進(jìn)展比擬。2.5實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所有處理都設(shè)3個(gè)平行樣，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)利用SPSS軟件分析。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果3.1單因素實(shí)驗(yàn)3.1.1提取溫度對(duì)多糖提取的影響以超聲波提取16in，提取1次，考察溫度對(duì)提取率的影響，結(jié)果見(jiàn)圖1。隨溫度的升高，多糖的提取率顯著增大，但當(dāng)溫度到達(dá)90后，提取率增加不明顯，應(yīng)選取90作為提取溫度挑選其他因素。3.1.2提取時(shí)間對(duì)多糖提取的影響以提取溫度90，提取1次，考察超聲波提取時(shí)間4，8，12，16，20，24，28in對(duì)馬鞭石斛多糖提取的影響。結(jié)果見(jiàn)圖2。隨提取時(shí)間的增加，多糖的提取率顯著增大，但當(dāng)時(shí)間到

7、達(dá)16in后，提取率卻略有降低，應(yīng)選取16in作為提取時(shí)間挑選其他因素。3.1.3提取次數(shù)對(duì)多糖提取的影響以提取溫度90，提取時(shí)間16in，考察超聲波提取次數(shù)1、2、3、4次對(duì)馬鞭石斛多糖提取的影響。結(jié)果見(jiàn)圖3。說(shuō)明隨提取次數(shù)的增加，多糖的提取率顯著增大，但提取3次以后，隨著提取次數(shù)的增加，提取率增加緩慢。由于提取次數(shù)的增加，本錢(qián)迅速增加，因此實(shí)際消費(fèi)中，提取次數(shù)不宜過(guò)多，應(yīng)選擇24次來(lái)進(jìn)展正交實(shí)驗(yàn)。3.2正交實(shí)驗(yàn)在單因素實(shí)驗(yàn)根底上，對(duì)提取溫度、提取時(shí)間和提取次數(shù)進(jìn)展L9(34)正交設(shè)計(jì)見(jiàn)表1，結(jié)果見(jiàn)表2。表1超聲波輔助提取正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，表2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果略實(shí)驗(yàn)因素的主次分析：從表2中可知，極差

8、值中R為17.38，RB為5.46，RA為4.9。說(shuō)明因素提取次數(shù)影響最大，其次是B和A，影響因素主次順序?yàn)锽A；優(yōu)程度為A3B23，即溫度為95，時(shí)間為16in，提取4次。實(shí)驗(yàn)因素顯著性分析：從表3可知，提取溫度，時(shí)間均對(duì)馬鞭石斛多糖提取具有顯著影響，而提取次數(shù)具有極顯著影響。表3正交設(shè)計(jì)方差分析略3.3精細(xì)度實(shí)驗(yàn)按照最優(yōu)工藝制備馬鞭石斛多糖樣品液1份，同時(shí)取樣5次，紫外分光光度計(jì)490n處測(cè)定吸光度，檢測(cè)方法的精細(xì)度。結(jié)果說(shuō)明，5個(gè)樣品液的吸光度分別為0.412，0.404，0.419，0.410和0.417，平均值為0.412，樣品液的吸光度的RSD=1.441%n=5，說(shuō)明本方法精細(xì)度

9、良好。3.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)分別在0，30，60，90，120in檢測(cè)按最優(yōu)提取工藝制備的樣品液的吸光度，考察該方法在120in內(nèi)的穩(wěn)定性。結(jié)果說(shuō)明，樣品吸光度A分別為0.415，0.416，0.409，0.407和0.405，樣品吸光度的RSD=1.189%n=5，不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)的樣品液的吸光度值無(wú)顯著差異，說(shuō)明樣品液和標(biāo)準(zhǔn)液在120in內(nèi)根本穩(wěn)定。3.5重復(fù)性實(shí)驗(yàn)按照挑選出的最優(yōu)提取工藝分別制備5份樣品液，測(cè)定其吸光度值。5份樣品的吸光度值無(wú)顯著差異，RSD=1.700%n=5，說(shuō)明該方法具有良好的重現(xiàn)性。3.6超聲輔助熱回流提取與傳統(tǒng)熱回流提取效率的比擬將挑選出來(lái)的最優(yōu)工藝與傳統(tǒng)熱回流提取2h

10、的提取效率進(jìn)展比擬。結(jié)果說(shuō)明，超聲波輔助熱回流提取法的多糖提取率為18.640.396%，而傳統(tǒng)熱回流法的提取率為12.070.100%，說(shuō)明采用超聲波輔助熱回流提取馬鞭石斛多糖不僅縮短了提取時(shí)間，而且顯著增大了提取率。4討論實(shí)驗(yàn)建立了利用超聲波輔助熱回流技術(shù)提取馬鞭石斛多糖的方法。通過(guò)正交設(shè)計(jì)對(duì)提取溫度、時(shí)間以及提取次數(shù)進(jìn)展優(yōu)化，結(jié)果說(shuō)明提取次數(shù)對(duì)馬鞭石斛多糖提取具有顯著的影響，優(yōu)程度為A3B23，即溫度為95，時(shí)間為16in，提取4次。經(jīng)方法學(xué)考察，本方法具有良好的精細(xì)度和穩(wěn)定性，且重復(fù)性好。與傳統(tǒng)熱回流法相比，超聲波輔助熱回流技術(shù)最大的優(yōu)點(diǎn)就是提取時(shí)間短、效率高，大大節(jié)省了消費(fèi)能耗，這一

11、點(diǎn)也可以從我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中得到佐證。分析原因，可能正是由于超聲波的機(jī)械效應(yīng)、空化效應(yīng)和熱效應(yīng)，增大了介質(zhì)分子的運(yùn)動(dòng)速度和介質(zhì)的穿透力，從而更好的進(jìn)步了有效成分的提取效率。目前利用超聲波技術(shù)提取天然產(chǎn)物時(shí)，通常未結(jié)合加熱處理，直接利用超聲波自身產(chǎn)生的熱效應(yīng)來(lái)增大提取率，但超聲波的熱效應(yīng)畢竟是瞬時(shí)的，對(duì)于提取率的增加效應(yīng)較弱。因此實(shí)驗(yàn)在采用超聲波提取的同時(shí)，結(jié)合熱回流技術(shù)提取馬鞭石斛多糖，并對(duì)提取條件進(jìn)展優(yōu)化，尋找節(jié)時(shí)、節(jié)能、得率高的提取工藝，為其工業(yè)消費(fèi)提供實(shí)驗(yàn)根據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1包雪聲，順慶生，陳立鉆.中國(guó)藥用石斛.上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社，2001.2陳云龍，何國(guó)慶，張銘，等.細(xì)莖石斛多糖的

12、降血糖活性作用J.浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(理學(xué)版)，2022，306：693.3吳昊姝，徐建華，陳立鉆，等.鐵皮石斛降血糖作用及其機(jī)制的研究J.中國(guó)中藥雜志，2022，292：160.4ZhaY,SnY,KiSS,etal.Antixidantandanti-hyperglyeiativityfplysaharideislatedfrDendrbiuhrystxuLindlJ.JBihelBil，2022,40(5):670.5ZhaXQ,LuJP,LuSZ,etal.StrutureidentifiatinfaneiunstiulatingplysaharidefrthestesfDendrbiuhushanens