一、血片制作血膜的制作用于檢查瘧原蟲的血涂片有兩種：一種是將血液涂呈薄膜狀，稱薄血膜；一種是血液涂成圓盤，稱厚血膜。薄血膜上的血細胞要求平輔在玻片上面。發(fā)熱病人血片標本片1血膜的制制作（取取血時間間）取血時機機現(xiàn)現(xiàn)癥病人人一般可可隨時取取血，瘧瘧疾普查查時可不不考慮取取血時機機。但在在診斷或或需要某某期瘧原原蟲作標標本時，，則應掌掌握適宜宜的取血血時機。。間日瘧在在寒熱發(fā)發(fā)作時，，外周血血液中主主要可見見環(huán)狀體體期；發(fā)發(fā)作后數(shù)數(shù)小時，，環(huán)狀體體發(fā)育到到滋養(yǎng)體體期，瘧瘧色素形形成，形形態(tài)較易易辯認，，為診斷斷的有利利時機；；36~48小時，可可檢出裂裂殖體；；發(fā)作一一、二次次后，配配子體出出現(xiàn)較多多。惡性瘧較較理想的的取血時時間是在在發(fā)作后后至20小時內取取血，初初發(fā)患者者退熱后后常查不不到原蟲蟲。2血膜的制制作（取取血操作作）取血方法法采采血部位位一般人人為耳垂垂，指頭頭，通常常在耳垂垂取血（（現(xiàn)場取取血用采采血針采采血，一一人一針針，避免免血傳疾疾?。┫扔?5%酒精棉球球消毒取取血部位位（冬季季用手捻捻動耳垂垂使其充充血后再再行消毒毒），待待酒精干干后，用用左手拇拇指和食食指緊捏捏耳垂上上方，右右手持消消毒針迅迅速刺入入耳垂下下端1~2毫米，不不宜過深深或過淺淺。然后后用右手手中指輕輕輕向上上擠壓出出血。3取血量及及涂片法法（涂片片操作））薄血膜取潔凈的的載玻片片2張，1張平置在在桌上，，以左手手拇指，，食指夾夾持載玻玻片兩端端（手指指切勿接接觸玻片片表面）），用另另一張邊邊緣平滑滑（最好好為磨口口邊緣））的載玻玻片做推推片，用用推片一一端邊緣緣的中點點從取血血部分取取約1微升的血血量（相相當于1/4火柴頭大大小），，使血滴滴與平置置的載玻玻片接觸觸，并形形成25~30度夾角，，待血液液向兩側側擴展約約2厘米長度度時，均均勻而迅迅速地輕輕輕向左左推出（（約2.5厘米長））。4（涂片操操作）厚血膜用推片的的一角，，從取血血部位刮刮取約4微升血量量（相當當于火柴柴頭大小?。?，使使血滴與與平置的的載玻片片接觸，，再由里里向外或或由外向向里一個個方向旋旋轉，轉轉2~4圈，涂成成直徑0.8~~1厘米大小小圓形厚厚血膜，，血膜厚厚薄均勻勻，過厚厚易于脫脫落，過過薄達不不到檢出出率的要要求。5血膜的制制作（涂片操操作）涂制厚、、薄血膜膜的位置置通常是將將厚、薄薄血膜涂涂在一張張載片上上。方法法是將載載片分為為6等分分，第1、2格格備貼標標簽及編編號用；；厚血膜膜涂在第第3格中中央，薄薄血膜涂涂在第4格前緣緣至第6格中部部。作為標本本的血片片每張玻玻片涂厚厚、薄血血膜各1個；門診和發(fā)發(fā)熱病人人血片涂2個厚厚血膜1個薄血血膜，以防血膜脫脫落而影影響檢查查；瘧疾調查查時，每每張玻片片可涂制2~3人人血膜。。6血膜的制制作血膜編號號血膜制成成后，立立即用特特種蠟筆筆或水筆筆于玻片片面上寫寫上受檢檢者的號號碼，以以防差錯錯，待薄薄血膜干干后再用用鉛筆于于薄血膜膜中寫上上血片種種類的代代號和受受檢者的的個人編編號，依依次順序序插入標標本盒內內。7制作血膜的注意事事項1.玻玻片清洗洗時，避避免玻片片碰撞、、磨損。。制作血血膜的載載玻片必必須完全全清潔而而毫無油油漬或污污垢。制制片時，，手指只只能持載載片的邊邊緣，不不能接觸觸玻片表表面，以以免油污污使薄血血膜產生生空白區(qū)區(qū)以及厚厚血膜脫脫落。作作為推片片的玻片片邊緣一一定要平平滑，才才能使推推出的血血膜均勻勻一致。。8制作血膜的注意事事項2.剛涂涂制的血血膜要平平放在標標本盒內內，厚血血膜未干干前勿使使標本盒盒傾斜，，以免血血膜傾向向一側，，造成血血膜厚薄薄不均，，厚處不不一溶血血和著色色而影響響檢查結結果；晾晾干血膜膜時應注注意防塵塵、防止止蒼蠅、、蟑螂等等昆蟲吮吮吸血膜膜，干后后應及時時裝入標標本盒并并蓋嚴，，新的木木制標本本盒需敞敞開放置置一段時時間，讓讓木醇揮揮發(fā)后才才能使用用，以免免厚血膜膜紅蛋白白被其固固定，不不能溶血血或染色色效果不不佳。9制作血膜的注意事事項3.血膜膜讓其自自然干燥燥，切忌忌用太陽陽曬或火火烤，干干透后才才能用甲甲醇固定定薄血膜膜。夏天天標本盡盡可能24~48小時內固固定染色色；冬天天也不能能超過72小時。放放置時間間越久，，厚血膜膜越不易易溶血，，染色效效果也差差。若不不能及時時染色，，膜血膜膜宜先用用甲醇固固定（1~3分鐘）然然后用過過濾清水水對厚血血膜溶血血，晾干干固定后后裝入盒盒內蓋嚴嚴，待以以后染色色。10二、血片片的染色色（一）染染液的種種類及染染色原理理染液種類類：目前所用用的血片片染色液液，雖然然名稱很很多，但但都是從從羅門諾諾夫斯基基氏創(chuàng)造造的染液液變化過過來的。。總的可可分為水水溶液和和酒精溶溶液兩大大類，前前者包括括羅氏、、西氏（（Simon)、J.S..B氏染液等等，后者者包括利利氏(Leishman)、瑞氏和吉吉氏染液液等。這這些染液液中的主主要染劑劑都包含含美蘭、、伊紅和和由美蘭蘭氧化所所成的天天青，所所以稱多多色性染染劑。11血片的染染色（一）染染液的種種類及染染色原理理染色原理理：伊紅是酸性水溶性鈉鈉鹽，美美蘭是堿性水溶性鹽鹽酸鹽，，當它們們各自溶溶化水中中時，就就離解為為帶陽電電和陰電電的離子子。伊紅紅主要離離解為酸酸性的陽陽離子，，在遇到到堿性的的蛋白質質如血紅紅蛋白、、嗜伊紅紅白血球球顆粒等等即可結結合成不不易溶于于水的沈沈淀物染染成紅色色。美蘭蘭主要離離解為堿堿性的美美蘭離子子，美蘭蘭就與瘧瘧原蟲、、淋巴和和大單核核細胞的的胞漿、、嗜堿性性白細胞胞的顆粒粒等酸性性蛋白質質結合染染成蘭色色。#12血片的染染色（一）染染液的種種類及染染色原理理染色原理理：美蘭與與伊紅都都不能使使原蟲和和白細胞胞的核著著色，必必須由天天青作為為媒介（（染媒））才能使使其著色色。天青青雖然也也是堿性性染劑，，但又具具有染媒媒作用，，使原蟲蟲核和白白細胞核核等原來來只能染染上極淡淡蘭色的的結構染染上顯著著的酸性性染劑伊伊紅，這這樣，就就使白細細胞粗大大的核染染成顯著著的既蘭蘭又紅的的紫蘭色色，而較較小或菲菲薄的原原蟲核和和淋巴細細胞原漿漿中的顆顆粒染成成紫紅色色。13血片的染染色（一）染染液的種種類及染染色原理理注意：蛋白質質是二性電解質，，當其處處于較等電點為酸的溶溶液中時時，便呈呈鹼的作作用，即即與酸結結合*，這就說說明為何何在染液液偏酸時時，伊紅紅的著色色力強，，使紅細細胞著色色鮮艷而而淋巴細細胞和原原蟲的胞胞漿著色色不著；；反之，，蛋白質質在偏鹼鹼的溶液液中呈酸酸的作用用而中和和鹼基，，也就說說明為何何染液偏偏鹼時，，紅細胞胞和嗜伊伊紅白細細胞的顆顆粒等被被染成紫紫蘭色。。伊紅在水水溶液內內遇到美美蘭或天天青，時時間一長長即可互互相化合合而產生生沈淀從從而失去去染色力力，因此此，吉氏母液液絕對不不能進水水。14血片的染染色（二）吉吉氏染液液母液配配置方法法取吉氏粉粉0.5克置于研研缽中，，加少量量甘油充充分研磨磨，再加加再磨，，至25毫升加完完為止，，倒入60或100毫升帶有有玻塞的的有色玻玻瓶中。。在研缽缽中加少少量甲醇醇，洗去去甘油濃濃液混入入瓶內，，至25毫升甲醇醇洗凈缽缽中甘油油染液為為止，塞塞緊瓶塞塞，充分分搖勻，，置于55~60℃水浴中或或溫箱內內24小時或室室溫內3~5天，多加加搖動，，即成原原液。吉吉氏染液液是目前前較優(yōu)良良的血膜膜染劑，，即使在在炎熱天天氣中，，亦可經經久不變變。材料：1、吉氏氏粉0..5克2、甘油油25毫毫升3、甲醇醇25毫毫升15血片的染染色（三）吉吉氏染液液血片染染色方法法先用甲醇醇或無水水酒精固固定薄血血膜，待待干后進進行染色色。亦可可在固定定薄血膜膜后用清清水對厚厚血膜溶溶脫血紅紅蛋白，，然后才才進行染染色。成批血片片染色：將已固固定薄血血膜的血血片插入入染色缸缸，倒入入2%吉氏染液液稀釋液液（2毫升原液液加中性性蒸餾水水98毫升稀釋釋均勻即即成），，同時對對厚薄血血膜染色色30分鐘（如如染液不不合標準準時，得得酌情增增減染色色時間）），然后后用清水水輕輕將將染液沖沖去，再再用清水水輕輕沖沖洗一次次，干凈凈后將血血片標本本（血膜膜面朝下下）插于于晾干板板上，待待干鏡檢檢。16血片的染染色（三）吉吉氏染液液血片染染色方法法先用甲醇醇或無水水酒精固固定薄血血膜，待待干后進進行染色色。亦可可在固定定薄血膜膜后用清清水對厚厚血膜溶溶脫血紅紅蛋白，，然后才才進行染染色。單張血片片染色：薄血膜膜經固定定干燥后后，用2%吉氏染液液稀釋液液1~2毫升，滴滴入血片片標本上上染色30分鐘左右右，或用用中性蒸蒸餾水1毫升，加加吉氏母母液1~2滴，混合合均勻后后滴入血血片標本本上，染染色10~20分鐘，然然后用清清水輕輕輕將片上上的染液液沖洗干干凈，晾晾干鏡檢檢。17影響染色色效果的的因素血片染色色好壞除除了與玻玻片是否否清潔，，血片制制作質量量好壞等等有關外外，還受受到以下下幾個因因素的影影響：（1）染料溶溶劑的質質量染染料、、甲醇和和甘油如如果不純純，常使使配制的的染液偏偏酸或偏偏堿而影影響染色色效果。。因此必必須用分分析純的的甲醇和和中性甘甘油，而而且在配配制時所所用的器器具必須須干凈而而無水份份。18影響染色色效果的的因素（2）染液的的新舊新新配配制的染染液因色色素尚未未充分溶溶解，染染色力較較弱且常常呈現(xiàn)偏偏堿性。。染液存存放時間間越久，，染色力力越強。。通常在在染液配配制1~2周后才使使用，盛盛裝染液液的瓶子子應加塞塞蓋密。。以防吸吸潮而影影響染液液質量。。19影響染色色效果的的因素（3）染液稀稀釋后使使用時間間吉吉氏和瑞瑞氏染液液的主要要成份是是美藍、、伊紅和和由美藍藍氧化產產生的天天青，三三者能在在酒精溶溶液中溶溶解，但但在水溶溶液中伊伊紅遇到到美藍和和天青即即產生沉沉淀。因因此，必必須在稀稀釋染液液當時使使用，一般在半半小時內內染色力最最強。20影響染色色效果的的因素（4）染液的的稀釋濃濃度染染液的的濃度高高其著色色就快而而深，從從而瘧原原蟲寄生生紅細胞胞的薛氏氏點粗大大顯著，，但顏色色常偏堿堿；染液液濃度過過低則染染色時間間久，顏顏色偏酸酸，薛氏氏點不明明顯或消消失。21影響染色色效果的的因素（5）染色時時間染染色時時間長染染色效果果好，反反之較差差。室溫溫高則著著色快，，染色時時間可略略縮短，，氣溫低低可適當當延長。。因此染染色時間間應根據(jù)據(jù)染液的的質量、、新舊、、稀釋濃濃度和氣氣溫而適適當增減減。22影響染色色效果的的因素（6）染色用用水染染液的的稀釋用用水和染染色后沖沖洗用水水應選擇擇Ph7..0~7.2清潔水，，通常使使用的新新鮮的蒸蒸餾水或或過濾的的冷開水水，以及及自來水水、井水水、河水水、泉水水和雨水水等。如如果偏酸酸或偏堿堿，可用用緩沖蒸蒸餾水調調整。染染色后發(fā)發(fā)現(xiàn)血膜膜顏色偏偏藍（偏偏堿）或或偏紅（（偏酸））時，可可用與之之相反的的酸、堿堿度水沖沖洗血片片予以糾糾正。23影響染色色效果的的因素（7）染色后后不要直直接將染染液倒掉掉，應沿沿玻片或或染色缸缸邊緣加加水使染染液表面面一層溢溢出，并并輕輕沖沖洗，以以免染液液色素顆顆粒沾污污血膜。。24三、發(fā)熱熱病人血血檢的質質量控制制19世紀紀后期，，顯微鏡鏡的出現(xiàn)現(xiàn)使人們們不斷發(fā)發(fā)現(xiàn)了傳傳染病的的病因，，1880年法法國軍醫(yī)醫(yī)拉韋朗朗（Laveran）第一次見見到并描描述了人人紅細胞胞內的瘧瘧原蟲，，至此才才解開了了困擾人人們數(shù)千千年的瘧瘧疾的病病因之謎謎。25三、發(fā)熱熱病人血血檢的質質量控制制此后，隨隨著顯微微鏡的不不斷改進進和血膜膜上瘧原原蟲染色色方法的的出現(xiàn)，，使顯微微鏡檢查查瘧原蟲蟲的方法法成為瘧瘧疾病原原學診斷斷的重要要手段。。盡管這這種方法法存在著著操作復復雜、技技術難于于掌握等等缺點，，但以其其高特異異性一直直被作為為確診病病例主要要依據(jù)。。時止今今日，由由于技術術的、經經濟的等等原因，，鏡檢瘧瘧原蟲仍仍是我國國瘧疾病病例確診診的金標標。26三、發(fā)熱熱病人血血檢的質質量控制制在瘧疾診診斷標準準中把瘧瘧疾病例例分為疑疑似病例例、臨床床病例、、確診病病例和帶帶蟲者，，前兩者者依據(jù)流流行病學學史和臨臨床表現(xiàn)現(xiàn)即可做做出診斷斷，而后后兩者需需通過發(fā)發(fā)現(xiàn)病原原方能做做出診斷斷。另外外，除帶帶蟲者外外，病例例的最基基本臨床床表現(xiàn)為為發(fā)熱。。1、目目的與意意義27三、發(fā)熱熱病人血血檢的質質量控制制因此血檢檢的目的的在于通通過對發(fā)發(fā)熱病人人血檢達達到確診診瘧疾病病例。它的意義義在于及及時發(fā)現(xiàn)現(xiàn)傳染源源和明確確感染的的瘧原蟲蟲種類，，以能針針對蟲種種選擇正正確的治治療方案案。1、目目的與意意義28三、發(fā)熱熱病人血血檢的質質量控制制在瘧疾嚴嚴重流行行時期，，衛(wèi)生部部有關文文件中提提出，瘧瘧區(qū)的各各級醫(yī)療療衛(wèi)生單單位，都都要把發(fā)發(fā)熱病人人血檢瘧瘧原蟲列列為常規(guī)規(guī)。2、血血檢對象象29三、發(fā)熱熱病人血血檢的質質量控制制2、血血檢對象象但根據(jù)20世紀紀80年年代各地地的觀察察結果表表表明，，全部血血檢陽性性的病例例中，有有47..8%（（江蘇））、73.5%%（山東東）、77.7%（南南方7省?。?4.1%（河河南）是是在臨床床初診為為瘧疾、、疑似瘧瘧疾的發(fā)發(fā)熱病中中查出的的，而其其它15%~42%的的病例，，是在臨臨床初診診為發(fā)熱熱原因不不明和感感冒及其其它發(fā)熱熱病人中中查出的的。30三、發(fā)熱熱病人血血檢的質質量控制制2、血血檢對象象因此，為為盡可能能多地發(fā)發(fā)現(xiàn)病人人，各地地把臨床床初診為為瘧疾、、疑似瘧瘧疾、發(fā)發(fā)熱原因因不明和和感冒及及其它發(fā)發(fā)熱的““四熱””病人列列為血檢檢對象。31三、發(fā)熱熱病人血血檢的質質量控制制2、血血檢對象象但是，隨隨著瘧疾疾流行程程度的降降低，““四熱””病人中中查出的的瘧疾病病例所占占的比例例也發(fā)生生了變化化。上世世紀90年代初初，在全全國10省、、區(qū)發(fā)病病率穩(wěn)定定在1//萬以下下地區(qū)開開展研究究，發(fā)現(xiàn)現(xiàn)92.33%的的病例發(fā)發(fā)生在臨臨床診斷斷為瘧疾疾、疑似似瘧疾（（包括來來自高瘧瘧區(qū)流動動人口））中（見見表）。。32三、發(fā)熱熱病人血血檢的質質量控制制2、血血檢對象象臨床初診血檢人數(shù)陽性人數(shù)陽性率%占總陽性人數(shù)%瘧疾1093167064.4964.24疑似瘧疾247332932.3528.09發(fā)熱原因不明10602760.027.29其它9608440.0040.38表各各類發(fā)熱熱病人血血檢原蟲蟲陽性率率33三、發(fā)熱熱病人血血檢的質質量控制制2、血血檢對象象表中顯示示，在診診斷為發(fā)發(fā)熱原因因不明的的病人中中，原蟲蟲陽性率率僅為0.02%，也也就是說說檢出1例病人人要鏡檢檢5000張以以上血片片；而在在“其它它”發(fā)熱熱病人中中檢查2.4萬萬病人方方檢出1例病人人。34三、發(fā)熱熱病人血血檢的質質量控制制2、血血檢對象象因此提出出發(fā)病率率在1//萬地區(qū)區(qū)，由于于92%%以上的的病例在在診斷為為瘧疾、、疑似瘧瘧疾（包包括來自自高瘧區(qū)區(qū)流動人人口）““二熱””病人中中發(fā)現(xiàn)，，因此以以“二熱熱”病人人為血檢檢對象即即可。至至于在發(fā)發(fā)熱原因因不明中中查出的的7%病病例，可可在其出出現(xiàn)疑似似瘧疾的的癥狀時時再做血血檢，這這就極大大的減少少了工作作量。35三、發(fā)熱熱病人血血檢的質質量控制制2、血血檢對象象提供以上上資料，，僅供在在確定血血象時參參考，各各地可根根據(jù)當?shù)氐氐寞懠布擦餍谐坛潭?、血血檢的具具體目的的來確定定血檢對對象。36三、發(fā)