1、細菌形態(tài)學(xué)檢查技術(shù) 微生物室標(biāo)本涂片的制備標(biāo)本片的制備制片的玻片應(yīng)干凈。因為灰塵和脂肪可能干擾標(biāo)本對載玻片的附著和染色的過程。制片的標(biāo)本最好是通過選擇出來最有可能揭示病原體的那部分。標(biāo)本涂片的制備對于特殊標(biāo)本（膿液、組織等）應(yīng)多制備幾張涂片，以備做其它染色用。為了充分鑒定標(biāo)本，涂片的標(biāo)本應(yīng)足夠量，但不能過厚。標(biāo)本涂片的制備 穿刺液和體液的涂片 依據(jù)標(biāo)本量和可使用的設(shè)備可選擇幾種不同的方法：1）標(biāo)本量少 直接取標(biāo)本涂片2）標(biāo)本足量 大于1毫升量的標(biāo)本進行離心涂片。 革蘭染色離心（3000r/min,15mim) 抗酸染色離心（4000r/min,30mim）細菌的鏡下形態(tài)細菌的形態(tài)、排列球形：雙

2、球菌:在一個平面上分裂成雙排列。 鏈球菌：在一個平面上分裂，成鏈狀排列。 四聯(lián)球菌:在兩個相互垂直的平面上分裂，以四個球菌排呈方形。 八迭球菌:在三個互相垂直的平面上分裂，八個菌體重疊呈立方體狀。 葡萄球菌 :在幾個不規(guī)則的平面上分裂，則菌體多堆積在一起，而呈葡 萄狀排列。 桿狀：大的桿菌如炭疽桿菌。 小的如野兔熱桿菌 。螺旋狀：弧菌（Vibrio）菌體只有一個彎曲，呈弧狀或逗點狀。如霍亂弧菌。 螺菌（Spirillum）菌體有數(shù)個彎曲。如鼠咬熱螺菌。 細菌的鏡下形態(tài)細菌的染色性、大小、形態(tài)、排列與下列因素有關(guān) 分離物（標(biāo)本）的來源細菌的種類培養(yǎng)基成分：液體、固體培養(yǎng)物（菌落）的年齡 46h培

3、養(yǎng)物的革蘭氏染色性好,前后對比其形態(tài)相對大。24h后培養(yǎng)物的革蘭氏染色性差,形態(tài)相對變小,特別是有些菌體輪廓不清晰。無法使用革蘭染色區(qū)分陰陽性時，使用拉絲實驗。革蘭氏染色革蘭氏染色原理 染色液 染色方法 注意事項及影響因素質(zhì)量控制鏡檢與報告方式革蘭氏染色原理：G+菌細胞壁結(jié)構(gòu)：較致密，肽聚糖層厚，脂質(zhì)少，酒精不容易透入并可使細胞壁脫水形成一層屏障，阻止結(jié)晶紫-碘復(fù)合物從胞內(nèi)滲出。G+菌等電點（PI2-3）：比G+菌（PI4-5）低，在相同pH染色環(huán)境中，G+菌所帶負電荷比G-菌多，故與帶正電荷的結(jié)晶紫染料結(jié)合較牢固，不容易脫色。G+菌體內(nèi)有核糖核酸鎂鹽與多糖復(fù)合物，易和結(jié)晶紫-碘復(fù)合物結(jié)合而不

4、易脫色 。注意事項及影響因素操作因素： 涂片的厚薄 每一步驟時間的長短染液因素： 盧戈碘液放置時間過長 95乙醇揮發(fā) 流水細菌因素： 細菌種類 細菌菌齡 生長環(huán)境 革蘭染色質(zhì)量控制 用標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922 大腸埃希菌（革蘭氏陰性菌）、ATCC25923 金黃色葡萄球菌（革蘭氏陽性菌）進行革蘭染色質(zhì)控，質(zhì)控頻率為新開瓶和每日一次。我們可以從涂片中得到的信息鏡下見到典型形態(tài)菌體，可直接報告臨床，靶向用藥時間提前。如：新隱、肺鏈、芽孢桿菌等，為挽救病人生命爭取時間。重視直接涂片為判斷污染菌或致病菌提供依據(jù)：如細胞內(nèi)吞噬等。重視直接涂片有時比培養(yǎng)更具價值：如判斷大便菌群比例失調(diào)。重視直接涂片為病

5、人提供申請外的信息，拓展醫(yī)生思路：如粘液銅綠、分枝桿菌等。顯微鏡檢報告方式細菌顯微鏡檢報告方式客觀描述細菌在鏡下的染色性、形態(tài)、大小、數(shù)量。 報告時不要拘于報告格式限制,祥實描述。細菌數(shù)量的描述油鏡計數(shù)細菌30個細菌/油鏡為大量,用4+表示 摘自2009北京衛(wèi)生部臨床檢驗中心微生物培訓(xùn)會議痰標(biāo)本的涂片報告報告白細胞和上皮細胞在低倍鏡下的數(shù)目/平均視野。客觀描述油鏡下細菌的染色性、形態(tài)、大小、數(shù)量。金黃色葡萄球菌傷口感染的直接涂片金黃色葡萄球菌在液體培養(yǎng)基中的形態(tài)星座鏈球菌革蘭陽性球菌，成雙或短鏈排列淋球菌淋球菌形態(tài)與腦膜炎球菌相似。革蘭染色陰性，圓形或卵圓形，直徑約為0.8m。常呈雙排列，菌體

6、相接觸面略凹陷，形似一對咖啡豆。急性淋病患者標(biāo)本涂片鏡下觀察時，淋球菌多存在于中性粒細胞內(nèi)，慢性淋病時則多在細胞外。淋球菌無鞭毛，但有菌毛，不形成芽胞，分離初期有莢膜。X1000吞噬現(xiàn)象 包括中性粒細胞的非特異性吞噬和巨噬細胞的特異性吞噬，注意要區(qū)別于黏附。伴行現(xiàn)象 未被炎性細胞包裹的病原菌分布在炎性細胞周圍者，需要區(qū)別于污染菌，很考驗水平。包裹現(xiàn)象 有些病原微生物自身具有抗吞噬能力（如莢膜等），炎性細胞不能將其吞噬，而是將其包裹起來，形成膿球。腹腔引流液（厭氧菌？）化膿鏈隱球菌涂片鏡檢的質(zhì)量控制顯微鏡檢報告方式真菌顯微鏡檢報告方式 描述報告真菌鏡下的形態(tài)（孢子、菌絲），數(shù)量。 以我院臨床涂片報告為例學(xué)習(xí)微生物的鏡檢報告方式涂片檢驗的質(zhì)量控制應(yīng)建立涂片檢查的室內(nèi)和室間質(zhì)控制度。痰液中常見物質(zhì)涂片痰液質(zhì)量控制痰液質(zhì)控原因直接涂片鏡下觀察：1.白細胞內(nèi)吞噬細菌與感染相關(guān)度高。2