蟬蛻配方顆粒ChantuiPeifangkeli【來源】本品為蟬科昆蟲黑蚱CryptotympanapustulataFabricius的若蟲羽化時脫落的皮殼經(jīng)炮制并按標(biāo)準(zhǔn)湯劑的主要質(zhì)量指標(biāo)加工制成的配方顆粒。【制法】取蟬蛻飲片6000g，加水煎煮，濾過，濾液濃縮成清膏（干浸膏出膏率為2%～6%），加入輔料適量，干燥（或干燥，粉碎），再加入輔料適量，混勻，制粒，制成1000g，即得?！拘誀睢勘酒窞闇\灰色至灰褐色的顆粒；氣微，味淡?！捐b別】取本品1g，研細(xì)，加鹽酸10ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取蟬蛻對照藥材0.5g，加水30ml，煮沸30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣自“加鹽酸10ml”起，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2020年版通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶5）的上層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5%茚三酮乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。【特征圖譜】氨基酸照高效液相色譜法（中國藥典2020年版通則0512）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗同[含量測定]氨基酸項。參照物溶液的制備取[含量測定]氨基酸項下的對照品溶液，作為對照品參照物溶液。另取蘇氨酸對照品、酪氨酸對照品、纈氨酸對照品、L-異亮氨酸對照品適量，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1ml各含50μg的混合溶液，作為對照品參照物溶液。供試品溶液的制備同[含量測定]氨基酸項。精密量取上述參照物溶液和供試品溶液各5ml，分別置25ml量瓶中，各加0.1mol/L異硫氰酸苯酯（PITC）的乙腈溶液2.5ml和1mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml，搖勻，室溫放置1小時后，加50%乙腈至刻度，搖勻。取10ml，加正己烷10ml，振搖，放置10分鐘，取下層溶液，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取衍生化后的參照物溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。供試品溶液色譜中應(yīng)呈現(xiàn)8個特征峰，且8個峰應(yīng)分別與相應(yīng)對照品參照物峰保留時間相對應(yīng)。對照特征圖譜（氨基酸）峰1：甘氨酸；峰2：蘇氨酸；峰3：丙氨酸；峰4：脯氨酸；峰5：酪氨酸；峰6：纈氨酸峰7：L-異亮氨酸；峰8：苯丙氨酸參考色譜柱：Kromasil100-5C18；250mm×4.6mm，5μm其他照高效液相色譜法（中國藥典2020年版通則0512）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗同[含量測定]乙酰多巴胺二聚體項。參照物溶液的制備取蟬蛻對照藥材1g，加70%甲醇50ml，加熱回流30分鐘，放冷，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘4000轉(zhuǎn)）5分鐘，取上清液25ml置蒸發(fā)皿中，蒸干，殘渣加70%甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為對照藥材參照物溶液。另取原兒茶酸對照品、原兒茶醛對照品、乙酰多巴胺二聚體對照品適量，加50%甲醇制成每1ml含原兒茶酸20μg、原兒茶醛10μg、乙酰多巴胺二聚體15μg的混合溶液，作為對照品參照物溶液。供試品溶液的制備同[含量測定]乙酰多巴胺二聚體項。測定法分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各2μl，注入液相色譜儀，測定，即得。供試品溶液色譜中應(yīng)呈現(xiàn)6個特征峰，并應(yīng)與對照藥材參照物色譜中的6個特征峰保留時間相對應(yīng)，其中峰1、峰2、峰3應(yīng)分別與相應(yīng)對照品參照物峰保留時間相對應(yīng)，與乙酰多巴胺二聚體參照物相應(yīng)的峰為S峰，計算各特征峰與S峰的相對保留時間，其相對保留時間應(yīng)該在規(guī)定值的±10%之內(nèi)，規(guī)定值為：1.09（峰4）、1.20（峰5）、1.29（峰6）。峰1：原兒茶酸；峰2：原兒茶醛；峰3（S）：乙酰多巴胺二聚體；蟬蛻配方顆粒對照特征圖譜2參考色譜柱：SBC18；2.1mm×150mm，1.8μm【檢查】應(yīng)符合顆粒劑項下有關(guān)的各項規(guī)定（中國藥典2020年版通則0104）?！窘鑫铩咳”酒费屑?xì)，取約2g，精密稱定，精密加入乙醇100ml，照醇溶性浸出物測定法（中國藥典2020年版通則2201）項下的熱浸法測定，不得少于5.0%?！竞繙y定】氨基酸照高效液相色譜法（中國藥典2020年版通則0512）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（4:1）為流動相A，以乙腈-0.lmol/L醋酸鈉溶液（用醋酸調(diào)節(jié)pH值至6.5）的混合溶液(7:93)為流動相B；按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫；流速為每分鐘1.0ml；柱溫為30°C；檢測波長為254nm。理論板數(shù)按丙氨酸峰計算應(yīng)不低于4000。梯度洗脫表時間（分鐘）流動相A(%)流動相B(%)0~903100979~2239722~23317978323~321718838232~381830827038~453034706645~473410066047~551000對照品溶液的制備取甘氨酸對照品、丙氨酸對照品、脯氨酸對照品、苯丙氨酸對照品適量，精密稱定，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1ml含甘氨酸60μg、丙氨酸50μg、脯氨酸80μg、苯丙氨酸25μg的混合溶液。供試品溶液的制備取本品適量，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置氨基酸水解管中，精密加入6mol/L鹽酸溶液15ml，密塞，稱定重量，150℃水解3小時，取出，放冷，再稱定重量，用6mol/L鹽酸溶液補足減失重量，混勻，濾過，精密量取10ml濾液移蒸發(fā)皿中，蒸干，殘渣加0.1mol/L鹽酸溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，即得。精密量取上述對照品溶液和供試品溶液各5ml，分別置25ml量瓶中，各加0.1mol/L異硫氰酸苯酯（PITC）的乙腈溶液2.5ml、1mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml，搖勻，室溫放置1小時后，加50%乙腈至刻度，搖勻。取10ml，加正己烷10ml，振搖，放置10分鐘，取下層溶液，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取衍生化后的對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每1g含甘氨酸（C2H5NO2）應(yīng)為2.3mg~10.7mg、丙氨酸（C3H7NO2）應(yīng)為1.5mg~9.5mg、脯氨酸（C5H9NO2）應(yīng)為3.7mg~15.2mg、苯丙氨酸（C10H13NO2）應(yīng)為0.8mg~4.8mg。乙酰多巴胺二聚體照高效液相色譜法（中國藥典2020年版通則0512）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（柱長為150mm，內(nèi)徑為2.1mm，粒徑為1.6~1.8μm）；以乙腈為流動相A；以0.2%甲酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫；流速為每分鐘0.35ml；柱溫為35°C；檢測波長為280nm；理論板數(shù)按乙酰多巴胺二聚體峰計算應(yīng)不低于5000。梯度洗脫表時間（分鐘）流動相A（%）流動相B（%）0~76→894→927~108→1192→8910~2211→1589→8522~3215→2385→8732~3523→9087→1035~389010對照品溶液的制備取乙酰多巴胺二聚體對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液。供試品溶液的制備取本品適量，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率40kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘4000轉(zhuǎn)）5分鐘，取上清液25ml