第一節(jié)植物(zhíwù)脫毒（viruselimination)培養(yǎng)一、概念利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，脫除植物細(xì)胞中的病毒(bìngdú)，生產(chǎn)健康的繁殖材料。第一頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子二、植物(zhíwù)病毒病簡介定義：由植物病毒寄生引起的病害。癥狀：①變色，葉片的葉綠素形成受阻或積聚(jījù)，從而產(chǎn)生花葉、斑點、環(huán)斑、脈帶和黃化等。花朵的花青素也可因而改變,使花色變成綠色或雜色等,常見的癥狀為深綠與淺綠相間的花葉癥如煙草花葉病。②壞死，在葉片上常呈現(xiàn)壞死斑、壞死環(huán)和脈壞死，在莖、果實和根的表面常出現(xiàn)壞死條等。③畸形，器官變形，如莖間縮短，植株矮化，生長點異常分化形成叢枝或叢簇，葉片的局部細(xì)胞變形出現(xiàn)皰斑、卷曲、蕨葉及帶化等。第二頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子黃瓜(huángguɑ)病毒病辣椒(làjiāo)病毒病黃瓜(huángguɑ)病毒病一串紅病毒病第三頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子目前受病毒危害嚴(yán)重影響生產(chǎn)的有：大田作物(dàtiánzuòwù)：馬鈴薯、甘薯、甘蔗、煙草。蔬菜：白菜、大蒜、蔥、番茄、黃瓜、辣椒。果樹：柑橘、蘋果、草莓、香蕉?；ɑ埽合闶?、各種菊花、天竹葵、紫羅蘭等第四頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子危害園藝植物的病毒(bìngdú)數(shù)目植物種類染病毒種類植物種類染病毒種類植物種類染病毒種類菊花19矮牽牛5葡萄26康乃馨11馬鈴薯17櫻桃44水仙4大蒜24無花果5唐菖蒲5豌豆15桃23風(fēng)信子3百合6梨11月季10柑橘23草莓24天竺葵5蘋果36第五頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子第六頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子病毒的特性(tèxìng)及侵染有性生殖退化、僅用無性繁殖方法繁殖的植物，極易受病毒病的侵染(qīnrǎn)。大多植物病毒不經(jīng)種子傳播（?；詮姷牟《境猓?。病毒在生長旺盛的部位繁殖速度慢.第七頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子三、傳統(tǒng)的植物脫毒技術(shù)(jìshù)簡介物理方法：X射線、紫外線、超短波、高溫?zé)崽幚淼仍恚衡g化病毒，從而(cóngér)達(dá)到抑制病毒蔓延的目的?；瘜W(xué)方法：采用化學(xué)抑制劑，干擾病毒在植物體內(nèi)的復(fù)制。生物學(xué)方法：選用抗病毒品種或采用種子繁殖方法。第八頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子四、植物(zhíwù)脫毒的原理和技術(shù)基本原理早在1934年，White發(fā)現(xiàn)煙草(yāncǎo)花葉病毒在煙草(yāncǎo)根中的分布是不均勻的，越靠根尖（roottip）區(qū)病毒含量越低，在根尖的頂端不含病毒。能量競爭，病毒核酸和植物細(xì)胞分裂時DNA合成均需要消耗大量的能量，而分生組織細(xì)胞本身很活躍，其DNA合成是自我提供能量自我復(fù)制，而病毒核酸的合成要靠植物提供能量來自我復(fù)制，因而就得不到足夠的能量，從而就抑制了病毒核酸的復(fù)制。第九頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子

傳導(dǎo)抑制，病毒在植物(zhíwù)體內(nèi)的傳播主要是通過維管束實現(xiàn)的，但在分生組織中，維管組織還不健全，從而抑制了病毒向分生組織的傳導(dǎo)。

激素抑制，在分生組織中，生長素和細(xì)胞分裂素水平均很高，因而阻滯了病毒的侵入(qīnrù)或者抑制病毒的合成。酶缺乏，1969年，Stace-Smith提出，可能病毒的合成(héchéng)需要的酶系統(tǒng)在分生組織中缺乏或還沒建立，因而病毒無法在分生組織中復(fù)制。

抑制因子，1976年，Martin-Tanguy等提出了抑制因子假說，認(rèn)為在分生組織中存在有某種抑制因子第十頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子莖尖脫毒是控制植物病毒(bìngdú)的有效途徑：藥物防治病毒病效率低；抗病毒育種步履艱難；組織培養(yǎng)的高效隔離防治了病毒的再侵染。第十一頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子預(yù)處理：一般(yībān)采用熱處理方法香石竹在38～40℃條件下經(jīng)兩個月處理可除去全部病毒。菊花在35～38℃條件下處理60天可使病毒失活。1.被脫毒植物攜帶病毒(bìngdú)的診斷根據(jù)植物病毒病的癥狀特征和表現(xiàn)程度判斷病毒類型及感染程度。2.母體植株的選擇和預(yù)處理母體的選擇：欲脫毒材料的品種典型性；外植體健康程度選擇;無損傷。植物(zhíwù)脫毒的技術(shù)規(guī)程第十二頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子脫毒時，最好(zuìhǎo)找出莖原基所帶葉原基的數(shù)目與生長點（莖尖）大小的相關(guān)性，這樣在取材時就方便多了莖尖越小對培養(yǎng)基的要求越高，剝離技術(shù)要求越高，成功率越低第十三頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子3.莖尖分生組織培養(yǎng)再生(zàishēng)植株外植體消毒----莖尖剝離---莖尖培養(yǎng)4.脫毒效果檢測一般來說，再生植株后，在18個月以內(nèi)進(jìn)行病毒鑒定，因為病毒在植物(zhíwù)體內(nèi)的潛伏期為6-12個月以上。第十四頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子抗血清(xuèqīng)反應(yīng)鑒定ISEM五、脫毒植物(zhíwù)的鑒定方法指示植物(zhǐshìzhíwù)鑒定直觀鑒定第十五頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子脫毒苗的保存與快速繁殖脫毒苗的離體保存與繁殖，建立脫毒種苗生產(chǎn)繁殖網(wǎng)絡(luò)體系，木本植物建立隔離(gélí)的脫毒苗母本園。RootingmediumProliferationmedium第十六頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子指示植物(testplants)鑒定(jiàndìng)——利用病毒在其他植物上出現(xiàn)癥狀的特征，作為鑒別種類的標(biāo)準(zhǔn)。這種專用以產(chǎn)生癥狀的（寄主）植物就是指示植物。寄主植物能夠辨別某種病毒的?；园Y狀。方法：將待測植物的汁液接種到指示植物，如果待測植株帶毒，則指示植物上會出現(xiàn)特定癥狀。由于病毒的寄生范圍不同，所以應(yīng)根據(jù)不同的病毒選擇適合的指示植物。五、脫毒植物的鑒定(jiàndìng)方法第十七頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子血清鑒定(serologicaltest)(抗原抗體反應(yīng)(fǎnyìng))：病毒抗血清具有高度的?；?，因而可用于鑒定受感染而沒有癥狀的帶毒植物。試管沉淀反應(yīng)；免疫雙擴(kuò)散；酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)。植物(zhíwù)汁液抗血清對照(duìzhào)血清五、脫毒植物的鑒定方法第十八頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子六、植物脫毒培養(yǎng)(péiyǎng)的意義能夠有效地保持優(yōu)良品種的特性；生產(chǎn)無病毒種苗，防止品種退化；快速繁殖新品種，使優(yōu)良品種迅速應(yīng)用；節(jié)約耕地(gēng〃dì)，提高農(nóng)產(chǎn)品的商品率；第十九頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子第二節(jié)人工(réngōng)種子1.人工種子的概念人工種子（artificialseeds）又稱合成種子（syntheticseeds）或體細(xì)胞種子（somaticseeds）。任何一種繁殖體，無論是在涂膜膠囊中包裹的、裸露的或經(jīng)過(jīngguò)干燥的，只要能夠發(fā)育成完整的植株，均可稱之為人工種子。第二十頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子根據(jù)包被的需要程度可分為三類：第一類是裸露的或休眠的繁殖體，如可以適當(dāng)干燥的體細(xì)胞胚（如鴨毛草的體細(xì)胞胚）、休眠的微鱗莖和微塊莖等，它們在不加包被的情況下也具有較高的成株率；第二類為人工種皮包被的繁殖體，一些體細(xì)胞胚、原球莖等雖不能過度干燥，但只需人工種皮包被即可維持良好的發(fā)芽狀態(tài)，如胡蘿卜體細(xì)胞胚；第三類是水凝膠包埋再包被人工種皮的繁殖體，大多數(shù)體細(xì)胞胚、不定芽、莖尖等均需要先包埋在半液態(tài)凝膠中，再經(jīng)人工種皮包裹才能避免失水，從而(cóngér)維持良好的發(fā)芽能力。第二十一頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子與試管苗技術(shù)和自然有性繁殖種子相比，人工種子具有以下(yǐxià)突出的、甚至是不可取代的優(yōu)點：其一，在無性繁殖植物中，有可能建立一種高效快速的繁殖方法，它既能保持原有品種的種性，又可以使之具有實生苗的復(fù)壯效應(yīng)；其二，可以對優(yōu)異雜種種子不通過有性制種而快速獲得大量種子，特別是對于那些制種困難的植物更具有重要的實用意義；其三，對于一些不能正常產(chǎn)生種子的特殊植物材料如三倍體、非整倍體、基因工程植物等，有可能通過人工種子在短期內(nèi)加大繁殖應(yīng)用；其四，與田間制種相比，可以節(jié)省制種用地，且不受季節(jié)限制，可以實現(xiàn)工廠化生產(chǎn)，同時還避免了種子攜帶病原菌的危險；其五，與利用試管苗相比，可以避免移栽困難，且可以實現(xiàn)機(jī)械化操作，同時還便于儲藏和運輸。第二十二頁，共二十三頁。植物的脫毒培養(yǎng)與人工種子內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)第一節(jié)植物脫毒（viruseliminat