1、一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆瘴⑸锍Ｒ?guī)培養(yǎng)基的制備方法學(xué)習(xí)無(wú)菌技術(shù) 學(xué)習(xí)玻璃器皿的包扎實(shí)驗(yàn)四 微生物培養(yǎng)基的配制與無(wú)菌技術(shù) 二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、6種培養(yǎng)基的配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（細(xì)菌）高氏一號(hào)培養(yǎng)基（放線菌）馬丁氏培養(yǎng)基（真菌）淀粉培養(yǎng)基（淀粉水解試驗(yàn)）蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗(yàn)）葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基（V.P試驗(yàn)）2、 移液管、培養(yǎng)皿、三角瓶、試管等的包扎3、滅菌實(shí)驗(yàn)四 微生物培養(yǎng)基的配制 無(wú)菌水的準(zhǔn)備三、實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基medium:用人工的辦法將多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按微生物生長(zhǎng)代謝的需要配制成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。水、C源、N源、礦物質(zhì)、生長(zhǎng)因素/因子、微量元素培養(yǎng)基種類：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基、液體

2、培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)四 微生物培養(yǎng)基的配制 培養(yǎng)基分裝裝置 斜面擺放法 棉塞的做法a)棉塞的制作過(guò)程 (b)正誤棉塞培養(yǎng)皿的包扎五、無(wú)菌技術(shù)常用的滅菌方法干熱滅菌熱蒸汽滅菌常壓滅菌過(guò)濾除菌射線滅菌化學(xué)藥物滅菌 2、干熱滅菌 用干燥熱空氣（160, 12h）殺死微生物培養(yǎng)皿、漏斗、吸管、玻璃器具、解剖刀，接種、鑷子、剪刀等能耐高溫的器皿晾干后用牛皮紙包好溫度升到100，開箱內(nèi)鼓風(fēng)機(jī)培養(yǎng)基、橡膠塑料制品不能用此方法注意安全干熱滅菌箱鼓風(fēng)鈕溫度調(diào)節(jié)器指示燈溫度調(diào)節(jié)旋扭溫度計(jì)與排氣孔3、濕熱滅菌 常壓蒸汽間歇滅菌 將待滅菌的培養(yǎng)基或物品裝入常壓滅菌器

3、內(nèi)，加熱至100大量產(chǎn)生氣體時(shí),維持3060min,每天滅菌一次,連續(xù)滅菌三天.每次蒸煮間隙里,培養(yǎng)基或物品應(yīng)放在室溫(20-30)條件下培養(yǎng),第一次蒸煮殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)體,芽孢則在培養(yǎng)過(guò)程中萌發(fā)成營(yíng)養(yǎng)體;第二次蒸煮即可殺死.經(jīng)過(guò)二次培養(yǎng),三次反復(fù)蒸煮,即可達(dá)到完全滅菌。常壓蒸汽持續(xù)滅菌高壓蒸汽滅菌3、濕熱滅菌 常壓蒸汽間歇滅菌常壓蒸汽持續(xù)滅菌 常壓蒸汽持續(xù)滅菌中,從蒸汽大量產(chǎn)生開始,繼續(xù)加大火力保持充足蒸汽,持續(xù)加熱36h,殺死絕大部分芽孢和全部營(yíng)養(yǎng)體,達(dá)到滅菌目的。高壓蒸汽滅菌3、濕熱滅菌 高壓蒸汽滅菌原理：水的沸點(diǎn)隨壓力的增加而提高。水在密閉的加壓蒸汽滅菌器中煮沸，產(chǎn)生蒸汽驅(qū)除鍋內(nèi)冷空氣

4、后，使蒸汽不能逸出，因而增加了鍋中的蒸汽壓力。蒸汽壓力提高，水的沸點(diǎn)隨著上升，因而能夠獲得比100更高的蒸汽溫度，用來(lái)進(jìn)行有效的滅菌。同一溫度下，濕熱滅菌法比干熱滅菌法效果好蒸汽穿透力強(qiáng)蛋白質(zhì)含水量高，易于凝固臥式滅菌鍋 是指含菌液體或氣體通過(guò)細(xì)菌濾器，使雜菌留在濾器或?yàn)V板上，從而除去雜菌。常用于許多不宜用濕熱滅菌的液體物質(zhì)，如抗生素、血清、糖類溶液等。用于除菌的細(xì)菌過(guò)濾器，是由孔徑極小，能阻止擋的陶瓷、硅藻土、石棉或玻璃粉等制成.為了加快過(guò)濾,一般多采用抽氣減壓的方法,進(jìn)行操作。4、過(guò)濾除菌 輻射滅菌(Radiation Sterilization)是利用電磁輻射產(chǎn)生的電磁波殺死大多數(shù)物質(zhì)上

5、的微生物的一種有效方法。用于滅菌的電磁波有微波，紫外線(UV)、X-射線和-射線等。5、射線滅菌酚類損傷微生物細(xì)胞壁和細(xì)胞膜、酶鈍化、蛋白質(zhì)變性 醇類溶解膜中的類脂，破壞膜結(jié)構(gòu)，使蛋白變性（純的或高濃度酒精使菌體表面蛋白凝固，使乙醇不易滲進(jìn)細(xì)胞） 醛類與蛋白質(zhì)中氨基酸的多種基團(tuán)共價(jià)結(jié)合而使其變性 酸類抑制微生物酶和代謝活性 表面活性劑改變細(xì)胞的穩(wěn)定性和透性，細(xì)胞物質(zhì)逸出 鹵化物與細(xì)胞中的酶和蛋白質(zhì)中的酪氨酸結(jié)合，Cl2和漂白粉產(chǎn)生次氯酸和新生態(tài)氧（強(qiáng)氧化劑），破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)6、化學(xué)藥劑消毒或滅菌作用機(jī)理：重金屬與酶或蛋白質(zhì)上的SH結(jié)合 氧化劑使細(xì)胞成份氧化 染色劑堿性染料的陽(yáng)離子基團(tuán)與蛋白質(zhì)氨

6、基酸上的羧基或核酸上的 磷酸基結(jié)合，阻礙正常代謝 抗生素多種機(jī)理：作用于細(xì)胞壁、膜、蛋白質(zhì)、核酸等大分子合成 抗代謝物競(jìng)爭(zhēng)抑制，如磺胺類藥物于對(duì)氨基苯甲酸類似，阻止葉 酸的合成 6、化學(xué)藥劑消毒或滅菌作用機(jī)理：升汞（ 0.1% HgCl2）漂白粉10g/150mlNaClO（2-10%）酒精75%苯酚（1%）福爾馬林（5%）過(guò)氧化氫（3%）氰化汞（0.1%）高錳酸鉀（2%）硝酸銀(0.1%)常用表面消毒劑酸性培養(yǎng)基: 如10ml培養(yǎng)基中加三滴25%的乳酸 孟加拉紅：0.035 g /L培養(yǎng)基抗菌素:金霉素（30g/ml）可抑制多數(shù)細(xì)菌;青霉素（20g/ml）可抑制G+細(xì)菌;多粘霉素（5.0g/ml）可抑制G-細(xì)菌;鏈霉素(40g/ml)和氯霉素(50g/ml)可抑制大部細(xì)菌. 除氯霉素可滅菌前加入外，其它抗菌素都是在培養(yǎng)基滅菌后并冷卻到45左右時(shí)加入. 雙層培養(yǎng)基或蓋玻片 細(xì)菌污染的排除 抑制真菌：50100