畢業(yè)論文交換毛細(xì)管電泳法分離拉唑類藥物專業(yè)：學(xué)生：導(dǎo)師：時間：2主要內(nèi)容一、前言二、研究方案三、進(jìn)度計劃四、參考文獻(xiàn)3一、前言1.1手性藥物1.1.1手性藥物概念與來源

人的左右手互為鏡像，鏡像和實物不能重疊，科學(xué)上將這種現(xiàn)象稱為手性。如下圖1所示：如果一個物體與其鏡像不能重疊，該物體就稱為手性物體。手性是三維物體的基本屬性。在人們所使用的藥物中絕大多數(shù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)具有手性，并被稱之為手性藥物。手性是生命過程的基本特征，生命體系具有極強的手性識別能力，藥物在體內(nèi)是通過藥物與生物大分子間相互的手性匹配和分子識別作用而發(fā)揮治療作用的[1]。

圖14

手性藥物主要從天然來源、不對稱合成和外消旋體拆分3個方面得到：①由天然來源獲得手性藥物，原料豐富、價廉易得，生產(chǎn)過程簡單，產(chǎn)品的純度一般都較高，因此很多量大的產(chǎn)品都是從天然物中獲得。②在藥物工業(yè)中由于對手性藥物的要求不斷增加，其大大激發(fā)了不對稱有機合成的發(fā)展，使一些生物技術(shù)、生物催化劑也迅速擴展到該領(lǐng)域產(chǎn)生純的手性中間體和手性產(chǎn)品。③對外消旋體化合物進(jìn)行制備性分離具有巨大的潛力。對外消旋體化合物進(jìn)行拆分研究目前主要有機械拆分法、晶體接種拆分法、生物拆分法、化學(xué)拆分法以及色譜拆分法[2]。51.1.2研究手性藥物必要性

許多手性藥物其對映體的藥理活性和毒性往往有很大差異，可分為以下四大類：第一類是手性藥物與對映體之間有相同或相近的藥理活性。如平喘藥丙羥茶堿、抗組織胺藥異丙嗪、抗心律失常藥氟卡尼等。第二類是手性藥物具有顯著的活性，而它的對映體活性很低或無此活性。氯霉素消旋體中(R，R)－氯霉素有活性，而對映體(S，S)－氯霉素則無活性。普萘洛爾是一種腎上腺素β－阻滯劑，其手性藥物(S)－普萘洛爾的活性是其對映體(R)－普萘洛爾的100倍以上。非甾體抗炎藥萘普生、布洛芬也具有這種性質(zhì)。第三類是手性藥物與其對映體的藥理活性有差異，如抗癌藥(S)－環(huán)磷酰胺的活性是(R)－環(huán)磷酰胺的2倍。第四類是手性藥物與它的對映體具有不同的藥理活性。如(2S，3R)－丙氧芬(右丙氧芬)是止痛劑，而(2R，3S)－丙氧芬(左丙氧芬)是鎮(zhèn)咳藥；L－多巴用于治療帕金森氏癥，而其對映體D－多巴則具有嚴(yán)重的副作用，反應(yīng)停屬于這一類[1]。因此手性藥物的分離分析測定，對研究手性藥物的體內(nèi)藥動力學(xué)過程，確定藥動力學(xué)參數(shù)、藥理和毒理作用機制以及手性藥物質(zhì)量控制等都具有重要意義[3]。

71.1.3手性藥物的分離分析

利用手性技術(shù)，人們可以有效地將藥物中不起作用或有毒副作用的成分剔除，生產(chǎn)出具有單一定向結(jié)構(gòu)的純手性藥物，從而提高藥物有效成分，使之在治療疾病時療效更快、療程更短[1]。迄今為止，手性藥物分離分析方法主要有毛細(xì)管電泳法高效液相色譜法薄層色譜法氣相色譜法超臨界流體色譜法。

其中高效毛細(xì)管電泳分離分析技術(shù)是上世紀(jì)80年代初發(fā)展起來的微量分離分析技術(shù)，它以分離能力強，分離模式多和試劑消耗小等特點獲得了人們的青睞。帶電環(huán)糊精衍生物的電泳分離體系是快速測定手性藥物光學(xué)純度、分離天然產(chǎn)物活性成分的優(yōu)選方法[1]。

81.2毛細(xì)管電泳1.2.1毛細(xì)管電泳發(fā)展史

毛細(xì)管電泳(capillaryelectrophoresis，CE)又叫高效毛細(xì)管電泳(HPCE)，是近年來發(fā)展最快的分析方法之一。1981年Jorgenson和Lukacs首先提出在75μm內(nèi)徑毛細(xì)管柱內(nèi)用高電壓進(jìn)行分離，創(chuàng)立了現(xiàn)代毛細(xì)管電泳。1984年Terabe等建立了膠束毛細(xì)管電動力學(xué)色譜。1987年Hjerten建立了毛細(xì)管等電聚焦，Cohen和Karger提出了毛細(xì)管凝膠電泳。1988～1989年出現(xiàn)了第一批毛細(xì)管電泳商品儀器。短短幾年內(nèi)，由于CE符合了以生物工程為代表的生命科學(xué)各領(lǐng)域中對多肽、蛋白質(zhì)(包括酶，抗體)、核苷酸乃至脫氧核糖核酸(DNA)的分離分析要求，得到了迅速的發(fā)展。10表1部分手性拆分技術(shù)的特點11

其中毛細(xì)管區(qū)帶電泳，又稱毛細(xì)管自由電泳，用以分析帶電溶質(zhì)，是CE中最基本、應(yīng)用最普遍的一種模式。基于以上所述優(yōu)缺點比較和所測樣品的特點，本實驗采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法。

121.2.3毛細(xì)管電泳儀與工作原理

毛細(xì)管電泳儀一般由以下幾部分構(gòu)成：1.高壓電源2.毛細(xì)管3.緩沖液池4.檢測器5.加樣系統(tǒng)[10]。毛細(xì)管電泳(CE)是近十幾年來發(fā)展起來的一種高效分離技術(shù)，它以高壓電場為驅(qū)動力，以毛細(xì)管為分離通道，依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離[11]。其裝置圖如圖2所示。141.3.1手性配體交換原理

手性配體交換毛細(xì)管電泳法的原理是，手性配體L(通常為L型氨基酸及其衍生物)與金屬離子M形成絡(luò)合物M[L]n，并與待測對映體發(fā)生交換作用。由對映體D-和L-型與手性配體、金屬離子形成的三元配合物穩(wěn)定常數(shù)不同，決定了它們在電泳力作用下遷移時間的不同，因而可以實現(xiàn)對映異構(gòu)體的拆分[15]。151.3.2手性配體交換法的部分影響因素

手性配體：應(yīng)具備以下條件：①手性中心有兩個或兩個以上的配位官能團；②光學(xué)純；③手性中心與官能團不能太遠(yuǎn)；④需一個較大的集團以產(chǎn)生空間排斥作用。滿足這4個條件的配體很多，但目前常用的主要是L-脯氨酸、L-羥基脯氨酸和L-哌氨酸等環(huán)狀氨基酸[16]。

中心金屬離子：在配體交換色譜中，凡能與手性配體、待測物質(zhì)形成可逆絡(luò)合物的金屬離子應(yīng)都可作為配體交換色譜的金屬離子。常用的金屬離子有Cu2+、Ni2+、Co2+和Zn2+等，但不同金屬離子的配位能力不同，對對映體的拆分能力也就不同。其中，根據(jù)文獻(xiàn)報道，Cu2+最常用[16]。

1718二、研究方案2.1研究目標(biāo)

以質(zhì)子泵抑制劑作為研究對象，通過改變其分離的實驗條件，建立高效、簡便、快速分離分析方法。192.2研究內(nèi)容

該實驗采用配體交換毛細(xì)管區(qū)帶電泳法，通過考察背景電解質(zhì)種類、濃度及PH，中心離子與配體比率、濃度和分離電壓等電泳條件，確定幾個拉唑類藥物的最佳分離分析條件。

20三、進(jìn)度計劃1.2012.02.27——2012.03.18查閱中英文文獻(xiàn)并作開題報告。2.2012.03.19——2012.03.25準(zhǔn)備實驗試劑，儀器。3.2012.03.26——2012.06.20實驗，考察背景電解質(zhì)種類、背景電解質(zhì)濃度、背景電解質(zhì)的pH以及電壓等因素對手性藥物分離分析的影響，確定各個化合物的最佳手性分離條件并檢驗。4.2012.06.21——2012.07書寫論文，補充實驗數(shù)據(jù)，論文答辯。21四、參考文獻(xiàn)[1]達(dá)瓦潘多.淺談手性藥物[J].西藏醫(yī)藥雜志,2007,28(3):55-56.[2]向小莉,袁黎明.手性化合物[J].化學(xué)教育,2003,5:3-6.[3]HUANGYan-yan(黃艷艷),LIUDao-jie(劉道杰).Applica-tionofHPLCchiralmobilephaseadditivemethodinseparationofdrugenantiomers(HPLC手性流動相拆分法在分離藥物對映體的應(yīng)用).ChemReag(化學(xué)試劑),2007,29(6):345.[4]MURAKAMIH.Fromracematestosingleenantiomerschiralsyntheticdrugsoverthelast20years[J].TopCurrChem,2007,269:273-299.[5]YUEHF,BUX,YOUNGJ,eta.lChiralmethoddevelopmentstrategiesforearlyphaseofdrugdevelopmentacasestudy[J].AmPharmRev,2008,11(3):113-118.[6]ERBS.Single-enantiomerdrugspoisedforfurthermarketgrowth[EB/OL].[2006-03]./pdf/TCI-PharmaT-ech-1006.pdf.[7]羅碧青,冼嘉雯.毛細(xì)管電泳用于手性拆分的研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2009,5(12):153-155.[8]舒建華,鄭少琴,梅林,林勇.藥物分析中的毛細(xì)管電泳應(yīng)用[J].激光雜志,2008,29(4):96-97.[9]秦勝利,于建生.手性藥物拆分技術(shù)進(jìn)展[J].山東化工,2011,40(3),51-53.[10]聶燕芳.毛細(xì)管電泳原理及應(yīng)用[J].中山大學(xué)研究生學(xué)刊（自然科學(xué)、醫(yī)學(xué)版），2002,23(2):38-43.[11]慈薇,柴逸峰,劉荔荔等.毛細(xì)管電泳非環(huán)糊精體系拆分手性藥物的研究進(jìn)展[J].藥學(xué)學(xué)報,2002,37(1):75-80.[12]DAVANKOVVA.Enantioselectiveligandexchangeinmodernseparationtechniques[J].J.Chromatogr.A,2003,1000(1/2):891-915.[13]KURGANOVA.Chiralchromatographicseparationsbasedonligandexchange[J].J.Chromatogr.A,2001,906(1/2):51-71.[14]趙艷敏,趙艷芳.手性配體交換毛細(xì)管電泳研究進(jìn)展[J].化學(xué)試劑,2010,32(5),422~426.[15]徐卉姝,關(guān)瑾,陳星,古亨達(dá),