1、第 八 章 消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 The animal models of digestives system diseases消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型第 八 章 消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 The anim講授內(nèi)容胃炎動(dòng)物模型消化性潰瘍模型病毒性肝炎模型（乙型肝炎）脂肪肝、肝硬化模型胰腺炎模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型講授內(nèi)容胃炎動(dòng)物模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型第 一 節(jié) 急性胃炎動(dòng)物模型 消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型第 一 節(jié) 急性胃炎動(dòng)物模型 消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型Gastritis胃黏膜層的炎癥（上皮細(xì)胞、固有層、黏膜肌）上皮細(xì)胞固有層黏膜肌急性固有層中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)糜爛出血慢性淺表性：淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)萎縮性：炎

2、性細(xì)胞浸潤(rùn)，固有層腺 體減少，細(xì)胞增生損傷與修復(fù)交替進(jìn)行，病程遷延消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型Gastritis胃黏膜層的炎癥（上皮細(xì)胞、固有層、黏膜?。┪秆啄Ｐ偷姆N類1、HP法2、藥物、乙醇、應(yīng)激法3、非甾體抗炎藥法4、復(fù)合法5、酸制劑法消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型胃炎模型的種類1、HP法消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型HP法Helicobacter pylori Spiral-shaped Gram-negative, oxidase and catalase-positive motile bacterium with 4-6 flagella (Thruster and anchor) Microaerophil

3、ic, i.e. it requires oxygen but at lower levels than those contained in the atmosphere (5-8%) With its flagella and its spiral shape, the bacterium drills into the mucus layer of the stomach, and can either be found suspended in the gastric mucosa or attached to epithelial cellsBarry J. Marshall and

4、 J. Robin Warren got the Nobel Prize in 2005 2005諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)， Warren和Marshall消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型HP法Helicobacter pylori Spiral- Produces adhesins which bind to membrane- associated lipids and carbohydrates and help its adhesion to epithelial cells Breaks down urea (NH2CONH2) to NH3 and HCO-3 Stomach acidity Chassa

5、ing B. Gastroenterology, 2011,140(6):17208消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 Produces adhesins which b實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠（18-22g），蒙古沙鼠（55-60g），仔犬、仔豬操作方法HP標(biāo)準(zhǔn)菌株灌胃（109-1010CFU/ml）法實(shí)驗(yàn)前12小時(shí)禁食禁水實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)，0.1mol/L 碳酸氫鈉0.5ml灌胃0.5ml /只/次 每?jī)商煲淮危ǜ籼旃辔福?周時(shí)模型成功率90%保證HP活性及濃度消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠（18-22g），蒙古沙鼠（55-60g），仔犬INFLAMMATIONGASTRITISMAP3KINASESmuropept

6、ideNaumann M, Trends in Microbiology, 2004, 12(1): 2936H. Pylori induces inflammation消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型INFLAMMATIONGASTRITISMAP3KINAS體重300g左右雄性Wistar大鼠。酸制劑法急性胃炎動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型體重300g左右雄性Wistar大鼠。酸制劑法急性胃炎動(dòng)物模 大鼠禁食24h，在清醒狀態(tài)下，用下述試劑或物質(zhì)灌胃：（1）水楊酸制劑（如20 mmol/L阿司匹林或水楊 酸溶液）按100 mg/kg體重灌胃；（2）10 mmol/L的醋酸；（3）不同濃度的鹽酸（

7、1，10，100 mmol/L）；（4）同種動(dòng)物膽汁；（5）2 mmol/L的牛磺膽酸；（6）15%的乙醇； （2）-（6）可單獨(dú)或幾種合用（2ml左右）灌胃； 急性胃炎動(dòng)物模型操作方法消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型11 大鼠禁食24h，在清醒狀態(tài)下，用下述試劑或物質(zhì)灌胃： 4h后處死動(dòng)物，剖檢可見(jiàn)胃內(nèi)發(fā)生急性彌漫性炎癥改變。 胃黏膜表面有淺表糜爛、出血，粘膜層內(nèi)見(jiàn)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。急性胃炎動(dòng)物模型結(jié) 果病 變消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 4h后處死動(dòng)物，剖檢可見(jiàn)胃內(nèi)發(fā)生急性 胃消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型觀察指標(biāo)：？組織：HE，免疫熒光，干濕重比等 NOS， PGE2等PCR：特定基因或炎癥因子We

8、stern：特定激酶或信號(hào)分子，特定基因等消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型觀察指標(biāo)：？組織：HE，免疫熒光，干濕重比等消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物第 二 節(jié) 急性胃潰瘍動(dòng)物模型 消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型第 二 節(jié) 急性胃潰瘍動(dòng)物模型 消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型潰瘍病的病因致潰瘍因素:胃酸、胃蛋白酶、非甾體抗炎藥不合理應(yīng)用、幽門螺桿菌感染等。防御因素：粘液-碳酸氫鹽屏障、粘膜屏障、粘膜血流量、胃上皮細(xì)胞的更新、表皮生長(zhǎng)因子和內(nèi)生性前列腺素等。潰瘍的形成主要由于防御因素和致潰瘍因素的平衡失調(diào)所致。消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型潰瘍病的病因致潰瘍因素:胃酸、胃蛋白酶、非甾體抗炎藥不合理應(yīng) 應(yīng)激法 幽門結(jié)扎法 藥物法 醋酸法 常用的方法急性胃潰

9、瘍動(dòng)物模型 在抗?jié)兯幬锼幮W(xué)試驗(yàn)中，應(yīng)激法、幽門結(jié)扎法和醋酸法制備的胃潰瘍模型為必做實(shí)驗(yàn)，利血平法和乙醇法可任選其一。乙醇組胺促胃液素腎上腺類固醇水楊酸鹽血清素利血平保泰松消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 應(yīng)激法常用的方法急性胃潰瘍動(dòng)物模型 在 應(yīng)激法 幽門結(jié)扎法 藥物法 醋酸法 常用的方法急性胃潰瘍動(dòng)物模型治療性給藥醋酸法復(fù)制的模型預(yù)防性給藥其他模型乙醇組胺促胃液素腎上腺類固醇水楊酸鹽血清素利血平保泰松消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 應(yīng)激法常用的方法急性胃潰瘍動(dòng)物模型治療性給藥 應(yīng)激法 幽門結(jié)扎法 藥物法 醋酸法 常用的方法急性胃潰瘍動(dòng)物模型陽(yáng)性對(duì)照藥：H2受體拮抗藥西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁等加強(qiáng)胃黏膜防御

10、功能甘珀酸，果膠鉍，硫糖鋁乙醇組胺促胃液素腎上腺類固醇水楊酸鹽血清素利血平保泰松消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 應(yīng)激法常用的方法急性胃潰瘍動(dòng)物模型陽(yáng)性對(duì)照藥研究抗胃潰瘍藥物 胃黏膜形態(tài)觀察 胃分泌試驗(yàn) 胃黏膜血流量測(cè)量 胃粘液測(cè)定 抗炎鎮(zhèn)痛試驗(yàn) 抑制幽門螺桿菌試驗(yàn)等 消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型研究抗胃潰瘍藥物 胃黏膜形態(tài)觀察消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 幽門結(jié)扎后，可刺激胃液分泌并使高酸度胃液在胃中潴留，損傷胃黏膜造成胃潰瘍。 成年大鼠，雄雌均可。幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型造模機(jī)制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 幽門結(jié)扎后，可刺激胃液分泌并使

11、高酸度 成年1.給藥3天。實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食(24h)不禁水。2.自胸骨劍突下沿腹中線切開(kāi)腹壁，切口約23cm。在左側(cè)肋緣部位用手指輕輕上推暴露胃。3.在胃幽門與十二指腸連接處用結(jié)扎線將幽門結(jié)扎，注意勿將鄰近的其他器官、血管結(jié)扎。同時(shí)經(jīng)十二指腸給予受試藥?？p合腹壁切口，用紗布包扎切口。幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型操作方法消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型1.給藥3天。實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食(24h)不禁水。幽門結(jié)扎法胃潰4. 幽門結(jié)扎后，停止供水供食，術(shù)后18h處死大鼠，取胃固定、剖檢。5. 沿胃大彎剪開(kāi)胃壁，洗凈胃內(nèi)容物，將胃壁展開(kāi)，胃黏膜面向上用大頭釘固定在蠟板上。 6. 用肉眼或放大鏡觀察胃黏膜面，記錄每只動(dòng)物產(chǎn)生的潰瘍

12、數(shù)、潰瘍程度、潰瘍面積（或潰瘍指數(shù)）及病變的情況。幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型4. 幽門結(jié)扎后，停止供水供食，術(shù)后18h處死大鼠，取胃固定病變程度的評(píng)價(jià)1潰瘍面積 通過(guò)潰瘍中心量取的最大縱徑和橫徑 S=（d1/2）（d2/2） 式中S為潰瘍面積，d1為通過(guò)潰瘍中心量取的最大縱徑，d2為通過(guò)潰瘍中心量取的最大橫徑。 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型病變程度的評(píng)價(jià)1潰瘍面積 通過(guò)潰瘍中心量取的病變程度的評(píng)價(jià)2潰瘍指數(shù) 可計(jì)數(shù)前胃部潰瘍面積，以其總和作為潰瘍指數(shù)。 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型病變程度的評(píng)價(jià)2潰瘍指數(shù) 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模病變程度的評(píng)價(jià)3潰瘍程度（Oka

13、be法） 在解剖顯微鏡下測(cè)量潰瘍面積，將每只 鼠潰瘍面積的總合分為5個(gè)等級(jí)作為潰瘍指數(shù)：潰瘍面積(mm2)： 1-12 13-25 26-37 38-50 50mm2或穿孔潰瘍指數(shù): 1級(jí) 2級(jí) 3級(jí) 4級(jí) 5級(jí)幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型病變程度的評(píng)價(jià)3潰瘍程度（Okabe法） 在解剖顯微 模型組潰瘍指數(shù)給藥組潰瘍指數(shù)潰瘍抑制百分率 100% 模型組潰瘍指數(shù) 發(fā)生潰瘍的動(dòng)物數(shù)潰瘍發(fā)生百分率 100% 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)病變程度的評(píng)價(jià)3潰瘍程度（Okabe法）幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 模型組潰瘍指數(shù)給藥組潰瘍指數(shù) 形成的潰瘍主要發(fā)生在對(duì)胃液抵抗力較弱的前胃部（瘤胃），多為圓

14、形或橢圓形。 但病變較表淺，屬于胃黏膜急性出血性糜爛，與人類胃潰瘍的典型病變差距較大。結(jié) 果幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 形成的潰瘍主要發(fā)生在對(duì)胃液抵抗力較弱的前胃部（瘤胃 1.該模型是Shay等創(chuàng)立的模型，方法簡(jiǎn)單，潰瘍發(fā)生快，發(fā)生率達(dá)97%，主要用于觀察藥物對(duì)潰瘍形成的預(yù)防作用。幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型模型評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng) 2.原法規(guī)定大鼠禁食4872h。一般經(jīng)驗(yàn)是：體重小于180g，禁食2448h，這樣動(dòng)物可以耐受手術(shù)；體重超過(guò)180g，禁食4872h，可提高潰瘍發(fā)生率。 3.對(duì)籠具的要求。消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 1.該模型是Shay等創(chuàng)立的模型，方法簡(jiǎn)單，潰瘍發(fā) 4.術(shù)中要求。幽門

15、結(jié)扎法胃潰瘍模型模型評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng) 5.觀察藥物對(duì)潰瘍的影響時(shí)，動(dòng)物應(yīng)預(yù)先給藥或同時(shí)給藥，若粗制劑可采用灌胃給藥，應(yīng)確認(rèn)胃內(nèi)已排空后方能結(jié)扎幽門。粗制劑可在幽門結(jié)扎的同時(shí)采用十二指腸內(nèi)注入給藥較好。 6.陽(yáng)性對(duì)照藥:灌胃給予 西咪替?。浊柽潆遥?.0g/kg體重 雷尼替丁0.135g/kg體重消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 4.術(shù)中要求。幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型模型評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng)大鼠胃的解剖及幽門結(jié)扎法所致胃潰瘍圖消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型大鼠胃的解剖及幽門結(jié)扎法所致胃潰瘍圖消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型大鼠慢性胃潰瘍模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型34大鼠慢性胃潰瘍模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模

16、型34消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型35消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型35第 三 節(jié) 急性和慢性肝損傷動(dòng)物模型 消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型第 三 節(jié) 急性和慢性肝損傷動(dòng)物模型 消化系統(tǒng)疾病常用的肝損傷物質(zhì)四氯化碳D-半乳糖胺 硫代乙酰胺 刀豆蛋白A 消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型常用的肝損傷物質(zhì)四氯化碳消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型一、四氯化碳急性肝損傷模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型一、四氯化碳急性肝損傷模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 CCl4在肝內(nèi)經(jīng)NADPH和肝微粒體細(xì)胞色素P450混合功能氧化酶的作用，生成活潑的三氯甲基自由基（CCl3）和氯自由基（Cl3） 。這些自由基能與細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞膜上大分子發(fā)生共價(jià)結(jié)合，引起富含不飽和脂肪酸的生物膜發(fā)生脂

17、質(zhì)過(guò)氧化，導(dǎo)致膜結(jié)構(gòu)和功能完整性的破壞，肝細(xì)胞損傷壞死；三氯甲基自由基還能抑制細(xì)胞膜和微粒體膜上鈣泵的活性，使Ca2+內(nèi)流增加，從而引起細(xì)胞中毒死亡；三氯甲基自由基能與蛋白質(zhì)形成共價(jià)鍵，損害線粒體使NADH及ATP在肝內(nèi)生成減少，脂肪酸氧化受抑制，影響肝臟能量生成障礙，并使三酰甘油和脂肪酸在肝細(xì)胞內(nèi)蓄積。造模機(jī)制CCl4急性肝損傷模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型39 CCl4在肝內(nèi)經(jīng)NADPH和肝微粒體細(xì)胞色素P4常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物CC l4致急性肝損傷所需劑量和用法動(dòng)物 (CCl4)劑量 用法 形成肝損傷 (ml/kg體重) 所需時(shí)間 0.5% 10 頸背部皮下注射1次 約24h小鼠 0.1% 10 腹腔

18、注射1次 約24h 0.2% 10 于1、4、7日各灌胃1次 末次后1224h 25% 5 皮下注射1次 18d 大鼠 25% 5 皮下注射2次,間隔4日 18d 15% 1 每隔3日灌胃1次，共3次 末次后16h 家兔 50% 0.5 皮下注射1次，共3次 47d 33% 1.5 隔日灌胃1次，共2次 7d CCl4急性肝損傷模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型40常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物CC l4致急性肝損傷所需劑量和用法動(dòng)物 1. 根據(jù)所用CCl4劑量和時(shí)間的不同，肝臟的損傷程度不同；2. 一般在給予CCl4后1624 h血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）活性升高，并能反映肝損傷的程

19、度；3. 形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為肝小葉中央?yún)^(qū)壞死和脂肪變性。結(jié) 果CCl4急性肝損傷模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型1. 根據(jù)所用CCl4劑量和時(shí)間的不同，肝臟的損傷程度不同1. 根據(jù)所用CCl4劑量和時(shí)間的不同，肝臟的損傷程度不同；2. 一般在給予CCl4后1624 h血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）活性升高，并能反映肝損傷的程度；3. 形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為肝小葉中央?yún)^(qū)壞死和脂肪變性。結(jié) 果CCl4急性肝損傷模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型1. 根據(jù)所用CCl4劑量和時(shí)間的不同，肝臟的損傷程度不同消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型43消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型43消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型CCl4

20、急性肝損傷模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型CCl4急性肝損傷模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型1CCl4肝損傷模型是最常用的急性肝損傷模型，造模方法簡(jiǎn)單，成功率高，重復(fù)性好，價(jià)格低廉。2CCl4劑量不宜過(guò)大，以免造成動(dòng)物中毒死亡。3CCl4是無(wú)色澄清的有毒液體，難溶于水，一般用花生油、橄欖油、豆油等植物油混合成所需濃度。模型評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng)CCl4急性肝損傷模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型1CCl4肝損傷模型是最常用的急性肝損傷模型，造模方法簡(jiǎn)單四氯化碳的配制 CCl4常配成乳劑使用，如需配成10%乳劑，可取5ml植物油和5g阿拉伯膠，放在乳缽中研勻，再加純CCl410ml研勻，然后加蒸餾水1015ml調(diào)成乳狀，最后加蒸

21、餾水使體積至100ml，用前搖勻。消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型四氯化碳的配制消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型4用CCl4復(fù)制肝損傷模型的主要缺點(diǎn)是，不同動(dòng)物個(gè)體肝損傷的程度差異較大。小鼠接受CCl4后肝臟病理學(xué)改變與血清ALT等生化指標(biāo)改變的相關(guān)性不如大鼠好。5CCl4可從呼吸道、皮膚吸收，對(duì)人體有毒性，注意防護(hù)。模型評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng)CCl4急性肝損傷模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型4用CCl4復(fù)制肝損傷模型的主要缺點(diǎn)是，不同動(dòng)物個(gè)體肝損傷病毒性肝炎模型（HBV）全球因乙肝死亡100萬(wàn)/年，居第7位。我國(guó)30萬(wàn)消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型病毒性肝炎模型（HBV）全球因乙肝死亡100萬(wàn)/年，居第7位消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)

22、物模型乙肝病毒（HBV）的特性（1）HBV具有頑強(qiáng)的抵抗力：對(duì)熱、對(duì)低溫、對(duì)干燥、對(duì)紫外線及一般濃度的化學(xué)消毒劑，都能耐受；在零下20度時(shí)可存活20年；在37度時(shí)可存活7天。（2）HBV的嗜肝性：PreS1和S2特異識(shí)別肝細(xì)胞表面受體（3）嚴(yán)格的種屬特性：到目前為止，只有人、黑猩猩、長(zhǎng)臂猿、狒狒對(duì)HBV易于感染消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型乙肝病毒（HBV）的特性（1）HBV具有頑強(qiáng)的抵抗力：對(duì)熱structural maintenance of chromosomes， Smc5/6Decorsire A et al. Nature. 2016 Mar 17;531(7594):386-9. Hepa

23、titis B virus encodes the regulatory HBx protein whose primary role is to promote transcription of the viral genome, which persists as an extrachromosomal DNA circle in infected cells.消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型structural maintenance of chro目前唯一的HBV自然感染動(dòng)物模型HLA-I分子和HBV的CTL多肽表位與人類有重疊，可用于研究HBV感染的CTL應(yīng)答價(jià)格昂貴，存在倫理學(xué)限制大猩猩（Go

24、rilla）消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型目前唯一的HBV自然感染動(dòng)物模型大猩猩（Gorilla）消化樹(shù)鼩（Treeshrew/Tupaia belangeri）與松鼠大小相近，與靈長(zhǎng)類動(dòng)物親緣關(guān)系較近可被HBV感染，但感染率極低。將HBsAg和HBeAg陽(yáng)性患者血清0.5ml經(jīng)股靜脈接種。幼年和圍生期樹(shù)鼩感染率較高成本低、操作方便、倫理限制弱2012年樹(shù)鼩肝細(xì)胞發(fā)現(xiàn)有HBV和丁肝病毒的共受體：鈉離子-?；悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)多肽（sodium taurocholate cotransporting peptide， NTCP）Yan H,. J Virol. 2013 Jul;87(14):7977-91.消化

25、系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型樹(shù)鼩（Treeshrew/Tupaia belangeri）鴨（Duck）采用肌肉注射、靜脈注射、腹腔甚至肝內(nèi)注射、鴨胚靜脈注射等方式將DHBV注射到鴨體內(nèi)，感染率比較高。可用來(lái)研究HBV表面受體、病毒復(fù)制和基因突變；研究病毒持續(xù)存在和清除機(jī)制，藥物篩選等成本低、操作方便、倫理限制弱，與人的親源關(guān)系遠(yuǎn)，研究成果的實(shí)際轉(zhuǎn)化受限Zhang YY, Front Med. 2014 Jun;8(2):129-34. Mason WS. Cold Spring Harb Perspect Med. 2015 Apr 1;5(4).消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型鴨（Duck）采用肌肉注射、靜脈注射、

26、腹腔甚至肝內(nèi)注射、鴨胚旱獺（Woodchuck）消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型旱獺（Woodchuck）消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型小鼠（mouse）采用高壓水動(dòng)力法向小鼠尾靜脈注射HBV質(zhì)粒DNA，適合研究HBV變異株的生物學(xué)特性研究針對(duì)HBV的免疫應(yīng)答，免疫調(diào)節(jié)、天然免疫等；建立可持續(xù)感染模型+Iannacone M, Cold Spring Harb Perspect Med. 2015 Aug 20;5(11).消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型小鼠（mouse）采用高壓水動(dòng)力法向小鼠尾靜脈注射HBV質(zhì)粒第 四 節(jié) 脂肪肝和肝硬化動(dòng)物模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型第 四 節(jié) 脂肪肝和肝硬化動(dòng)物模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模脂肪肝模

27、型NAFLD（nonalcoholic fatty liver disease）特殊品系動(dòng)物1、ADK（/）小鼠： 2002年美國(guó)蘇黎士大學(xué)Boison所發(fā)現(xiàn)建立。胚胎期發(fā)育正常，于出生后4天即發(fā)生肝細(xì)胞小泡性脂肪變性，并于14天內(nèi)死于脂肪肝。2、FLS小鼠模型 ：1999年日本Soga等利用近親繁殖的方法建立。自發(fā)形成脂肪肝，不伴有肥胖和糖尿病。3、 JVS小鼠模型：1996年Kuwajima M等發(fā)現(xiàn)幼年內(nèi)臟脂肪變小鼠（juvenile visceral steatosis mouse，JVS小鼠）存在原發(fā)性肉毒堿缺乏，使脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)入線粒體的過(guò)程受阻，脂肪酸在肝細(xì)胞漿內(nèi)積聚。4、ArKO小

28、鼠： Australia亨利醫(yī)學(xué)研究院Robert 等建立。芳香酶Cyp9（摧化C19類固醇轉(zhuǎn)化為C18雌激素）基因敲除小鼠不能合成內(nèi)源性雌激素，無(wú)論雌性或雄性鼠，腹腔內(nèi)脂肪細(xì)胞的體積和數(shù)量增加。ArKO小鼠肝臟具有特征性的大量脂肪滴積累。消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型脂肪肝模型NAFLD（nonalcoholic fatty 5、BHE大鼠： Berdanier CD1991年發(fā)現(xiàn)的一種生后300天自發(fā)形成糖耐量異常，導(dǎo)致高脂血癥、脂肪肝，但無(wú)肥胖的特殊種系。6、PBB/Ld小鼠 ：Hunt CE1976年發(fā)現(xiàn)，隨成熟期的成長(zhǎng)自發(fā)形成特征性的脂肪組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)增加、血清免疫反應(yīng)性胰島素增加、糖耐量減低、

29、脂肪肝和高脂血癥。為研究成年起始肥胖的一個(gè)代表小鼠品系。7、 Zucker大鼠（fa/fa rat）和ob/ob小鼠（ob/ob mice ）： 遺傳性食欲抑制激素leptin的基因缺乏鼠，可發(fā)生高胰島素血癥、胰島素抵抗而自發(fā)形成糖尿病、肥胖和脂肪肝。消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型5、BHE大鼠： Berdanier CD1991年發(fā)現(xiàn)的一肝纖維化 肝纖維化是指各種致肝臟損傷因素長(zhǎng)期反復(fù)作用于肝臟，引起肝細(xì)胞變性、壞死和炎癥，在修復(fù)過(guò)程中導(dǎo)致ECM異常增多和過(guò)度沉積的病理過(guò)程。 肝纖維化的形成，主要是由于肝星狀細(xì)胞激活，ECM成分生成過(guò)多，降解相對(duì)不足，膠原等ECM在肝內(nèi)大量沉積所致。消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模

30、型肝纖維化 肝纖維化是指各種致肝臟損傷因素長(zhǎng)期病因與分類病毒性肝纖維化血吸蟲(chóng)性肝纖維化酒精性肝纖維化膽汁性肝纖維化代謝性肝纖維化中毒性肝纖維化營(yíng)養(yǎng)不良性肝纖維化心源性肝纖維化四氯化碳誘發(fā)消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型病因與分類病毒性肝纖維化四氯化碳誘發(fā)消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型肝纖維化與肝硬化的區(qū)別？消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型肝纖維化與肝硬化的區(qū)別？消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型肝纖維化與肝硬化的區(qū)別？ 肝細(xì)胞彌漫性變性、壞死 肝內(nèi)纖維組織增生 肝細(xì)胞結(jié)節(jié)狀再生這三種病變反復(fù)交錯(cuò)進(jìn)行肝內(nèi)血循環(huán)改建假小葉形成肝硬化消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型肝纖維化與肝硬化的區(qū)別？ 肝細(xì)胞彌漫性 肝內(nèi)纖維組織增生 肝四氯化碳肝纖維化肝硬化模型 如果長(zhǎng)

31、期反復(fù)多次給予CCl4 ，可導(dǎo)致肝內(nèi)纖維增生，逐漸形成肝硬化。 造模機(jī)制消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型四氯化碳肝纖維化肝硬化模型 如果長(zhǎng)期1皮下注射40%50% CCl4植物油溶液，首次5 ml/kg體重，以后2 ml/kg體重，每周2次，共10周。動(dòng)物自由飲水進(jìn)食。2制備肝臟組織石蠟切片，HE和膠原纖維染色，進(jìn)行病理學(xué)檢查。操作方法CCl4肝纖維化肝硬化模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型1皮下注射40%50% CCl4植物油溶液，首次5 ml 該模型較為可靠，復(fù)制時(shí)間較短，肝纖維化進(jìn)展穩(wěn)定，適合于肝纖維化發(fā)生、發(fā)展過(guò)程的動(dòng)態(tài)觀察和研究，是目前國(guó)內(nèi)外常采用的動(dòng)物模型。 模型評(píng)價(jià)CCl4肝纖維化肝硬化模型消化系統(tǒng)疾

32、病動(dòng)物模型 該模型較為可靠，復(fù)制時(shí)間較短，肝纖維第2周：肝小葉中央?yún)^(qū)出現(xiàn)片狀肝細(xì)胞變性壞死，未見(jiàn)明顯纖維組織增生。第4周：除肝細(xì)胞變性壞死外，肝內(nèi)開(kāi)始形成較薄的纖維間隔。第6周：肝臟纖維間隔進(jìn)一步增厚，有假小葉形成。第8周：肝組織正常結(jié)構(gòu)破壞，形成厚的纖維間隔，并分割形成假小葉。實(shí)驗(yàn)中大鼠成活率在60%左右。結(jié) 果CCl4肝纖維化肝硬化模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型結(jié) 果CCl4肝纖維化肝硬化模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型參與肝纖維化的細(xì)胞?肝星狀細(xì)胞庫(kù)普弗細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞Pit細(xì)胞肝細(xì)胞消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型參與肝纖維化的細(xì)胞?肝星狀細(xì)胞消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型形態(tài)學(xué)觀察：可使用各種膠原纖維染色，并可做圖象分析；

33、血清膠原代謝指標(biāo)檢測(cè) 如PIIIP、HA、FN等。檢測(cè)指標(biāo)CCl4復(fù)合因素模型肝組織中相關(guān)基因表達(dá)，如膠原等消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型形態(tài)學(xué)觀察：可使用各種膠原纖維染血清膠原代謝指標(biāo)檢測(cè) 壞死后性肝硬化消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型壞死后性肝硬化消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型A：正常肝小葉 (Mallory染色)；B，C：肝硬化(Masson trichrome)消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型A：正常肝小葉消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型第 五 節(jié) 胰腺炎動(dòng)物模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型第 五 節(jié) 胰腺炎動(dòng)物模型消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型 引起胰腺自身消化 其他酶反應(yīng)引起胰蛋白酶被激活的原因：（1）膽汁反流；（2）胰液分泌亢進(jìn)；（3）病毒感染、外傷、

34、藥物等造成腺泡的損傷。膽汁和腸液中的腸激酶激活發(fā)病機(jī)制胰蛋白酶原胰蛋白酶消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型膽汁和腸液激活發(fā)病機(jī)制胰蛋白酶消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型急性胰腺炎模型 急性胰腺炎的主要表現(xiàn)為胰腺呈炎癥水腫、出血和壞死。 臨床表現(xiàn)為突然發(fā)作的上腹部劇烈疼痛并可出現(xiàn)休克。急性胰腺炎消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型急性胰腺炎模型 急性胰腺炎的主要表現(xiàn)為胰腺呈炎癥水急性胰腺炎模型?；悄懰徕c膽胰管逆行注射法 急性胰腺炎消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型急性胰腺炎模型牛磺膽酸鈉膽胰管逆行注射法 急性胰腺炎消化系統(tǒng)早期?；悄懰徕c可直接導(dǎo)致胰腺腺泡細(xì)胞或小導(dǎo)管壁的細(xì)胞溶解，進(jìn)一步的損害可能是膽鹽激活胰酶，如胰蛋白酶、磷脂酶等，產(chǎn)生腺泡自身消化。

35、采用胰管逆行注射法誘發(fā)動(dòng)物急性胰腺炎，是根據(jù)胰管、膽管共同通路和膽汁反流理論，模擬人類膽源性胰腺炎的發(fā)病機(jī)制造模機(jī)制急性胰腺炎消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型造模機(jī)制急性胰腺炎消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型正常情況下主胰管的壓力高于總膽管，膽汁不會(huì)進(jìn)入胰管。但當(dāng)膽總管阻塞時(shí)，膽道內(nèi)的膽汁可被壓入主胰管，引起急性胰腺炎。大鼠的膽管和胰管為共同開(kāi)口的管道，解剖上稱為膽胰管，從膽胰管上分出68支胰管的分支進(jìn)入胰腺實(shí)質(zhì)。生理解剖特點(diǎn)急性胰腺炎消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型正常情況下主胰管的壓力高于總膽管，膽汁不會(huì)進(jìn)入胰管。但當(dāng)膽總大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12h，3%戊巴比妥鈉（40mg/kg）腹腔注射麻醉。上腹正中切口進(jìn)入腹腔，提起胃和

36、十二指腸，顯露出胰腺，辨認(rèn)膽胰管走向，于肝門處用微型無(wú)損傷動(dòng)脈夾夾閉膽總管，以防藥液逆流進(jìn)入肝臟。用4號(hào)鈍針頭朝胰腺方向穿刺十二指腸前壁，在其漿膜下潛行通過(guò)十二指腸乳頭穿入膽胰管，用手指固定針頭，緩慢（約2min）注入3.5%或5%?；悄懰徕c溶液1ml/kg體重。300350gWistar或SD大鼠操作方法3.5%或5%牛磺膽酸鈉急性胰腺炎消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12h，3%戊巴比妥鈉（40mg/kg）4.另一種穿刺方法是，用4號(hào)針頭緊貼膽胰管匯入十二指腸處，自腸外穿刺膽胰管。5.注射完畢拔除針頭后繼續(xù)按住穿刺處約1min。檢查無(wú)漏膽，逐層關(guān)腹。6.假手術(shù)組僅翻動(dòng)胰腺和十二指腸

37、后關(guān)腹。7.術(shù)后15h處死動(dòng)物，解剖時(shí)肉眼觀察胰腺大體變化。取胰腺等組織，10%中性緩沖甲醛液固定，常規(guī)制備石蠟切片，在光鏡下觀察胰腺等臟器的改變。取血測(cè)定血清淀粉酶水平。操作方法急性胰腺炎消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型4.另一種穿刺方法是，用4號(hào)針頭緊貼膽胰管匯入十二指腸處，自術(shù)后15 h血清淀粉酶水平明顯升高。肉眼觀察，胰腺充血腫脹，包膜緊張，出現(xiàn)不同程度出血壞死，腹腔內(nèi)可見(jiàn)血性腹水，胰腺周圍大網(wǎng)膜和腸系膜出現(xiàn)淡黃色的皂化斑。胃腸道明顯水腫，腎臟明顯增大，顏色晦暗。光鏡檢查，于術(shù)后15 h可見(jiàn)胰腺組織大片出血、凝固性壞死及脂肪壞死，壞死區(qū)之間有大量中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)，表現(xiàn)為急性出血壞死性胰腺炎。結(jié) 果急性胰腺炎消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型術(shù)后15 h血清淀粉酶水平明顯升高。結(jié) 果急性胰腺炎本模型在病因、發(fā)病機(jī)制及胰腺病變等方面與人類急性胰腺炎相似，是目前被公認(rèn)的、比較常用的復(fù)制急性胰腺炎的方法。通過(guò)改變注射速度、注射持續(xù)時(shí)間、所用?；悄懰徕c的濃度或劑量可控制胰腺病變的程度，操作簡(jiǎn)單，造模成功率較高，重復(fù)性較好，適合于評(píng)價(jià)藥物對(duì)急性胰腺炎的防治效果。胰腺病變程度及動(dòng)物死亡率與所用?；悄懰徕c的濃度呈正相關(guān)，隨著所用?；悄懰徕c濃度的提高，胰腺損害逐漸加重。除胰管逆行注射?；悄懰徕c外，還可注射自體膽汁、膽汁酸、胰酶等誘發(fā)急性胰腺炎。模型評(píng)價(jià)急性胰腺炎消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型本模型在病因、發(fā)