干細胞1干細胞1鯊魚之齒1.鋒利：其咬食壓力每平方英寸高達18噸。2.多排：具有5—6排，最外排牙齒真正起到牙齒的功能，其余備用，一旦在最外一層的牙齒發(fā)生脫落時，里面一排的牙齒馬上就會向前面移動，用來補足取代脫落牙齒的空穴位置。3.形狀各異：如剃刀，可以用來切割食物；成鋸齒狀，可以用來撕扯食物；呈扁平臼狀，可以用來壓碎食物外殼和骨頭等。4.再生：鯊魚的牙齒可以無限制的增長和再生。據統(tǒng)計，一條鯊魚，在10年以內竟要換掉2萬余只牙齒。2鯊魚之齒2骨髓移植骨髓移植(Bonemarrowtransplantation)是各種血液腫瘤（白血病、惡性淋巴瘤）、再生不良性貧血癥、重度地中海型貧血癥以及一些先天性免疫缺乏癥或代謝性疾病救命的根本治療方法。骨髓干細胞通過分化生成各種血細胞如紅細胞、白細胞、血小板、淋巴細胞等。因此，骨髓對于維持機體的生命和免疫力非常重要。臍帶血庫臍帶血移植效果優(yōu)于骨髓：其干細胞含量更多，且較有可塑性，即使不是完全吻合，也可以移植到病患體內，而骨髓移植就需要完全吻合。

2007年《Pediatrics》報道：2004年美國一三歲女孩突患急性淋巴細胞性白血病。她以出生時保存的自體臍帶血造血干細胞進行了移植救治。兒童白血病自體臍血成功移植的全球首例。自1995年起，全世界已有40多個國家設立了各種性質的臍帶血血庫。3骨髓移植3一、定義干細胞是一類具有自我更新和分化潛能的細胞。二、分類不同的干細胞具有不同的分化潛能。從所具有的分化功能上講，可分為單能干細胞、多能干細胞與全能干細胞。從來源上講，干細胞包括成體干細胞和胚胎干細胞。15.1干細胞4一、定義15.1干細胞4二、干細胞的生物學特征自我更新特征：通過兩種方式生長：一種是對稱分裂，形成兩個相同的干細胞；另一種是非對稱分裂，一個保持親代細胞的特征，另一個走向分化的終端成為功能專一的分化細胞增殖特征：慢周期性：絕大多數細胞處于G0期自穩(wěn)性：通過自我更新維持自身數目的穩(wěn)定分化特征：能夠產生至少一種類型的高度分化的子代細胞。干細胞的功能為控制和維持細胞的再生。15.1干細胞5二、干細胞的生物學特征15.1干細胞5胚胎干細胞與成體干細胞來源分化潛能端粒酶的活性不同6胚胎干細胞與成體干細胞來源6一、基本概念胚胎干細胞簡稱ES細胞，它是從著床前胚胎內細胞團或原始生殖細胞經體外分化抑制培養(yǎng)分離的一種全能性細胞系，可以分化成任何一種組織類型的細胞。15.2胚胎干細胞7一、基本概念15.2胚胎干細胞7一、概念胚胎干細胞:是從著床前胚胎內細胞團或原始生殖細胞經體外分化抑制培養(yǎng)分離的一種全能性細胞。15.2胚胎干細胞8一、概念15.2胚胎干細胞8人類胚胎9人類胚胎9二、胚胎干細胞的特征形態(tài)特征體積小、核大，有一個或多個核仁；胚胎干細胞克隆緊密堆積，無明顯的界限，形似鳥巢。生化特征堿性磷酸酶呈強陽性；端粒酶活性高，具有長的端粒；表達早期胚胎細胞的階段特異性抗原。遺傳學特征染色體數目與核型與來源細胞保持一致。胚胎干細胞在體外不斷增殖且維持遺傳的穩(wěn)定性（正常的核型及端粒的長度）15.2胚胎干細胞10二、胚胎干細胞的特征形態(tài)特征15.2胚胎干細胞10三、胚胎干細胞分離

來源：囊胚期胚胎的內細胞團(→ES細胞)（主要途徑）；原始生殖細胞(→EG細胞)

；胚胎瘤細胞(→EC細胞)15.2胚胎干細胞11三、胚胎干細胞分離來源：15.2胚胎干細胞11四、胚胎干細胞的鑒定堿性磷酸酶活性：未分化的胚胎細胞中含有豐富的堿性磷酸酶，活性很高；而已經分化的胚胎干細胞中堿性磷酸酶呈現弱陽性或陰性。端粒酶活性：胚胎干細胞有著高水平的端粒酶活性，并具有長的端粒。干細胞標記物：胚胎干細胞為未分化細胞，能表達早期胚胎細胞的階段特異性胚胎抗原（SSEA）。15.2胚胎干細胞12四、胚胎干細胞的鑒定15.2胚胎干細胞12五、胚胎干細胞體外培養(yǎng)須滿足三個要求維持細胞增殖的能力維持正常二倍體核型維持細胞末分化狀態(tài)15.2胚胎干細胞13五、胚胎干細胞體外培養(yǎng)須滿足三個要求15.2胚胎干細胞1（一）培養(yǎng)基與消化液培養(yǎng)基：DMEM（高糖）+谷氨酰胺+15%胎牛血清+β-巰基乙醇消化液：較高濃度的胰蛋白酶和EDTA（二）飼養(yǎng)層細胞：

主要應用鼠胚原代成纖維細胞（PMEF）小鼠

胚胎成纖維細胞(STO)細胞作為飼養(yǎng)層細胞。飼養(yǎng)層細胞作用有二：提供物理支持；

分泌促進胚胎干細胞增生的成纖維生長因子（FGF）和抑制胚胎干細胞自主分化的白血病抑制因子（LIF）。五、胚胎干細胞體外培養(yǎng)14（一）培養(yǎng)基與消化液五、胚胎干細胞體外培養(yǎng)14生長在飼養(yǎng)層上的ES細胞15生長在飼養(yǎng)層上的ES細胞15（三）條件培養(yǎng)基與細胞因子無飼養(yǎng)層細胞：基礎培養(yǎng)基加入LIF、bFGF、干細胞因子制備成條件培養(yǎng)基。保證胚胎干細胞增殖的同時維持未分化的二倍體狀態(tài)。五、胚胎干細胞體外培養(yǎng)16（三）條件培養(yǎng)基與細胞因子五、胚胎干細胞體外培養(yǎng)16（四）胚胎干細胞體外培養(yǎng)的步驟（流程）

①內細胞團獲得：從著床前胚胎或體外培養(yǎng)的早期胚胎分離內細胞團,經消化并分散細胞團。②原代培養(yǎng)：將內細胞團細胞接種在飼養(yǎng)層細胞上培養(yǎng)。③傳代培養(yǎng)：采用胰蛋白酶消化，選擇未分化克隆接種于新的飼養(yǎng)層上或條件培養(yǎng)基中進行分化抑制培養(yǎng)。④干細胞鑒定與分化潛能評價五、胚胎干細胞體外培養(yǎng)17（四）胚胎干細胞體外培養(yǎng)的步驟（流程）五、胚胎干細胞體外培（一）誘導分化方法1）細胞因子誘導法2）選擇性標記基因篩選目的細胞法3）特異性轉錄因子異位表達法六、胚胎干細胞體外誘導分化18（一）誘導分化方法1）細胞因子誘導法六、胚胎干細胞體外誘導（二）可能的應用

1、組織或器官修復胚胎干細胞最激動人心的潛在應用是用來修復甚至替換喪失功能的組織和器官，因為它具有發(fā)育分化為所有類型組織細胞的能力。任何涉及喪失正常細胞的疾病都可以通過移植由胚胎干細胞分化而來的特異組織細胞來治療。2、基因治療干細胞是基因治療的較理想的靶細胞，因為它可以自我復制更新，治療基因通過它帶入人體中，能夠持久地發(fā)揮作用。而不必擔心像分化的細胞那樣，在細胞更新中可能丟失治療基因。19（二）可能的應用

1、組織或器官修復胚胎干細胞最激動人心的潛（四）存在問題如何維持胚胎干細胞未分化狀態(tài)的機制雖然人胚胎干細胞可以形成各種類型的細胞和簡單的組織，但是其是否具有形成復雜器官的能力目前還遠未清楚。來源于胚胎干細胞的細胞應用于細胞和組織替代治療所面臨的移植排斥問題干細胞用于臨床治療的安全性問題，對于胚胎干細胞而言，在移植前應該保證胚胎干細胞全部被誘導分化，對誘導分化的細胞應該嚴格純化20（四）存在問題如何維持胚胎干細胞未分化狀態(tài)的機制20

一、概念與特點概念：成體干細胞是是成體組織內具有更新和進一步分化潛能的細胞二、基本特點為多能或單能干細胞存在于機體的各種組織器官中，數量少。能夠自我更新并且能夠分化形成組成該類型組織的細胞。體外培養(yǎng)時不能長時間增殖。具有可塑性。15.3成體干細胞21

一、概念與特點15.3成體干細胞21二、具體應用舉例

神經干細胞理論上講，任何一種中樞神經系統(tǒng)疾病都可歸結為神經干細胞功能的紊亂。給帕金森氏綜合癥患者的腦內移植含有多巴胺生成細胞的神經干細胞，可治愈部分患者癥狀。神經干細胞治療阿爾茨海默病和亨頓舞蹈病。15.3成體干細胞22二、具體應用舉例

神經干細胞理論上講，任何一種中樞神經系統(tǒng)造血干細胞造血干細胞是體內各種血細胞的唯一來源，它主要存在于骨髓、臍帶血中。造血干細胞的移植是治療血液系統(tǒng)疾病、先天性遺傳疾病以及多發(fā)性和轉移性惡性腫瘤疾病的有效方法。23造血干細胞造血干細胞是體內各種血細胞的唯一來源，它主要存在于間充質干細胞（MSC）存在于骨髓中，是一群具有向骨、軟骨、肌肉及肌腱、韌帶、脂肪、和血管內皮、肝、神經、皮膚等多種組織分化潛能的性質均一的細胞.MSC可用為組織工程的首選“種子”細胞：取材方便，對機體無害；取自自體，不存在組織配型及免疫排斥；體外能很好地擴增；分化的組織類型廣泛。24間充質干細胞（MSC）存在于骨髓中，是一群具有向骨、軟骨、肌MSC是基因治療的理想的靶細胞：易于獲得，并具有體外長期培養(yǎng)的遺傳的穩(wěn)定性和可移植性；外源基因易于植入，并或整合到MSC的基因組中穩(wěn)定表達面不影響其干細胞特性；25MSC是基因治療的理想的靶細胞：25三、問題分析成體干細胞優(yōu)點（1）來源方便：可以從自身獲得。（2）沒有倫理學問題：成體干細胞來自成熟個體，不會損傷供體。（3）避免免疫排斥反應：同種異體胚胎干細胞及其分化細胞用于臨床會引起免疫排斥。采取自身供體細胞核通過治療性克隆可以得到自身胚胎干細胞。（4）比較安全：雖然胚胎干細胞能分化成各種細胞類型，但目前還不能完全控制胚胎干細胞的定向分化，容易導致畸胎瘤。相對而言，成體干細胞比較安全。26三、問題分析成體干細胞優(yōu)點26問題（1）成體干細胞在組織中含量極少，又缺乏特異性檢測標志，很難從組織中分離純化出來。（2）成體干細胞的可塑性機制還不清楚。（3）有待建立有效的使成體干細胞在體外增殖而又能維持未分化狀態(tài)的技術。（4）成體干細胞體外長期傳代后會發(fā)生表型的改變，且成體干細胞也參與腫瘤的形成。27問題（1）成體干細胞在組織中含量極少，又缺乏特異性檢測標志，干細胞美容：世界在試驗中國已瘋狂