7非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒等2種獸藥產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽一、非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書和內(nèi)包裝標(biāo)簽（一）非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書獸用【獸藥名稱】通用名非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒商品名無英文名稱AfricanSwineFeverVirusNucleicAcidFluorescencePCRDetectionKit漢語拼音FeizhouzhuwenBingduYingguangPCRHesuanJianceshijihe【主要成分與含量】產(chǎn)品組份規(guī)格（48頭份/盒）樣品裂解液4ml/管×3管熒光PCR反應(yīng)液1.2ml/管×1管陽性對照500μl/管×1管陰性對照500μl/管×1管說明書1份/盒【作用與用途】用于豬全血、血清、淋巴結(jié)、脾臟、肌肉等樣本中的非洲豬瘟病毒的檢測?！居梅ㄅc判定】1用法1.1樣品處理1.1.1全血及液體樣本：直接使用商品化EDTA抗凝管采血，取動物新鮮血液或其他液體樣本200μl備用。1.1.2組織樣本：取脾臟、淋巴結(jié)、肌肉等組織約1g，使用高壓滅菌（121℃，20分鐘）的剪刀剪碎后，取0.1g放入研缽或組織勻漿機(jī)中，隨后加入1.5ml生理鹽水進(jìn)行勻漿，將此樣本轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中，8000g離心2分鐘，取上清液備用。1.2核酸提取1.2.1取需要數(shù)量的離心管（需設(shè)置陽性對照及陰性對照），均加入樣品裂解液190μl；1.2.2分別加入采集的待檢樣品（全血、組織樣本等）、陽性對照、陰性對照各10μl，渦旋儀渦旋混勻10秒，充分混勻；1.2.3瞬時離心5秒，取上清液備用。1.3PCR操作步驟試劑準(zhǔn)備區(qū)1.3.1取出試劑盒，從中取出實驗所需試劑，融化混勻并瞬時離心5秒以去除管壁附著的液體；1.3.2在各PCR管中分別加入20μl熒光PCR反應(yīng)液，轉(zhuǎn)移至樣本準(zhǔn)備區(qū)；樣本準(zhǔn)備區(qū)1.3.3分別加入1.2.3步驟獲得的上清液5μl，瞬時離心5秒，轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)；擴(kuò)增區(qū)1.3.4將各PCR管放置在儀器樣品槽相應(yīng)位置，并記錄放置順序；1.3.5按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。體系25μl反應(yīng)體系信號通道FAM通道采集熒光信號PCR反應(yīng)條件階段條件循環(huán)數(shù)預(yù)變性95℃：3min1PCR95℃：10sec4060℃：20sec2結(jié)果判定2.1試驗成立條件2.1.1陽性對照：Ct值≤30，有明顯指數(shù)增長，呈典型的S型曲線。2.1.2陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，無明顯指數(shù)增長期和平臺期。2.2判定標(biāo)準(zhǔn)2.2.1陽性：樣本檢測結(jié)果Ct值≤35，有明顯指數(shù)增長，表明樣本中檢測出該病毒。2.2.2可疑：樣本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍，應(yīng)對樣本進(jìn)行復(fù)檢。如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35~38范圍，有明顯指數(shù)增長，則判定為陽性，否則為陰性。2.2.3陰性：樣本檢測結(jié)果Ct值＞38或無Ct值，表明樣本中未檢測出該病毒?！咀⒁馐马棥浚?）實驗前請仔細(xì)閱讀本試劑盒說明書，嚴(yán)格按操作步驟執(zhí)行。（2）所有試劑應(yīng)在規(guī)定的溫度儲存，詳細(xì)信息見試劑標(biāo)簽。（3）樣本前處理應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，試驗后對所有樣本、使用的材料進(jìn)行高溫滅菌處理。（4）為了避免交叉污染，請盡可能在無核酸酶的環(huán)境下操作，并將試驗過程分區(qū)進(jìn)行（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)等）。（5）配制PCR反應(yīng)體系時應(yīng)盡量避免氣泡產(chǎn)生，擴(kuò)增前應(yīng)檢查反應(yīng)管是否蓋緊，以免反應(yīng)液泄漏污染儀器。（6）本試劑盒可搭配標(biāo)準(zhǔn)核酸提取純化方法進(jìn)行樣品檢測，Ct值等判定參數(shù)不變。（7）為保證實驗結(jié)果準(zhǔn)確，樣品應(yīng)為新鮮采集，2~8℃運輸，長途運輸請使用干冰。（8）所有試劑應(yīng)避免反復(fù)凍融?！疽?guī)格】48頭份/盒【貯藏與有效期】-20℃冷凍避光貯藏，有效期為12個月?！九鷾?zhǔn)文號】【生產(chǎn)企業(yè)】僅供獸醫(yī)診斷使用（二）非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒內(nèi)包裝標(biāo)簽非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒 獸用48頭份/盒 批準(zhǔn)文號：生產(chǎn)批號：有效期至：【用法與判定】詳見說明書?！举A藏與有效期】-20℃冷凍避光貯藏，有效期為12個月?！旧a(chǎn)企業(yè)】僅供獸醫(yī)診斷使用樣品裂解液獸用4ml/管 批準(zhǔn)文號：生產(chǎn)批號：有效期至：【用法與判定】詳見說明書?！举A藏與有效期】-20℃冷凍避光貯藏，有效期為12個月?！旧a(chǎn)企業(yè)】僅供獸醫(yī)診斷使用熒光PCR反應(yīng)液獸用1.2ml/管 批準(zhǔn)文號：生產(chǎn)批號：有效期至：【用法與判定】詳見說明書?！举A藏與有效期】-20℃冷凍避光貯藏，有效期為12個月?！旧a(chǎn)企業(yè)】僅供獸醫(yī)診斷使用陰性對照獸用500μl/管 批準(zhǔn)文號：生產(chǎn)批號：有效期至：【用法與判定】詳見說明書?！举A藏與有效期】-20℃冷凍避光貯藏，有效期為12個月?！旧a(chǎn)企業(yè)】僅供獸醫(yī)診斷使用陽性對照獸用500μl/管 批準(zhǔn)文號：生產(chǎn)批號：有效期至：【用法與判定】詳見說明書。【貯藏與有效期】-20℃冷凍避光貯藏，有效期為12個月?！旧a(chǎn)企業(yè)】僅供獸醫(yī)診斷使用二、非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書和內(nèi)包裝標(biāo)簽（一）非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書獸用【獸藥名稱】通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒漢語拼音：FeizhouzhuwenBingduYingguangPCRHesuanJianceshijihe英文名稱：AfricanswineFeverVirus（ASFV）PCRNucleicAcidDiagnosticKit商品名稱：無【主要成分與含量】試劑盒中含有如下組分：試劑盒組分含量陽性對照250l/管×1管陰性對照250l/管×1管PCR反應(yīng)液850l/管×1管酶混合液150l/管×1管說明書1份/盒【作用與用途】本試劑盒可用于血液、脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體、腎臟、肌肉、環(huán)境樣品等樣品中非洲豬瘟病毒核酸的檢測?！居梅ㄅc判定】1用法1.1待檢樣品采集、保存及運輸1.1.1樣品采集（1）活豬樣品無菌采集抗凝血或血清5ml。（2）病死豬剖檢樣品或屠宰場剖檢樣品無菌采集死豬的脾、肺、腎、扁桃體、淋巴結(jié)、肌肉等組織樣品。2～8℃低溫運至實驗室用于檢測。（3）病豬污染的周邊環(huán)境采集與病豬相關(guān)場所的糞便、飼料、污水樣品。2～8℃低溫運至實驗室用于檢測。1.1.2樣品保存采集的樣品在2～8℃保存應(yīng)不超過24小時，-70℃條件下保存，避免反復(fù)凍融。1.1.3樣品運輸泡沫箱加冰袋后密封進(jìn)行運輸。包裝和運輸應(yīng)符合農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《高致病性動物病原微生物菌（毒）種或者樣品運輸包裝規(guī)范》和交通運輸部門關(guān)于危險品運輸管理的有關(guān)規(guī)定。1.2樣品處理1.2.1血液樣品處理抗凝血樣品置于離心管中，8000r/min離心2分鐘取上層血漿，編號待檢。非抗凝血樣品置于離心管中，待凝固后，8000r/min離心2分鐘取200μl上層血清，編號待檢。1.2.2組織樣品處理取適量脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體、肌肉等組織，置于研磨器或研磨管中研磨，再加適量生理鹽水混勻，制成約10%的組織勻漿，8000r/min離心2分鐘，取200μl上清于RNase/DNase-free無菌離心管中，編號備用。1.2.3環(huán)境樣品處理1.2.3.1糞便、飼料樣品處理方法取適量的糞便、飼料放入盛有PBS緩沖液的研磨管中研磨混勻，制成約10%的勻漿液，8000r/min離心2分鐘，取200μl上清于RNase/DNase-free無菌離心管中，編號備用。1.2.3.2污水樣品處理方法直接取200μl污水進(jìn)行核酸提取。1.3病毒核酸的提取用磁珠法或柱式法進(jìn)行DNA核酸提取。1.4熒光PCR反應(yīng)：1.4.1從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液、酶混合液，室溫融化后，2000r/min離心5秒。設(shè)被檢樣品、陽性對照和陰性對照總和為n，則反應(yīng)體系配制如下：試劑體系PCR反應(yīng)液17×（n+1）μl酶混合液3×（n+1）μl1.4.2在新的RNase/DNase-free1.5ml離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20μl/管分裝量將試劑分裝至熒光PCR反應(yīng)管。1.4.3在上述制備好的熒光PCR反應(yīng)管中分別加入陰性對照、陽性對照各5μl、處理好的待測核酸各5μl，終體積25μl/管，蓋好熒光PCR反應(yīng)管蓋，混勻后瞬時離心，轉(zhuǎn)移到熒光PCR儀器上。1.4.4將PCR反應(yīng)管放置在熒光PCR儀樣品槽中，在熒光PCR儀上運行以下程序：步驟條件循環(huán)數(shù)UNG處理50℃，2分鐘1預(yù)變性95℃，3分鐘1預(yù)擴(kuò)增95℃：8秒55℃：8秒5PCR擴(kuò)增95℃：8秒55℃：8秒40熒光通道選擇FAM，在PCR擴(kuò)增階段每個循環(huán)的55℃時采集熒光信號。設(shè)置擴(kuò)增體系為25μl，同時要選擇passivereference和quencher為none的模式。（注：若熒光PCR儀（如ABI7500）按說明書中的反應(yīng)程序設(shè)置后因持溫時間短無法運行，可將預(yù)擴(kuò)增和PCR擴(kuò)增條件變更為95℃：5秒55℃：30秒）2結(jié)果判定2.1試驗有效性判定陽性對照有典型擴(kuò)增曲線且Ct值≤30，且陰性對照無Ct值或無擴(kuò)增曲線，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期。則判試驗結(jié)果有效。否則，此次試驗視為無效。2.2樣品判定2.2.1陽性：樣本檢測結(jié)果Ct值≤35且有明顯指數(shù)增長期，判定檢出非洲豬瘟病毒核酸。2.2.2可疑：樣本檢測結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對樣本進(jìn)行重復(fù)檢測，如果重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長期，則判定為陽性，否則為陰性。2.2.3陰性：樣本檢測結(jié)果Ct值＞38或無Ct值，判定未檢出非洲豬瘟病毒核酸?！咀⒁馐马棥浚?）實驗前請仔細(xì)閱讀本試劑盒說明書，嚴(yán)格按照操作步驟執(zhí)行，在操作過程中對時間、試劑體積等精確控制可以獲得最好的結(jié)果。（2）實驗室應(yīng)嚴(yán)格按照有關(guān)規(guī)定分區(qū)管理，依照配液區(qū)→模板提取區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→分析區(qū)順序進(jìn)行基因檢測。各區(qū)間人員、器材、試劑及空氣流向應(yīng)有嚴(yán)格要求。（3）核酸提取有關(guān)耗材確保潔凈、無DNase/RNase，提取過程盡量低溫、快速，完成后進(jìn)入下一步實驗或凍保。（4）對于頂部采光儀器要帶新的一次性PE手套對熒光PCR管封蓋，對于底部采光儀器要避免徒手或使用過的手套接觸熒光PCR管底，檢測過程中使用不帶熒光物質(zhì)一次性乳膠手套。（5）凍存試劑使用前應(yīng)于室溫下完全融化，瞬時離心使液體完全沉于管底。避免反復(fù)凍融，以免影響試劑性能。（6）樣品、陽性對照等在使用后及時封蓋，避免組分間及氣溶膠等的污染造成假陽性。（7）擴(kuò)增產(chǎn)物禁止開蓋，實驗產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)及時收集，遠(yuǎn)離PCR實驗室進(jìn)行無害化處理?！疽?guī)格】50頭份/盒【貯藏與有效期】置-20℃以下避光保存，有效期12個月?！九鷾?zhǔn)文號】【生產(chǎn)企業(yè)】僅供獸醫(yī)診斷使用（二）非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒內(nèi)包裝標(biāo)簽非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒 獸用50頭份/盒批準(zhǔn)文號：批號：有效期至：【主要成分】本試劑盒含陽性對照品、陰性對照品、PCR反應(yīng)液、酶混合液?！咀饔门c用途】用于血液、脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體、腎臟、肌肉、環(huán)境樣品等樣品中非洲豬瘟病毒核酸的檢測?！居梅ㄅc判定】詳見說明書?！举A藏與有效期】-20℃以下避光保存，有效期12個月?！旧a(chǎn)企業(yè)】僅供獸醫(yī)診斷使用非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒獸用50頭份/盒批準(zhǔn)文號：批號：有效期至：【用法與判定】詳見說明書?！举A藏與有效期】-20℃以下避光保存，有效期12個月。【生產(chǎn)企業(yè)】僅供獸醫(yī)診斷使用陽性對照獸用250l/管批準(zhǔn)文號：批號：有效期至：【用法與判定】詳見說明書。【貯藏與有效期】-20℃以下避光保存，有效期12個月?！旧a(chǎn)企業(yè)】僅供獸醫(yī)診斷使用陰性對照獸用250l/管