毛畢吸蟲成蟲別離方法的研究初報(bào)

摘要目的為進(jìn)步毛畢吸蟲成蟲的搜集率。方法對(duì)家鴨行離體或在體肝靜脈逆行灌注搜集肝內(nèi)和門靜脈內(nèi)成蟲；同時(shí)對(duì)家鴨灌注降主動(dòng)脈，以搜集肝內(nèi)、門靜脈內(nèi)和腸系膜靜脈的成蟲。結(jié)果應(yīng)用上述方法可搜集到大量活的無損傷的成蟲。結(jié)論灌注法優(yōu)于解剖法，且簡(jiǎn)便、快捷，實(shí)用性強(qiáng)。

PRELIIARYSTUDYNTHEETHDSFSEPARATING

ABSTRATAiTiprvethelletingrateftheadultrsfTrihbiharzia.ethdsTheadultrsinvenaprtaeandhepatiaeinternaerelletedbytheethdsfexsatizatinandretrgradepuringinvenafliversfduks.Theadultrsinlivers,venaprtaeandvenaesenteriafdukserelletedbytheethdfpuringartadesendens.ResultsAltfnn-trauatilivingadultrsandnn-trauatuldbelletedbytheseethrds.Thelletingratefthepuringassignifiantlyhigherthanthatftherethrds(p＜0.05).nlusinsTheethdfpuringasresiple,diret,pratialandasbetterthanthatfdissetin.

KEYRDSTrihbiharziaadultrpuringlletingethd

毛畢屬〔Trihbilharzia〕吸蟲為鳥類血吸蟲，其尾蚴可侵襲人體引起變態(tài)反響性皮炎，該屬吸蟲宿主較多，家鴨是毛畢屬吸蟲主要的終宿主之一［1～10］。從家鴨體內(nèi)別離出成蟲，是研究其形態(tài)、構(gòu)造并進(jìn)展分類的重要基矗作者在淮河水系毛畢屬吸蟲研究的過程中，對(duì)毛畢吸蟲成蟲的別離方法進(jìn)展了初步研究，獲得了較為滿意的結(jié)果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1病鴨用毛畢屬吸蟲尾蚴〔50條〕人工感染的、并在院動(dòng)物房?jī)?nèi)飼養(yǎng)30天以上的雛鴨〔為當(dāng)?shù)鼐用穹趸募银啞?；?gòu)自當(dāng)?shù)鼐用瘛矟O民及農(nóng)民〕于毛畢吸蟲流行水域內(nèi)放養(yǎng)1年以上的陽(yáng)性家鴨。

1.1.2藥品器材肝素〔Ehter.批號(hào)：930407，上海浦江應(yīng)用生物化學(xué)研究所?！骋颐选睤iethylether，批號(hào)：960423，宜興市第二化學(xué)試劑廠〕、注射器、9號(hào)注射針頭、吊瓶、解剖針、橡皮導(dǎo)管、玻璃導(dǎo)管、手術(shù)刀、剪等。

1.2方法

1.2.1肝門靜脈、腸系膜靜脈解剖法將病鴨〔其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽(yáng)性的家鴨〕固定在解剖臺(tái)上，用乙醚麻醉后，剖開胸腹部，將肝門靜脈和肝靜脈結(jié)扎，用眼科剪、解剖針和“0〞號(hào)毛筆剖檢肝門靜脈和腸系膜靜脈別離成蟲。即從較細(xì)的腸系膜靜脈開場(chǎng)，分段以解剖針刺破靜脈，并以解剖針從靜脈遠(yuǎn)端驅(qū)趕血液〔成蟲〕從刺破處流出，用毛筆輕取流出血液至含有生理鹽水的平皿中，用生理鹽水反復(fù)清洗換水，直至蟲體被洗凈為止。最后在解剖鏡下搜集成蟲。

1.2.2在體肝臟灌注法將病鴨〔其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽(yáng)性的家鴨〕固定在兔解剖臺(tái)上，在翅根部靜脈注射2l肝素鈉〔12500U〕，隨即用乙醚麻醉后剖開胸腹部，暴露內(nèi)臟〔操作中應(yīng)防止劃傷心臟和肝臟〕。接著在肝靜脈出口遠(yuǎn)端和門靜脈起始端各作一切口，分別插入導(dǎo)入管和導(dǎo)出管〔上述兩管可由普通玻璃吸管替代，其長(zhǎng)短、粗細(xì)根據(jù)鴨子的大小與靜脈的粗細(xì)選用〕。將含有生理鹽水的500l吊瓶，置于2.5高處，通過輸液皮條與導(dǎo)入管相連，接通生理鹽水，生理鹽水和成蟲一起即可從門靜脈導(dǎo)出管口流出〔抬高導(dǎo)入端解剖臺(tái)效果尤佳〕。

當(dāng)流出液中含有較多組織液和血液時(shí)，可在量杯中換水沉淀幾次，每次5in。假設(shè)流出液較明晰，立即吸入小培養(yǎng)皿內(nèi)，在解剖鏡下或用肉眼直接分檢。

1.2.3離體肝臟灌注法將病鴨〔其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽(yáng)性的家鴨〕固定在解剖臺(tái)上，在翅膀根部注射2l肝素鈉。隨即用乙醚麻醉后解剖，暴露內(nèi)臟。用止血鉗或縫合線分別夾〔扎〕住肝靜脈和門靜脈起始端，仔細(xì)別離肝臟，并移至平皿內(nèi)。然后將連有生理鹽水吊瓶的吸管漸漸插入肝靜脈內(nèi)，接通生理鹽水進(jìn)展灌注，將門靜脈流出液倒入300l量杯內(nèi)，沉淀，換水2次，緩慢棄去上液，沉淀液倒入小平皿內(nèi)，在解剖鏡下或手持放大鏡用肉眼直接分檢。

1.2.4肝門靜脈及腸系膜靜脈同時(shí)灌注法將病鴨〔其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽(yáng)性的家鴨〕固定在解剖臺(tái)上，在翅膀根部注入2l肝素鈉，雛鴨酌減，用乙醚麻醉后，迅速翻開胸腹腔，暴露內(nèi)臟。用止血鉗夾住肝靜脈，將連有生理鹽水吊瓶的9號(hào)針頭插入降主動(dòng)脈內(nèi)，隨后將門靜脈起始端剪斷，用一漏斗放于大、小腸的下方。接通生理鹽水，流出液經(jīng)尼龍網(wǎng)過濾，將阻留物翻入含生理鹽水的培養(yǎng)皿中，直接鏡檢。

2結(jié)果

2.1肝門靜脈系統(tǒng)和腸系膜靜脈解剖法分別解剖人工感染毛畢吸蟲尾蚴的雛鴨和在當(dāng)?shù)亓餍袇^(qū)自然感染的家鴨各20只，共別離到完好的成蟲388條〔雌蟲349條，雄蟲39條〕。其中從人工感染毛畢屬吸蟲尾蚴的雛鴨體內(nèi)共別離成蟲138條〔雌蟲127條，雄蟲11條〕，每只雛鴨檢獲成蟲數(shù)目不等，最少3條，最多26條，平均6.9條；從自然感染的家鴨體內(nèi)共別離成蟲250條〔雌蟲194條，雄蟲56條〕，每只家鴨檢獲的成蟲2～72條，平均12.5條。從40只家鴨體內(nèi)均別離到活體成蟲，此外尚有局部蟲體斷片。

2.2在體肝臟灌注法分別灌注人工感染毛畢吸蟲尾蚴的雛鴨20只和在當(dāng)?shù)亓餍袇^(qū)自然感染的家鴨35只。共別離成蟲2546條〔雌蟲1393條，雄蟲1153條〕。其中從人工感染毛畢屬吸蟲尾蚴的雛鴨體內(nèi)檢獲成蟲699條〔雌蟲249條，雄蟲350條〕，每只雛鴨檢獲成蟲5～38條，平均34.95條；從自然感染的家鴨體內(nèi)共檢獲成蟲1847條〔雌蟲932條，雄蟲915條〕，每只家鴨檢獲成蟲12～86只，平均52.77條。從55只家鴨體內(nèi)別離到的成蟲均為活蟲。

2.3離體肝臟灌注法分別灌注人工感染的病鴨6只和自然感染的病鴨10只，共別離成蟲2495條〔雌蟲1215條，雄蟲1280條〕。其中人工感染的病鴨檢獲成蟲192條〔雌蟲95條，雄蟲97條〕，每只人工感染的病鴨檢獲成蟲22～41條，平均32條；從自然感染的病鴨檢獲成蟲2303條〔雌蟲1006條，雄蟲1297條〕，每只病鴨檢獲成蟲186～315條，平均230.3條。從16只病鴨檢獲的成蟲均為活蟲。

2.4肝門靜脈及腸系膜靜脈灌注法別離人工感染的雛鴨10只和在流行區(qū)購(gòu)置的陽(yáng)性家鴨10只，分別檢獲成蟲448條〔雌蟲197條，雄蟲251條〕和2554條〔雌蟲1231條，雄蟲1323條〕。每只人工感染的病鴨檢獲成蟲22～56條，平均45條；每只購(gòu)自流行區(qū)的陽(yáng)性家鴨檢獲成蟲194條～396條，平均255條。從20只病鴨所別離的成蟲均為活蟲。

3討論

毛畢屬吸蟲的終宿主主要為家鴨和綠頭鴨、綠翅鴨、斑嘴鴨和斑背潛鴨、蒼頂夜鷺等留鳥［1～10］，其中家鴨是人們研究毛畢屬吸蟲常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，無論是研究其生活史、分類還是流行病學(xué)調(diào)查都用家鴨作為成蟲的動(dòng)物模型。據(jù)以往文獻(xiàn)記載，從家鴨體內(nèi)別離毛畢吸蟲，多采用肝門靜脈、腸系膜靜脈解剖法，而肝臟灌注法搜集毛畢吸蟲成蟲，尚未見報(bào)道。從本次研究結(jié)果可見，肝門靜脈、腸系膜靜脈解剖法手工操作別離成蟲較慢，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，從解剖1只病鴨到其中的成蟲別離完畢，一個(gè)人要花4～6h，因蟲體較小，又與血液混合在一起，別離時(shí)不易看清，易漏檢，且血凝后無法進(jìn)展操作。因此，該方法成蟲搜集率低。應(yīng)用肝臟灌注法〔無論是采取在體灌注，還是離體灌注〕，從解剖1只病鴨到成蟲別離完畢，一個(gè)人僅需用1～2h。因此肝臟灌注法與常規(guī)的肝門靜脈、腸系膜靜脈解剖法相比較，具有省時(shí)、省力，所獲成蟲蟲體完好、干凈、便于活體測(cè)量和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，且成蟲搜集率也明顯增高。因?yàn)轼喐戊o脈位于心臟的反面，粗而短；門脈位于腸系膜中，既細(xì)又短，在體灌注有一定困難。因此，離體肝臟與在體肝臟灌注兩者相比，前者更便于操作。但在離體肝臟灌注時(shí)，假設(shè)操作不純熟、別離肝臟的時(shí)間長(zhǎng)，可導(dǎo)致肝門靜脈內(nèi)血液凝固，灌洗出的蟲體包裹在血凝塊中，檢出率將大受影響、甚至檢不出成蟲。由于鴨肝很脆弱，易損傷，故在灌注前插管和別離肝臟時(shí)，應(yīng)細(xì)心操作。假設(shè)操作不慎，肝臟出現(xiàn)裂損，可降低肝臟內(nèi)的灌注壓力，從而影響灌洗效果，使蟲體不能全部沖出。較高的灌注壓力和完好無損的鴨肝是灌注成功的關(guān)鍵。

雖然肝臟灌注法大大地進(jìn)步了搜集成蟲的效率，但是，寄生于腸系膜內(nèi)的成蟲無法沖出，采用肝門靜脈和腸系膜靜脈同時(shí)灌注法較好地解決了這個(gè)矛盾，無疑是毛吸蟲別離方法上的一大進(jìn)步。

由于灌注法具有常規(guī)肝門靜脈、腸系膜靜脈解剖法不可比較的優(yōu)點(diǎn)，建議此方法應(yīng)用于家畜〔牛、羊〕體內(nèi)東畢吸蟲成蟲的別離。常規(guī)搜集家畜東畢吸蟲成蟲的方法有二種：一是?；蜓蚋伍T靜脈解剖法；二是將?；蜓蚋斡玫肚袛?shù)下而不切穿，放于篩筐內(nèi)沖洗，同時(shí)用手?jǐn)D壓20in，將篩內(nèi)容物洗入量杯，用水反復(fù)沉淀，取沉淀渣檢查蟲體，費(fèi)力、費(fèi)時(shí)。應(yīng)用灌注法可能會(huì)克制上述缺乏，產(chǎn)生更好別離效率。

關(guān)于毛畢吸蟲在鴨體內(nèi)的寄生部位，根據(jù)唐仲璋，唐崇惕〔1962〕報(bào)道，毛畢吸蟲除寄生在門靜脈和腸系膜靜脈外，還可以寄生于肺和心臟。解剖9只鴨子共搜集毛畢吸蟲成蟲233條，其中186條〔79.83％〕寄生于肝門靜脈和腸系膜靜脈，25條〔10.73％〕和22條〔9.44％〕分別寄生于肺部及心臟。因此要計(jì)算鴨體蟲荷的多少，應(yīng)對(duì)病鴨進(jìn)展較細(xì)致的解剖和灌注，才能較客觀地理解其毛畢吸蟲感染度。作者已初步嘗試采用肝臟和腸系膜靜脈灌注法及灌注后再對(duì)肺、心進(jìn)展解剖別離家鴨體內(nèi)的毛畢吸蟲成蟲，此項(xiàng)工作尚待進(jìn)一步完善、總結(jié)。此方法對(duì)于理解毛畢吸蟲的分布和不同部位雌雄蟲的比例具有價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

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