1、高效液相色譜法測定甘草中甘草查爾酮A的含量【摘要】目的建立甘草中甘草查爾酮A的含量測定方法。方法采用高效液相色譜HPL法，使用HypersilDS2色譜柱4.6250,5，以甲醇-水-冰醋酸60401為流動相，流速1.0lin-1,檢測波長為372n，柱溫25。結(jié)果甘草查爾酮A線性范圍0.21.0g,r=0.9992；精細度實驗RSD為1.51%；重復(fù)性實驗RSD為2.54%；穩(wěn)定性實驗RSD為1.72%；平均加樣回收率98.76%，RSD=1.94%。結(jié)論該方法靈敏、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可作為甘草中甘草查爾酮A的含量測定方法?！娟P(guān)鍵詞】甘草甘草查爾酮A高效液相色譜法Abstrat：bjetive

2、TestablishadeterinatinethdflihalneAinLirie.ethdsUsingHPLethd,thesystensistedfHypersilDS2lun(4.6250,5),bilephasefethanl-ater-glaialaetiaid(60401)ixture,ithaflratef1.0lin-1;detetinavelengthasat372nlunteperaturef25.ResultsLinearrangeas0.11.0giththerf0.9992,preisintest,repeatintest,andstabilitytestere1.

3、51%,2.54%and1.72%,respetively.Theeanreveryas98.76%,ithrespetivelyRSDf1.94%.nlusinTheethedissensitive,aurateandithgdreprduibilityandanbeusedasthedeterinatinethdflihalneA.Keyrds：Lirie;LihalneA;HPL藥用甘草為豆科植物烏拉爾甘草GlyyrrhizauralensisFish.，脹果甘草GlyyrrhizainflataBat.或光果甘草GlyyrrhizaglabraL.的枯燥根及根莖，是多年生藥用草本植物。

4、植化研究說明甘草中存在大量的酚類成分，這些具有生物活性的成分有望成為開發(fā)新藥的來源1。甘草查爾酮A(lihalneA)是存在于甘草中的一種酚類查爾酮化合物2，臨床及藥理研究說明，甘草查爾酮A具有抗氧化3、抗炎4、抗菌5、抗腫瘤6、抗利什曼原蟲病7、免疫促進和雌激素樣8等活性，在臨床上具有廣泛的應(yīng)用前景，但有關(guān)其含量測定的方法還未見報道。本文建立了甘草查爾酮A的HPL含量測定方法，為進一步開發(fā)甘草中這一重要活性成分提供簡便可行的檢測方法。1儀器與試劑美國Agilent1100液相色譜儀系統(tǒng)；KQ-100DB型數(shù)控超聲波清洗器昆山市超聲儀器。甘草由新疆昆侖神農(nóng)贈送，經(jīng)新疆甘草種植中心鑒定分別為烏拉

5、爾甘草GlyyrrhizauralensisFish.，脹果甘草GlyyrrhizainflataBat.和光果甘草GlyyrrhizaglabraL.。甘草查爾酮A對照品，本實驗室自制，經(jīng)質(zhì)譜、碳譜和氫譜鑒定為甘草查爾酮A(lihalneA),歸一化測定含量為98.81%。乙腈、甲醇為色譜純；水為重蒸水；其他試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1溶液制備2.1.1對照品溶液的制備準(zhǔn)確稱取在60枯燥至恒重的甘草查爾酮A對照品適量，用流動相配成濃度為0.1gl-1的對照品儲藏液，待用。2.1.2供試品溶液的制備準(zhǔn)確稱取枯燥恒重甘草粉末過60目篩0.5g，置100l具篩錐形瓶中，參加甲醇25l，超聲處

6、理功率200，頻率40kHz30in，過濾，再參加甲醇20l，超聲處理30in，合并濾液，減壓濃縮至干，加流動相溶解并定容至50l，微孔濾膜(0.45)過濾，即得供試品溶液。2.2色譜條件色譜柱為大連依利特HypersilDS218柱(4.6250,5)；柱溫25；流動相為甲醇-水-冰醋酸(60401)；檢測波長372n；流速1.0lin-1。2.3方法學(xué)考察2.3.1線性關(guān)系考察準(zhǔn)確汲取甘草查爾酮A對照品儲藏液2，4，6，8，10l分別置于5個10l容量瓶中，用流動相稀釋至刻度。分別汲取上述對照品溶液各10l，依次注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以濃度(g/l)為橫坐標(biāo)，色譜峰面積

7、A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：A=41308-142057，r=0.9992，線性范圍為：0.21.0g。2.3.2精細度實驗準(zhǔn)確汲取濃度為100gl-1的甘草查爾酮A標(biāo)準(zhǔn)品溶液10l，重復(fù)進樣5次，測得峰面積值，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏向RSD為1.51%，說明儀器良好。2.3.3重復(fù)性實驗準(zhǔn)確稱取同一批次的脹果甘草5份，按“2.1.2項下制備樣品溶液，依次測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算甘草查爾酮A的含量，計算甘草查爾酮A含量的RSD為2.54%，說明實驗方法重復(fù)性較好。2.3.4穩(wěn)定性實驗取同一份待測供試品溶液，在0,2,4,8,12h進樣測定，測得甘草查爾酮A峰面積值并計算樣品峰面積的RSD為1

8、.72%，說明供試品溶液于12h內(nèi)穩(wěn)定。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3.5加樣回收率實驗準(zhǔn)確稱取含量的樣品約0.1g(共5份)，精細參加0.10g/l的甘草查爾酮A標(biāo)準(zhǔn)品1l，按“2.1.2項下方法制備所需溶液，測定并計算含量。表1結(jié)果說明甘草查爾酮A平均回收率為98.76%，RSD為1.94%。表1樣品加樣回收率實驗結(jié)果略2.4樣品測定按照本方法的測定條件，分別測定?中國藥典?收錄的3種甘草樣品，計算甘草查爾酮A的含量，結(jié)果見表2。甘草查爾酮A標(biāo)準(zhǔn)品及樣品HPL圖譜見圖12。表2甘草查爾酮A含量測定結(jié)果略3討論3.1色譜條件選擇比擬了乙腈-水(6040)、甲醇-水(7030)、甲醇-水-冰醋酸

9、(60401)、乙腈-甲醇-水(403030)等流動相體系，結(jié)果第3種流動相別離效果最好，所以，本文選用甲醇-水-冰醋酸(60401)為流動相。3.2溶液制備方法比擬了不同提取溶劑甲醇，乙醇，丙酮和提取方法回流提取，索氏提取，超聲提取的提取效果，結(jié)果說明甲醇對甘草查爾酮A的提取效果優(yōu)于其他兩種溶劑，索氏提取和超聲提取的效果相當(dāng)，均優(yōu)于回流提取，但索氏提取耗時較長，故本文以甲醇為提取劑采用超聲提取制備樣品供試溶液。3.3檢測波長的選擇在200700n之間對甘草查爾酮A對照品溶液進展光譜掃描，結(jié)果說明在372n處有極大吸收，應(yīng)選擇372n為檢測波長。結(jié)果說明該方法簡單，快捷，專屬性強，準(zhǔn)確度高，具

10、有良好的重復(fù)性，可用于甘草中甘草查爾酮A的含量測定?！緟⒖嘉墨I】1ShibataS.Adrugvertheillennia:pharagnsy,heistry,andpharalgyflirieJ.YakugakuZasshi，2000,120(10):849.2angQE,LeeS,angXR.IslatinandpurifiatinfinflauarinAandlihalneAfrliriebyhigh-speedunter-urrenthratgraphyJ.JhratgrA.2022,1048(1):51.3HaraguhiH,IshikaaH,izutaniK,etal.Antixi

11、dativeandsuperxidesavengingativitiesfretrhalnesinGlyyrrhizainflataJ.Birgedhe，1998,6(3):339.4uiY,AZ,Li,etal.Anti-inflaatryativityflihalneAislatedfrGlyyrrhizainflataJ.ZNaturfrsh，2022,63:361.5HaraguhiH,TanitK,TauraY,etal.defantibaterialatinfretrhalnesfrGlyyrrhizainflataJ.Phytheistry，1998,48(1):125.6IataS,NishinT,InueH,etal.Antiturigeniativitiesfhalnes(II).Pht-iserizatinfhalnesandtherrelatiniththEirbilgialativitiesJ.BilPharBull，1997,20(12):1266.7hen,ZhaiL,hristensenSB,etal.InhibitinffuarateredutaseinLEIshan