法醫(yī)物證學(xué)法醫(yī)物證學(xué)

法醫(yī)物證學(xué)以法醫(yī)物證為研究對(duì)象，以提供科學(xué)證據(jù)為目的，應(yīng)用生命科學(xué)技術(shù)解決案件中與人體有關(guān)的生物檢材鑒定的一門學(xué)科。法醫(yī)物證學(xué)以法醫(yī)物證為研究對(duì)象，以提供科學(xué)證據(jù)物證（materialevidence）：對(duì)案件的真實(shí)情況有證明作用的物品或痕跡。法醫(yī)物證：主要指與人體有關(guān)的生物性檢材。包括人體組織與器官、體液、分泌物、排泄物及由它們形成的斑痕，如血液、精液、唾液、骨骼、牙齒、毛發(fā)、肌肉、皮膚、粘膜等。物證檢驗(yàn)（examinationofmaterialevidence）：為了偵破或?qū)徖戆讣?，?duì)與案件有關(guān)的物證進(jìn)行檢驗(yàn)鑒定的過程。物證（materialevidence）：對(duì)案件的真實(shí)情況法醫(yī)物證的特點(diǎn)法醫(yī)物證的穩(wěn)定性受環(huán)境影響法醫(yī)物證屬于“科學(xué)證據(jù)”--是查明案件事實(shí)的依據(jù)（案件重現(xiàn)）--是審查其他證據(jù)的手段（客觀、可靠、邏輯性）法醫(yī)物證的特點(diǎn)法醫(yī)物證的穩(wěn)定性受環(huán)境影響“物證不怕恫嚇，物證不會(huì)遺忘，物證不會(huì)受外界影響而情緒激動(dòng)?！趯徟羞^程中，被告人會(huì)說謊，證人會(huì)說謊，辯護(hù)律師和檢查官會(huì)說謊，甚至法官也會(huì)說謊，惟有物證不會(huì)說謊。”(美)郝伯特?麥克唐奈讓證據(jù)說話。(美)李昌鈺“物證不怕恫嚇，物證不會(huì)遺忘，物證不會(huì)受外界影響而情緒激動(dòng)。法醫(yī)物證學(xué)的基本任務(wù)：個(gè)人識(shí)別（personalidentification）:

刑事案件的痕跡、強(qiáng)奸輪奸的精斑、交通事故的責(zé)任認(rèn)定、災(zāi)難事故（空難、海嘯、地震、火災(zāi)等個(gè)體確認(rèn)）親子鑒定（Paternitytesting)：

血緣關(guān)系（私生、錯(cuò)調(diào)、拐騙、財(cái)產(chǎn)繼承、移民等）法醫(yī)物證學(xué)的基本任務(wù)：個(gè)人識(shí)別（personaliden親子鑒定

Paternitytesting親子鑒定

Paternitytesting法醫(yī)物證學(xué)--課件“親子鑒定熱”摧毀家庭的基石造福人類還是戕害家庭？親子鑒定殺死了中國人的家庭忠誠“親子鑒定”折射家庭信任危機(jī)親子鑒定拷問“真實(shí)的謊言”親子鑒定有什么錯(cuò)“親子鑒定熱”摧毀家庭的基石造福人類還是戕害家庭？親子鑒定親權(quán)鑒定（indentificationindisputedpatermity）：是指應(yīng)用醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、和人類學(xué)的方法檢測遺傳標(biāo)記，并依據(jù)遺傳學(xué)理論進(jìn)行分析，從而對(duì)被檢者之間是否存在生物學(xué)親緣關(guān)系所作的科學(xué)判定。親子鑒定：判斷父母與子女之間是否存在生物學(xué)親緣關(guān)系，稱為親子鑒定。父權(quán)鑒定：在親子鑒定中，母子關(guān)系確定，要求判斷爭議父親和子女間是否存在親子關(guān)系。親權(quán)鑒定（indentificationindisp滴血認(rèn)親三國：滴骨驗(yàn)親明代：合血法電視劇《洗冤錄》中滴骨驗(yàn)親劇照電影《九品芝麻官》中滴血認(rèn)親劇照滴血認(rèn)親電視劇《洗冤錄》中滴骨驗(yàn)親劇照電影《九品芝麻官》中滴1920年，歐洲將血型用于親子鑒定1935年，美國開始親子鑒定1985年，PCR技術(shù)發(fā)明/使親子鑒定從排除走向認(rèn)定基于PCR的STR分型已成為非常成熟的技術(shù)手段，商業(yè)化試劑盒的開發(fā)和自動(dòng)測序儀的應(yīng)用，結(jié)果科學(xué)可靠。1920年，歐洲將血型用于親子鑒定親子鑒定類型涉及民事糾紛涉及刑事案件涉及行政事務(wù)子女撫養(yǎng)、財(cái)產(chǎn)繼承懷疑產(chǎn)院調(diào)錯(cuò)嬰兒強(qiáng)奸致孕案的生父確認(rèn)碎尸案的身源認(rèn)定殺嬰或拐賣兒童案孩子身源認(rèn)定移民涉外公證失散親人親緣關(guān)系認(rèn)定計(jì)劃外生育責(zé)任人確認(rèn)或上戶口親子鑒定類型涉及民事糾紛涉及刑事案件涉及行政事務(wù)子女撫養(yǎng)、財(cái)親子鑒定的依據(jù)親子鑒定的依據(jù)

遺傳性狀：生物體表現(xiàn)的一切形態(tài)特征、生理特征和代謝類型的統(tǒng)稱。單位性狀：其中可檢測的、由遺傳決定的特征，并能夠按預(yù)期的方式從一代遺傳給下一代的性狀，在遺傳學(xué)上稱為單位性狀。遺傳標(biāo)記（geneticmarker)：這種具有相對(duì)差異的單位性狀作為標(biāo)志來識(shí)別攜帶它的個(gè)體、細(xì)胞和染色體‘或用以研究細(xì)胞、個(gè)體、家系、群體的遺傳方式時(shí)稱為遺傳標(biāo)記。遺傳性狀：生物體表現(xiàn)的一切形態(tài)特征、生理特征和代謝類型的遺傳標(biāo)記的傳遞遵循孟德爾遺傳規(guī)律：①同基因座等位基因在配子形成過程中彼此分離，分別進(jìn)入各自的配子細(xì)胞（分離律）；②不同基因座等位基因在配子形成過程中，可分可合，隨機(jī)組合進(jìn)入同一配子細(xì)胞（自由組合律）。遺傳標(biāo)記的傳遞遵循孟德爾遺傳規(guī)律：紅細(xì)胞型、白細(xì)胞型、血小板型基因產(chǎn)物水平遺傳標(biāo)記DNA水平遺傳標(biāo)記血液細(xì)胞表面的遺傳標(biāo)記血液蛋白質(zhì)的遺傳標(biāo)記紅細(xì)胞酶型、血清酶型、血清型長度多態(tài)性序列多態(tài)性RFLP，VNTR，STR

SNP、mtDNA遺傳標(biāo)記分類紅細(xì)胞型、白細(xì)胞型、血小板型基因產(chǎn)物水平遺傳標(biāo)記DNA水平遺用于親權(quán)鑒定的遺傳標(biāo)記的要求遺傳方式明確遺傳標(biāo)記的分型終身不變，具有體細(xì)胞的穩(wěn)定性和遺傳的穩(wěn)定性檢測方法穩(wěn)定,不同實(shí)驗(yàn)室、不同批次的結(jié)果相同具有遺傳多態(tài)性用于親權(quán)鑒定的遺傳標(biāo)記的要求遺傳方式明確基因產(chǎn)物水平遺傳標(biāo)記的局限性為基因編碼產(chǎn)物，多態(tài)信息容量小，應(yīng)用價(jià)值有限在基因表達(dá)過程中受許多因素影響，不能正確反映DNA多態(tài)性情況某些血型系統(tǒng)存在生理性變異和病理性變異，使判型錯(cuò)誤易受環(huán)境中各種理化因素影響而失活，檢材難以保存檢測方法多樣、復(fù)雜，技術(shù)、人為誤差較大基因產(chǎn)物水平遺傳標(biāo)記的局限性為基因編碼產(chǎn)物，多態(tài)信息容量小，DNA遺傳標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)⑴遺傳標(biāo)記多，信息量大。

DNA多態(tài)性標(biāo)記在生物體內(nèi)的分布遠(yuǎn)多于蛋白質(zhì)標(biāo)記,標(biāo)記多態(tài)性程度大大超過蛋白質(zhì)標(biāo)記。僅分析其中的少部分遺傳標(biāo)記就完全可以直接進(jìn)行個(gè)體同一認(rèn)定與親子鑒定,具有非常高的識(shí)別率和鑒定能力。

⑵標(biāo)記的遺傳類型全。有按孟德爾分離和自由組合律遺傳的常染色體遺傳標(biāo)記

,也有只父系遺傳的Y染色體的遺傳標(biāo)記和母系遺傳的線粒體DNA序列差異。利用DNA遺傳標(biāo)記可以進(jìn)行幾代甚至隔代、多代的血緣關(guān)系的鑒定。

DNA遺傳標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)⑴遺傳標(biāo)記多，信息量大。DNA遺傳標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)⑶可分析的物證種類多，存在比較廣泛。凡是含有細(xì)胞的生物材料均能進(jìn)行DNA分析，這類物質(zhì)可在很多種案件中提取到。具有檢材的多樣性與應(yīng)用的廣泛性。⑷對(duì)于自然環(huán)境具有相對(duì)比較高的穩(wěn)定性。

DNA遺傳標(biāo)記相對(duì)穩(wěn)定，保存幾十年的血痕、精斑仍可以進(jìn)行DNA分析,甚至歷時(shí)數(shù)千年的木乃伊也可以獲得含有一定遺傳信息的結(jié)果。DNA遺傳標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)⑶可分析的物證種類多，存在比較廣泛。⑸方法靈敏,檢材用量少。當(dāng)前的主流技術(shù)都是以PCR技術(shù)為基礎(chǔ),具有比較高的靈敏度，理論上一個(gè)細(xì)胞的DNA即可分析。實(shí)際應(yīng)用中，靈敏度為ng級(jí)DNA,只需很少的檢材，即可獲得檢驗(yàn)結(jié)果。⑹同一個(gè)體物證具有比對(duì)的通用性。同一個(gè)體的各種組織DNA具有相同的序列特征，即個(gè)體組織的同一性，可以用同一個(gè)體的任一部分組織或體液得到該個(gè)體的相同的全部信息，進(jìn)行比對(duì)和鑒定，而不必一定要采用相同的組織。

⑺自動(dòng)化程度高，速度快。

⑻可以建立數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行查檔比對(duì)，檢索破案。DNA遺傳標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)⑸方法靈敏,檢材用量少。DNA遺傳標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)DNA標(biāo)記的發(fā)展1980：White首次描述限制片段長度多態(tài)性(RFLP)標(biāo)記1985：Jeffreys發(fā)現(xiàn)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)(VNTR)1985：聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)第一篇論文發(fā)表1988：FBI開始利用DNA分析協(xié)助辦案1991：短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)第一篇論文發(fā)表1995：英國開始建立DNA數(shù)據(jù)庫1998：美國啟動(dòng)CODIS（DNA檢索系統(tǒng)）數(shù)據(jù)庫2001：人類基因組計(jì)劃HGP完成/同時(shí)發(fā)現(xiàn)300萬SNP……DNA標(biāo)記的發(fā)展1980：White首次描述限制片段長度多態(tài)即DNA的結(jié)構(gòu)在不同的個(gè)體或等位基因之間存在差異。其本質(zhì)就是由于進(jìn)化過程中各種原因引起染色體DNA中核苷酸排列順序發(fā)生了改變/即產(chǎn)生的DNA片段和DNA序列在個(gè)體間的差異。長度多態(tài)性序列多態(tài)性DNA多態(tài)性即DNA的結(jié)構(gòu)在不同的個(gè)體或等位基因之間存在差異。其1.DNA長度多態(tài)性(DNAlengthpolymorphisms)

人類基因組DNA長3×109bp，編碼基因序列約占不到5%，非編碼序列包括間隔序列，基因調(diào)控序列，基因內(nèi)含子等。基因組DNA中大約10%是串聯(lián)重復(fù)（tandemrepeats）DNA，結(jié)構(gòu)形式是以一個(gè)序列相對(duì)恒定的DNA片段構(gòu)成核心序列（coresequence），作為重復(fù)單位，首尾相接，串聯(lián)重復(fù)。這種特殊的串聯(lián)重復(fù)序列叫作：衛(wèi)星DNA

(satelliteDNA)。………CGATCGATCGATCGATCGATCGAT…….1.DNA長度多態(tài)性(DNAlengthpolymo

⑴衛(wèi)星DNA分類：按照核心序列的堿基結(jié)構(gòu)特征，衛(wèi)星DNA分為：●大衛(wèi)星(macrosatelliteDNA)●小衛(wèi)星(minisatelliteDNA)●微衛(wèi)星(microsatelliteDNA)DNA長度遺傳標(biāo)記主要位于小衛(wèi)星和微衛(wèi)星DNA序列中。⑴衛(wèi)星DNA分類：小衛(wèi)星和微衛(wèi)星

小衛(wèi)星和微衛(wèi)星是依據(jù)核心序列的長度人為的分類。小衛(wèi)星重復(fù)單位：15~30bp，重復(fù)次數(shù)數(shù)次至數(shù)百次；微衛(wèi)星重復(fù)單位：2~6bp，重復(fù)次數(shù)至數(shù)十次。小衛(wèi)星和微衛(wèi)星是DNA長度多態(tài)性的主要序特征性序列。小衛(wèi)星和微衛(wèi)星⑵可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列

小衛(wèi)星和微衛(wèi)星都具有特定的基因座位，其中部分衛(wèi)星DNA序列，因不同個(gè)體、不同等位基因之間，重復(fù)單位的串聯(lián)重復(fù)的次數(shù)不同形成了DNA片段長度差異，稱作可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列（variablenumberoftandemrepeats,VNTR），VNTR序列大約占一半左右，是構(gòu)成DNA片段長度多態(tài)性的主要原因。⑵可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列DNA長度多態(tài)性DNA長度多態(tài)性法醫(yī)物證學(xué)--課件法醫(yī)物證學(xué)--課件

小衛(wèi)星序列都位于基因組高變區(qū)，是基因組中的重組熱點(diǎn)。其中VNTR序列呈現(xiàn)極其復(fù)雜的長度多態(tài)性。例如：某小衛(wèi)星VNTR座位重復(fù)單位17bp，重復(fù)次數(shù)70～450次則最短的基因長：17bp×70＝1190bp

最長的基因有：17bp×450＝7650bp小衛(wèi)星序列都位于基因組高變區(qū)，是基因組中的重

早期的法醫(yī)DNA分型是針對(duì)小衛(wèi)星靶序列，應(yīng)用限制性片段長度多態(tài)性（restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP）分析，RFLP圖譜具有高度個(gè)體特異性，被稱為DNAfingerprint。以小衛(wèi)星核心序列為探針，對(duì)人類基因組DNA作RFLP分析，顯示圖譜類似超市商品條碼，由10~30條譜帶組成，不同個(gè)體間，譜帶數(shù)目不同，譜帶的位置不同。人群中隨機(jī)兩個(gè)體的DNA指紋完全相同的幾率為10-12~10-19。法醫(yī)物證鑒定：①從蛋白質(zhì)水平進(jìn)入DNA水平

②實(shí)現(xiàn)從否定到認(rèn)定的飛躍早期的法醫(yī)DNA分型是針對(duì)小衛(wèi)星靶序列，應(yīng)用限法醫(yī)物證學(xué)--課件1，2，4，5，6，7：均為隨機(jī)個(gè)體。3為兇器上血痕。與現(xiàn)場收集的血痕的DNA指紋一致。351，2，4，5，6，7：均為隨機(jī)個(gè)體。35

微衛(wèi)星：

DNA重復(fù)單位2~6bp,重復(fù)次數(shù)10~30次，又稱短串聯(lián)重復(fù)序列

(shorttandemrepeats，STR)

>30,000個(gè)每10kb存在一個(gè)STR位點(diǎn)擴(kuò)增片段為100-400bp微衛(wèi)星：重復(fù)單位的長度2CA3AAT4AGAT5AAAGA二核苷三核苷四核苷五核苷重復(fù)單位的長度2CA3AAT4AGAT5AAAGA二核苷三核法醫(yī)學(xué)上使用四核苷酸重復(fù)序列

二、三核苷酸重復(fù)序列會(huì)出現(xiàn)非特異性PCR產(chǎn)物三核苷酸重復(fù)序列與疾病有關(guān)四核苷酸重復(fù)序列位點(diǎn)比二、三核苷酸重復(fù)序列的等位基因更容易彼此區(qū)分法醫(yī)學(xué)上使用四核苷酸重復(fù)序列

二、三核苷酸重復(fù)序列會(huì)出現(xiàn)非（3）STR分型基本技術(shù)

PCR-STR分型技術(shù)：①參照STR重復(fù)序列的側(cè)翼序列設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增STR片段長度等位基因。②擴(kuò)增產(chǎn)物用聚丙烯酰胺(polyacrylamidegel，PAG)凝膠電泳分離，③不同長度等位基因按重復(fù)次數(shù)(allelicladder)參照,以重復(fù)次數(shù)命名等位基因。

▲銀染技術(shù)，電泳分離后用銀染顯帶。

（3）STR分型基本技術(shù)法醫(yī)物證學(xué)--課件

▲

熒光標(biāo)記PCR引物，擴(kuò)增產(chǎn)物攜帶熒光，毛細(xì)管電泳，然后利用激光激發(fā)熒光顯色基團(tuán)，檢測儀自動(dòng)記錄熒光波長和遷移率(由genotyper軟件)自動(dòng)分型。不同熒光標(biāo)記引物，致等位基因擴(kuò)增產(chǎn)物攜帶有熒光示蹤基團(tuán)，按不同波長區(qū)分基因座。在毛細(xì)管電泳中，記錄電泳加樣點(diǎn)至檢測窗口的時(shí)間，遷移時(shí)間表示片段長度。▲熒光標(biāo)記PCR引物，擴(kuò)增產(chǎn)物攜帶法醫(yī)物證學(xué)--課件法醫(yī)物證學(xué)--課件三個(gè)樣本的等位基因分型圖三個(gè)樣本的等位基因分型圖PCR-STR分型的技術(shù)優(yōu)勢：

1高靈敏度，利用PCR的高靈敏度特征，理論上單個(gè)細(xì)胞的DNA可以擴(kuò)增出靶DNA片段。目前法醫(yī)學(xué)鑒定的靈敏度達(dá)到ng級(jí)DNA水平。

2高特異性，針對(duì)靶基因座側(cè)翼序列設(shè)計(jì)的PCR引物，引物的特異性決定了擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性。PCR-STR分型的技術(shù)優(yōu)勢：

3等位基因片段長度多在300bp以下，適用于腐敗、降解、陳舊法醫(yī)檢材。

4種屬特異性好，引物具有人的種屬特異性，材料中混合有動(dòng)物血痕，不影響人血的STR分析。

5復(fù)合擴(kuò)增，提高單次檢測的信息量，常規(guī)使用10-16個(gè)STR基因座，識(shí)別能力達(dá)到DNA指紋的鑒別水平。

6實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化的分型，加上計(jì)算機(jī)技術(shù)輔助，建立全國范圍的罪犯DNA數(shù)據(jù)庫成為現(xiàn)實(shí)。3等位基因片段長度多在300bp以下，適用于腐敗、降解、2.DNA序列多態(tài)性

在基因組特定的基因座位，等位基因的堿基序列差異構(gòu)成的多態(tài)性叫作序列多態(tài)性(sequencepolymorphism)。序列多態(tài)性形成的主要原因是點(diǎn)突變。在同基因座位上，因?yàn)閴A基的替換構(gòu)成不同等位基因的序列差異?？梢猿霈F(xiàn)在編碼區(qū)，也可以出現(xiàn)在非編碼區(qū)。2.DNA序列多態(tài)性總體思路

檢測遺傳標(biāo)記的表型否符合相應(yīng)遺傳規(guī)律，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算，判斷血緣關(guān)系?？傮w思路檢測遺傳標(biāo)記的表型否符合相應(yīng)遺傳規(guī)律DNA核DNA線粒體DNA常染色體性染色體X染色體Y染色體父系遺傳母系遺傳22對(duì)/孟德爾DNA類型奶→父→孫女DNA核DNA線粒體DNA常染色體性染色體X染色體Y染色體父核DNA與線粒體DNA核DNA與線粒體DNA人類線粒體DNA（mitochondrialDNA）

mtDNA是唯一的核外DNA，呈環(huán)狀裸露的雙股螺旋結(jié)構(gòu)，分重鏈(H)和輕鏈(L)，長度16569bp，編碼37個(gè)與氧化磷酸化相關(guān)的蛋白質(zhì)和RNA。其中有5%~7%的序列為非編碼區(qū)，成為控制區(qū)（controlregion），長度大約1100bp。在控制區(qū)堿基序列處于高度變異狀態(tài)。大約2/3的堿基有變異，大約90%為轉(zhuǎn)換，10%為顛換。人類線粒體DNA（mitochondrialDNA）521.線粒體存在于所有組織的細(xì)胞中，無組織特異性；2.為多拷貝基因組，其含量占總DNA的0.5%；3.結(jié)構(gòu)為共價(jià)、閉合、環(huán)狀，分子量在幾百kb以下4.呈現(xiàn)嚴(yán)格的母系遺傳；線粒體DNA的遺傳特征521.線粒體存在于所有組織的細(xì)胞中，無組織特異性；線粒體D動(dòng)物線粒體遺傳方式在動(dòng)物受精過程，精子尾鞘攜帶的大量線粒體不能進(jìn)入卵子內(nèi)，精子頭部所攜帶的線粒體雖然能夠進(jìn)入卵子，但數(shù)量極少。小鼠精子大約將50個(gè)父本mtDNA分子帶進(jìn)卵子，但卵子中原有的mtDNA分子大約為105個(gè)，約占受精卵中mtDNA總量的99.9%。因此mtDNA表現(xiàn)為母系遺傳。53動(dòng)物線粒體遺傳方式在動(dòng)物受精過程，精子尾鞘攜帶的一、親子鑒定案件親子鑒定是法醫(yī)DNA分析應(yīng)用的一個(gè)重要領(lǐng)域，隨著技術(shù)與經(jīng)濟(jì)展，越來越多的案件涉及到親子鑒定，親子鑒定的案件大致有:①丈夫懷疑孩子非親生。

②非婚生育，男方懷疑孩子非親生或女方想搞清孩子的生父究竟是誰。

③強(qiáng)奸致孕，女方指控某男為孩子生父等。

④認(rèn)親、移民、繼承財(cái)產(chǎn)、上戶口。

⑤懷疑產(chǎn)房或育嬰室調(diào)錯(cuò)嬰兒。

⑥計(jì)劃生育確認(rèn)孩子是否為該對(duì)夫婦所超生或領(lǐng)養(yǎng)。

⑦被拐騙兒童或失散家庭成員的確認(rèn)。

⑧尸體（碎尸塊、尸骨等）身份（尸源）確定。

⑨需確定現(xiàn)場物證或犯罪嫌疑人衣服或家里斑跡是否為受害人所留，但受害人DNA已被銷毀，無法得到；或如進(jìn)行強(qiáng)奸案件中精斑同一認(rèn)定，但嫌疑人在逃，通過親子鑒定確認(rèn)精斑是否為嫌疑人所留。54一、親子鑒定案件54三聯(lián)體：母-子（兒子或女兒，下同）-男三方均參加檢驗(yàn)的情況。這樣的鑒定為雙親檢驗(yàn)。真三聯(lián)體：真實(shí)存在的母-子-父關(guān)系的三聯(lián)體。假三聯(lián)體：不存在母-子-父關(guān)系的三聯(lián)體。

其中被檢驗(yàn)的男子稱為假設(shè)父親或被告父親。如果父母均需要確定的,則稱被檢驗(yàn)的某男、某女為假設(shè)父親和假設(shè)母親,亦屬于雙親檢驗(yàn)。

三聯(lián)體：母-子（兒子或女兒，下同）-男三方均參加檢驗(yàn)的二聯(lián)體：當(dāng)受檢者僅為假設(shè)父或假設(shè)母和孩子二方時(shí)，稱二聯(lián)體。單親檢驗(yàn)：只有父母一方的二聯(lián)體的親子鑒定。反轉(zhuǎn)親子鑒定：指父母已確定，檢驗(yàn)孩子是否為他們親生的親子鑒定，主要見于失蹤者（活體、尸體）的身份確定。

二聯(lián)體：當(dāng)受檢者僅為假設(shè)父或假設(shè)母和孩子二方時(shí)，稱二聯(lián)體。親子鑒定原理

親子鑒定的基本原理有以下兩點(diǎn)：

①在肯定孩子的某個(gè)等位基因是來自生父，而被控父親（AF）并不帶有這個(gè)基因的情況下，可以排除他是孩子的生父。檢查的遺傳標(biāo)記越多，非生物學(xué)父親被排除的概率就越大。

②在肯定孩子的某些等位基因是來自生父，而AF也帶有這些基因的情況下，不能排除他是孩子的生父。這時(shí)可以計(jì)算如果判斷他是孩子生父，理論上的把握度究竟有多大。親子鑒定原理親子鑒定的基本原理有以下兩點(diǎn)：在肯定孩子的某一遺傳基因必然來自生父（生父基因obligatorygene/OG）/而假設(shè)父（allegedfather/AF）不帶有這個(gè)基因時(shí)/可以排除他是孩子的生父。14/1513/1715/17否定親生MAF在肯定孩子的某一遺傳基因必然來自生父（生父基因obligat在肯定孩子的某一遺傳基因必然來自生父/而AF也帶有這個(gè)基因時(shí)/不能排除他是孩子的生父/這時(shí)可以計(jì)算他與孩子具有親生關(guān)系的相對(duì)機(jī)會(huì)有多大。13/1513/1715/17不排除親生肯定親生？×MAF59在肯定孩子的某一遺傳基因必然來自生父/而AF也帶有這個(gè)基因時(shí)

在一個(gè)家庭中，遺傳規(guī)律可概括為：

①孩子不可能帶有雙親均無的等位基因。

②孩子必定得到雙親各方的一對(duì)等位基因中的一個(gè)。

③除了在雙親都帶有相同基因（如A）的情況下，孩子不可能有兩個(gè)相同基因（AA）。

④某個(gè)基因在雙親中的一方或雙方為純合子時(shí)（AA），必定要在孩子中表現(xiàn)出來（A）。

⑤對(duì)于父系遺傳的Y-染色體的標(biāo)記，子代的分型必定與父親的分型一致，而且同一父系的所有個(gè)體的分型一致。

⑥對(duì)于母系遺傳的線粒體DNA，子代的分型必定與母親的分型一致，而且同一母系的所有個(gè)體的分型一致。雙等位基因遺傳標(biāo)記親子鑒定的基本遺傳原理可以推廣到多個(gè)等位基因的遺傳標(biāo)記，如STR系統(tǒng)。

在一個(gè)家庭中，遺傳規(guī)律可概括為：否定父權(quán)

一、排除親子關(guān)系排除親子關(guān)系可以歸納為如下兩種情況：

①孩子帶有母親和AF雙方都沒有的一個(gè)基因。

②孩子沒有AF必定要傳遞給其后代的一個(gè)基因。根據(jù)親子鑒定原理，AF與孩子在一個(gè)遺傳標(biāo)記上不符合遺傳規(guī)律即可以排除其父子關(guān)系，但由于突變的存在，一個(gè)不符合遺傳規(guī)律，可能是由于突變造成的，而且有文獻(xiàn)報(bào)道在真實(shí)的家系中存在兩個(gè)遺傳標(biāo)記的突變。因此，一個(gè)遺傳標(biāo)記的不符合不能否定其親子關(guān)系，要求在2個(gè)以上不同基因座同時(shí)不符合才能否定其親子關(guān)系。

否定父權(quán)一、排除親子關(guān)系錯(cuò)誤否定父權(quán)的風(fēng)險(xiǎn)

測試的遺傳標(biāo)記增多，遇到遺傳變異的可能性也增加。遺傳變異使親子之間的遺傳關(guān)系呈現(xiàn)為不符合遺傳規(guī)律。如果缺乏這方面的知識(shí)，容易錯(cuò)誤否定父權(quán)。

遺傳變異主要有：基因突變、沉默基因、替代等位基因、基因缺失、血型變異、基因互換、弱抗原、嵌合體、鑲嵌抗原、生理與病理性變異等。盡管遇到遺傳變異的概率很低，但為了避免潛在遺傳變異的影響，排除父權(quán)至少應(yīng)根據(jù)兩個(gè)以上遺傳標(biāo)記。錯(cuò)誤否定父權(quán)的風(fēng)險(xiǎn)測試的遺傳標(biāo)突變率

基因突變：減數(shù)分裂過程中，存在有基因的交換與重組，或由于某些因素的作用，導(dǎo)致基因的核苷酸順序發(fā)生改變。突變是導(dǎo)致親代與子代的遺傳標(biāo)記不符合遺傳規(guī)律的重要原因。突變可能會(huì)影響到親子鑒定結(jié)果的正確性，從而對(duì)案件的偵破與審判產(chǎn)生誤導(dǎo)。因此在親子鑒定中，應(yīng)選取那些突變率低的遺傳標(biāo)記。

突變率：是指每代細(xì)胞發(fā)生突變的百分率，是評(píng)估遺傳標(biāo)記穩(wěn)定性與親子鑒定可靠性的指標(biāo)。

突變率基因突變：減數(shù)分裂過程中，存在有基因的

為了避免因遺傳標(biāo)記的突變而錯(cuò)誤地排除親子關(guān)系，法醫(yī)學(xué)親子鑒定所選用的遺傳標(biāo)記必須經(jīng)家系調(diào)查，且至少觀察500次減數(shù)分裂，選用的遺傳標(biāo)記突變率應(yīng)低于0.2％。

為了避免因遺傳標(biāo)記的突變而錯(cuò)誤地排除親子關(guān)系，法防止錯(cuò)誤否定父權(quán)的方法

由于突變或其他因素的存在，國際上對(duì)親子鑒定的排除提出一些建議，主要是：

①、只有一個(gè)遺傳標(biāo)記不符合遺傳規(guī)律，不能輕易作出排除結(jié)論，必須加測其他系統(tǒng)。

②、2個(gè)STR基因座或同一染色體上的兩個(gè)遺傳標(biāo)記不符合遺傳規(guī)律，需慎重對(duì)待，宜加測遺傳標(biāo)記后再具體分析。

③、有3個(gè)及以上獨(dú)立遺傳關(guān)系（非連鎖）的遺傳標(biāo)記不符合遺傳規(guī)律，則可作出排除親子關(guān)系的結(jié)論。

④、如果只檢測STR基因座，一般需檢測16個(gè)以上。防止錯(cuò)誤否定父權(quán)的方法由于突變或其他因素肯定父權(quán)的機(jī)會(huì)

在親子鑒定中，當(dāng)不能排除受檢者與孩子有父子或母子關(guān)系，則傾向于認(rèn)同受檢者與孩子有親子關(guān)系。此時(shí)需要評(píng)價(jià)假設(shè)父與孩子有親生關(guān)系可能性大?。从H權(quán)機(jī)會(huì)），以判定是否具有親生關(guān)系。常用評(píng)價(jià)親權(quán)機(jī)會(huì)的指標(biāo)有：父權(quán)指數(shù)（PI）和父權(quán)相對(duì)機(jī)會(huì)。

肯定父權(quán)的機(jī)會(huì)在親子鑒定中，當(dāng)不能排除受檢者與孩子有父權(quán)指數(shù)（paternityindex/PI）

是判斷親子關(guān)系所需的兩個(gè)概率的似然比，即具有AF遺傳表型的男子是孩子生物學(xué)父親的概率(X)與隨機(jī)男子是孩子生物學(xué)父親的概率(Y)的比值。

PI＝AF是小孩生父的可能性RM是小孩生父的可能性兩個(gè)概念父權(quán)指數(shù)（paternityindex/PI）PI父權(quán)相對(duì)機(jī)會(huì)

PI是實(shí)數(shù)，由這個(gè)數(shù)字不易看出父權(quán)的機(jī)會(huì)，通常將PI值換算成換算成一個(gè)條件概率即父權(quán)相對(duì)機(jī)會(huì)（RCP）。

父權(quán)相對(duì)機(jī)會(huì)既是親子關(guān)系概率，也代表了判斷AF是孩子生父的把握度大小。RCP＝πPIπ

PI＋(1-π)PIPI＋1=π=0.5前概率（π）：非遺傳學(xué)證據(jù)相信爭議父是孩子生父的概率父權(quán)相對(duì)機(jī)會(huì)PI是實(shí)數(shù)，由這個(gè)數(shù)字不易看出父

RCP值是一個(gè)概率含義，從理論上而言，永遠(yuǎn)達(dá)不到100%。實(shí)際上RCP值是鑒定人對(duì)判定親生父子關(guān)系的一種“把握度”。目前學(xué)術(shù)界比較一致的意見是RCP≥99.99%作為判定親生關(guān)系的界限。即在RCP在≥99.99%的前提下，“我”鑒定人有99.99%的“把握”認(rèn)為：AF100%是C的BF。RCP值是一個(gè)概率含義，從理論上而言，永遠(yuǎn)達(dá)DNA提取PCR擴(kuò)增電泳分離檢測結(jié)果分析評(píng)估一般流程圖Chelex法、酚-氯仿法單基因座或復(fù)合擴(kuò)增激光誘導(dǎo)熒光檢測或銀染各種檢材血液、唾液、精斑、毛發(fā)、肌肉、骨骼、牙齒等根據(jù)等位基因ladder分型親子鑒定方法DNA提取PCR擴(kuò)增電泳分離檢測結(jié)果分析評(píng)估一般流程圖Che法醫(yī)親子鑒定標(biāo)準(zhǔn)

為了確保法醫(yī)親子鑒定的可靠性，使之規(guī)范化，科學(xué)化和標(biāo)準(zhǔn)化，國內(nèi)目前已有法醫(yī)親子鑒定標(biāo)準(zhǔn)，要點(diǎn)如下。法醫(yī)親子鑒定標(biāo)準(zhǔn)為了確保法醫(yī)親子鑒定的可靠性，使一、排除父權(quán)的標(biāo)準(zhǔn)

1、經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)檢測遺傳標(biāo)記，假定為父親的男子不能提供給孩子必需的等位基因，在不存在遺傳變異的前提下，可以排除假定父親的父權(quán)。即可以斷定他不是小孩的生物學(xué)父親。

2、為了避免潛在遺傳變異影響，排除父權(quán)至少應(yīng)根據(jù)兩個(gè)以上遺傳標(biāo)記。任何情況下都不能僅根據(jù)一個(gè)遺傳標(biāo)記排除父權(quán)。

3、目前常用的STR較蛋白質(zhì)遺傳標(biāo)記有相對(duì)更高的突變率，僅僅依靠STR排除父權(quán)時(shí)，需要更多STR基因座。一、排除父權(quán)的標(biāo)準(zhǔn)1、經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)檢測遺傳標(biāo)記，假二、認(rèn)定父權(quán)的標(biāo)準(zhǔn)

經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)檢測遺傳標(biāo)記，假定為父親的男子不能被排除父權(quán)。計(jì)算概率后如同時(shí)滿足下列兩項(xiàng)指標(biāo)，可以認(rèn)定假定父親的父權(quán)，即可以斷定他是小孩的生物學(xué)父親。1、實(shí)驗(yàn)檢測遺傳標(biāo)記的累積非父排除率等于或大于99.99％；2、假定父親的累計(jì)父權(quán)指數(shù)等于或大于10000，即在前概率相同的條件下，假定父親的相對(duì)父權(quán)機(jī)會(huì)等于或大于99.99％。

二、認(rèn)定父權(quán)的標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)檢測遺傳標(biāo)記，多個(gè)遺傳標(biāo)記聯(lián)合檢測結(jié)果沒有基因座違反/W＞99.99%1~2個(gè)基因座違反3個(gè)及以上基因座違反雙親鑒定排除親權(quán)關(guān)系單親鑒定肯定親權(quán)關(guān)系不排除親權(quán)關(guān)系增加更多基因座/計(jì)算PI無違反/W＞99.99%新違反結(jié)果評(píng)估多個(gè)遺傳標(biāo)記聯(lián)合檢測結(jié)果沒有基因座違反/W＞99.99%1~案例分析案例分析案例1

毛發(fā)、羊水確定胎兒身源鑒定事由：對(duì)送檢毛發(fā)身源者與范所懷胎兒之間有無親生血緣關(guān)系的技術(shù)咨詢。案情摘要：范攜帶所懷胎兒羊水和陸姓男士血樣做親子鑒定。經(jīng)分析，該男士和胎兒之間無親生血緣關(guān)系，范著急，又?jǐn)y帶李某頭發(fā)數(shù)根，對(duì)毛發(fā)身源者與范某所懷胎兒之間進(jìn)行有無親生血緣關(guān)系的技術(shù)咨詢。案例1毛發(fā)、羊水確定胎兒身源累計(jì)父權(quán)指數(shù)>10000，支持李某（毛發(fā)身源者）與范所懷胎兒之間有親生血緣關(guān)系累計(jì)父權(quán)指數(shù)>10000，支持李某（毛發(fā)身源者）與范所懷胎兒案例2血斑檢驗(yàn)認(rèn)定男孩生父鑒定事由：認(rèn)定張某和吳某倆人誰是男孩生父案情摘要：女士李某已結(jié)婚，育有一子，三歲。李某憂心忡忡，寢食不安。原來李某與吳某關(guān)系甚密，而與丈夫張某感情淡薄，兒子的生父究竟是誰自己也吃不準(zhǔn)。李某、吳某悄悄帶孩子做親子鑒定。案例2血斑檢驗(yàn)認(rèn)定男孩生父支持吳某與男孩之間存在親生血緣關(guān)系；排除張某與男孩之間存在親生血緣關(guān)系。支持吳某與男孩之間存在親生血緣關(guān)系；排除張某與男孩之間存在親案例3自述不育男子有親兒委托事由：確認(rèn)女孩是否梁先生親生案情摘要：梁先生常常被煩惱所困。他去醫(yī)院作精液檢查，結(jié)果顯示精子濃度不足2000萬/ml，且活力不好的精子約占50%，醫(yī)生認(rèn)為有男性無生育能力的可疑。他對(duì)家中5歲女孩是否為自己親生產(chǎn)生懷疑，且根本聽不進(jìn)妻子的解釋，頻頻發(fā)生口角，甚至步入家庭崩潰的邊緣，因此做親子鑒定。案例3自述不育男子有親兒累計(jì)父權(quán)指數(shù)>10000，支持梁先生與該女孩之間存在親生血緣關(guān)系。累計(jì)父權(quán)指數(shù)>10000，支持梁先生與該女孩之間存在親生血緣案例4為繼承遺產(chǎn)偽造證據(jù)被識(shí)破鑒定事由：認(rèn)定魯某是否女孩的親生父親案情摘要：少婦洪某自述四年前結(jié)識(shí)魯某，盡管魯某已有妻室，兩人還是很快墜入愛河，并育有一女。魯某遭遇車禍意外死亡，洪某為財(cái)產(chǎn)做親子鑒定。先帶車座碎片做鑒定，經(jīng)鑒定不是人血。又帶來一張訂貨合同單，說上面有魯某的鼻血，經(jīng)鑒定為人血。案例4為繼承遺產(chǎn)偽造證據(jù)被識(shí)破紙上血斑的21個(gè)DNA位點(diǎn)和洪某完全相同，可以認(rèn)為紙上血斑為洪某所留。紙上血斑的21個(gè)DNA位點(diǎn)和洪某完全相同，可以認(rèn)為紙上血斑為案例5親子鑒定解疑惑鑒定事由：王先生自述其妻張女士于1998年春季在醫(yī)院生下一子。那天同時(shí)有三位產(chǎn)婦生孩子，均是男孩。日復(fù)一日，年復(fù)一年，王先生夫婦覺得兒子反應(yīng)遲鈍，學(xué)習(xí)成績不佳，倆人決定帶兒子去醫(yī)院檢查。不查不知道，一查嚇一跳。兒子智商較低，倆人一聽，心存疑慮，懷疑醫(yī)院抱錯(cuò)孩子，做親子鑒定。案例5親子鑒定解疑惑親子關(guān)系概率達(dá)99.99%以上，可以認(rèn)為王先生、張女士夫婦與男孩平平之間存在親生血緣關(guān)系。親子關(guān)系概率達(dá)99.99%以上，可以認(rèn)為王先生、張女士夫婦與案例6

自己的孩子回來了委托事由：對(duì)是否調(diào)錯(cuò)嬰兒的親子鑒定案情摘要：南方某縣城婦幼保健醫(yī)院，一產(chǎn)婦出院時(shí)，家屬周先生突然稱自己的孩子被調(diào)換了，理由是孩子的外婆曾看到在孩子腰部有一塊不太明顯的胎記，但現(xiàn)在這個(gè)孩子沒胎記。后來發(fā)現(xiàn)尚留在嬰兒室中的另一名丁家男嬰腰部有胎記，疑洗澡時(shí)將吊牌更換，需親子鑒定確認(rèn)。案例6自己的孩子回來了法醫(yī)物證學(xué)--課件案例6DNA檢驗(yàn)結(jié)果證明女孩系領(lǐng)養(yǎng)鑒定事由：認(rèn)定章某和劉某夫婦是否女孩小梅的親生父母案情摘要：章某是某單位的干部，工作認(rèn)真，能力較強(qiáng)，領(lǐng)導(dǎo)將其列入培養(yǎng)計(jì)劃。有職工反映，他的第二個(gè)孩子不是領(lǐng)養(yǎng)的，是親生的。章某夫婦堅(jiān)持孩子是在小區(qū)門口撿到的。做親子鑒定。案例6DNA檢驗(yàn)結(jié)果證明女孩系領(lǐng)養(yǎng)排除章某和劉某夫婦與小梅之間存在親生血緣關(guān)系。排除章某和劉某夫婦與小梅之間存在親生血緣關(guān)系。個(gè)體識(shí)別

IndividualIdentification個(gè)體識(shí)別

IndividualIdentificatio在法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中,分析生物性檢材以揭示個(gè)體身份的工作稱為個(gè)人識(shí)別。對(duì)案件偵查和審判：生物性檢材提供證據(jù)對(duì)災(zāi)害、空難事故：生物性檢材區(qū)別死者身份概念在法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中,分析生物性檢材以揭示個(gè)體身份的工作稱為個(gè)人識(shí)概述生物性檢材的個(gè)體識(shí)別意義生物性檢材通常細(xì)小且分布范圍廣罪犯難以徹底毀掉或掩蓋身份不明的尸體、活體或檢材辨明身份現(xiàn)場遺落血液、毛發(fā)、皮膚、指甲、牙齒、精液、唾液等災(zāi)難性事故、水浮尸被拐賣的婦女、兒童被追捕的罪犯蠟塊、切片、組織等為偵查提供線索為審判提供證據(jù)概述生物性檢材的個(gè)體識(shí)別意義生物性檢材通常細(xì)小且分布范圍廣罪生物性檢材是經(jīng)歷了環(huán)境調(diào)節(jié)作用的人體組織與器官或人體體液、分泌物、排泄物及由它們形成的生物性斑痕，由于環(huán)境的作用使生物性檢材具有不確定性，對(duì)法醫(yī)鑒定人是一個(gè)嚴(yán)峻的考驗(yàn)。生物性檢材的法醫(yī)學(xué)特點(diǎn)生物性檢材是經(jīng)歷了環(huán)境調(diào)節(jié)作用的人體組織與器官血痕：現(xiàn)場地面、墻壁、家具、衣服、兇器、指甲縫等。黑暗現(xiàn)場用魯米諾噴射（發(fā)出熒光）。精斑：可附于衣褲、被褥、草紙、被害人腹壁、大腿和陰毛上。必要時(shí)用紫外線照射（銀白色帶淡紫暈的熒光）毛發(fā)：常見于地面、被褥、兇器上；死者手中、口中和衣服；強(qiáng)奸案被害人內(nèi)衣、外陰和大腿間唾液：現(xiàn)場煙頭、口香糖、牙簽、飲料容器及咬痕上皮膚及其它臟器組織碎片：可見于被害人或罪犯指甲內(nèi)；交通事故的車輪、擋泥板、車廂棱角、底盤生物性檢材的尋找、采集、包裝和送檢生物性檢材的尋找血痕：現(xiàn)場地面、墻壁、家具、衣服、兇器、指甲縫等。黑暗現(xiàn)場用新鮮血：活體，靜脈血，EDTA抗凝；尸體，末梢血管血。4℃保存或干凈紗布、濾紙上晾干血痕：必須同時(shí)取周邊無斑痕部分做對(duì)照小件物品整件提取大件物品切割、刮取泥土上整塊取下，襯以消毒棉花于盒內(nèi)以防震碎體液、分泌液、排泄物、器官組織奸殺或死因不明女性尸體：取陰道內(nèi)容物，必要時(shí)取肛門、會(huì)陰、口腔標(biāo)本毛發(fā)用鑷子夾取，勿損壞附著物皮膚、碎骨、臟器碎塊及煙頭，用鑷子或手套收集，不可加防腐劑生物性檢材的采集新鮮血：活體，靜脈血，EDTA抗凝；尸體，末梢血管血。4℃保低溫或晾干保存，盡快送檢紙袋、紗布或玻璃容器包裝或存放，勿用塑料膜袋包裝物外注明物品名稱、來源、數(shù)量、采集日期等送檢同時(shí)附必要的對(duì)照樣本，如被害人或嫌疑人的血液、唾液必須附有委托書，且寫明送檢機(jī)關(guān)和聯(lián)系人、送檢物品清單、案情介紹、送檢目的要求等。包裝和送檢低溫或晾干保存，盡快送檢包裝和送檢個(gè)體識(shí)別一般程序肉眼檢查預(yù)試驗(yàn)確證試驗(yàn)種屬鑒定個(gè)體識(shí)別精斑檢驗(yàn)血痕檢驗(yàn)數(shù)量、分布、形狀、色澤，重構(gòu)現(xiàn)場確定部位和分布，便于準(zhǔn)確取材，提高檢出率篩除非血痕檢材聯(lián)苯胺試驗(yàn)、酚酞試驗(yàn)篩選可疑精斑酸性磷酸酶法證明檢材是血痕血色原結(jié)晶試驗(yàn)確證檢材是精斑精子檢出法、環(huán)狀沉淀反應(yīng)確定是否是人血ELISA、Alu序列檢測確定是否人精斑抗p-30血清血型測定（吸收試驗(yàn)）DNA檢測（STR、MtDNA）血型測定（中和試驗(yàn)）DNA檢測（STR、MtDNA）個(gè)體識(shí)別一般程序肉眼檢查預(yù)試驗(yàn)確證試驗(yàn)種屬鑒定個(gè)體識(shí)別精斑檢一、血痕檢驗(yàn)

血痕檢驗(yàn)的主要內(nèi)容：

是否血痕；

是人血還是動(dòng)物血；

血痕遺傳標(biāo)記分型檢測即個(gè)體識(shí)別。一、血痕檢驗(yàn)檢測程序肉眼檢查預(yù)試驗(yàn)（+）提示：可能是血確證試驗(yàn)（-）（+）提示：肯定是血（-）人Hb（+）提示：肯定是人血（-）種屬測定各類動(dòng)物血檢驗(yàn)性別測定其它遺傳學(xué)標(biāo)志檢測ABH血型物質(zhì)測定檢測程序肉眼檢查預(yù)試驗(yàn)（+）提示：可能是血確證試驗(yàn)（-）（+1.肉眼檢查新鮮血液呈鮮紅色，干燥后逐漸變成暗紅色、暗褐色、褐色、灰色。血痕的顏色、形狀、附著部位和范圍有助于推斷案件性質(zhì)，為破案提供線索。1.肉眼檢查新鮮血液呈鮮紅色，干燥后逐漸變成暗紅色、暗褐色、如兇器上的血痕若面積較大，濃淡不均、境界不清、呈平行線條，可考慮為擦拭血痕。血呈滴狀時(shí)，提示血液是從一定高度滴落的。若血呈流柱狀，則提示血液可能是從高位流向低位的。1.肉眼檢查如兇器上的血痕若面積較大，濃淡不均、境界不清、呈平行線條，可2、預(yù)試驗(yàn)

預(yù)試驗(yàn)屬于篩選試驗(yàn)，將不是血痕的斑跡篩選出來。常用靈敏度高，操作簡單的試驗(yàn)?！衤?lián)苯胺試驗(yàn)（Benzidinetest）原理：血痕中血紅蛋白、正鐵血紅素具有過氧化酶活性，能使過氧化氫釋放新生態(tài)氧，將無色的聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)。試劑：冰醋酸、聯(lián)苯胺乙醇溶液、30%H2O2。操作：取少量可疑血痕置白色反應(yīng)板上，1滴冰醋酸，1滴過氧化氫，1滴聯(lián)苯胺液。立即出現(xiàn)蘭色為陽性反應(yīng)。2、預(yù)試驗(yàn)血紅蛋白或正鐵血紅素過氧化物酶活性過氧化氫（H2O2）新生態(tài)氧無色聯(lián)苯胺藍(lán)色聯(lián)苯胺血痕不是血痕聯(lián)苯胺試驗(yàn)血紅蛋白過氧化物酶活性過氧化氫新生態(tài)氧無色聯(lián)苯胺藍(lán)色聯(lián)苯胺血法醫(yī)物證學(xué)--課件注意事項(xiàng)：⑴高靈敏度，血液50萬倍稀釋，仍可出現(xiàn)陽性結(jié)果。⑵兩類干擾物質(zhì)：①含有過氧化物酶的植物，蔬菜和水果，可以出現(xiàn)假陽性；②氧化劑可直接將聯(lián)苯胺氧化，呈蘭色變化。所以試驗(yàn)陽性不能認(rèn)為可疑斑跡是血痕。只能結(jié)論：‘可能是血痕’。⑶聯(lián)苯胺試驗(yàn)的意義在陰性結(jié)果，陰性結(jié)果可以排除血痕。

注意事項(xiàng)：3、確證試驗(yàn)●血色原結(jié)晶試驗(yàn)（hemochromogencrystaltest）

原理：在堿性條件下正鐵血紅素在還原劑作用下還原成血紅素，血紅素與含氮物質(zhì)吡啶結(jié)合生成櫻桃紅色針狀、菊花狀結(jié)晶。

試劑：NaOH，葡萄糖，吡啶.（Takayama試劑）

操作：出現(xiàn)櫻桃紅色針狀、菊花狀結(jié)晶為陽性。3、確證試驗(yàn)堿性溶液還原劑血紅蛋白正鐵血紅素珠蛋白血紅素變性珠蛋白含氮化合物具有特殊吸收光譜的血色原結(jié)晶血色原結(jié)晶試驗(yàn)黃紅色櫻紅色桃紅色星狀、菊花狀、針狀結(jié)晶血痕鏡檢堿性溶液還原劑血紅蛋白正鐵血紅素珠蛋白血紅素變性珠蛋白含氮化血色原結(jié)晶LessonI

TakayamaCrystalTakayamaCrystal血色原結(jié)晶LessonITakayamaCrystal注意事項(xiàng)：⑴特異性好，凡血痕檢材可出現(xiàn)陽性結(jié)果，凡出現(xiàn)典型的血色原結(jié)晶的檢材就是肯定是血痕。⑵靈敏度不高，血液稀釋200倍就難以獲得典型的血色原結(jié)晶。凡稀釋、雨淋、細(xì)菌污染和腐敗血痕難出現(xiàn)典型結(jié)晶。⑶所以血色原結(jié)晶試驗(yàn)的意義在陽性結(jié)果。陰性沒有意義，需要繼續(xù)作種屬試驗(yàn)。注意事項(xiàng)：4、種屬試驗(yàn)

種屬鑒定是血痕鑒定的關(guān)鍵。動(dòng)物學(xué)中存在血型物質(zhì)，例如雞有A型抗原物質(zhì)，未確證人血即作ABO血型測定，可造成錯(cuò)案。自然界廣泛存在與人類血型抗原類似的物質(zhì)，微生物如大腸桿菌，肺炎雙球菌。細(xì)菌污染的腐敗血痕可能測定出ABO血型。4、種屬試驗(yàn)●環(huán)狀沉淀（ringprecipitation）反應(yīng)

原理：血痕中Hb和血清蛋白抗原與相應(yīng)的沉淀素抗體發(fā)生特異性結(jié)合，在一定的條件下出現(xiàn)白色沉淀。用已知的抗人Hb血清或抗人血清與待測血痕浸出液做沉淀反應(yīng)，陽性結(jié)果為人血。陰性結(jié)果不是人血。

方法：取待測血痕0.5cm2，剪碎,試管內(nèi)，0.5mlNS，室溫下浸泡2h，離心，取上清液作抗原液。將抗人血清或者抗人Hb血清，置毛細(xì)沉淀管下層，然后將血痕浸出液疊加在抗血清上，室溫下觀察30min，出現(xiàn)白色沉淀環(huán)為陽性。

●環(huán)狀沉淀（ringprecipitation）反應(yīng)AbAg環(huán)狀沉淀示意圖沉淀管內(nèi)徑1.5～2mm60min內(nèi)出現(xiàn)沉淀環(huán)為陽性60min不出現(xiàn)沉淀環(huán)為陰性AbAg環(huán)狀沉淀示意圖沉淀管內(nèi)徑1.5～2mm法醫(yī)物證學(xué)--課件注意事項(xiàng)：⑴陳舊，水洗血痕，浸泡時(shí)間不夠，抗血清效價(jià)不夠，會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果。應(yīng)設(shè)置已知人血陽性對(duì)照。⑵與動(dòng)物血出現(xiàn)交叉反應(yīng)，會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果。應(yīng)設(shè)置已知?jiǎng)游镅蹖?duì)照。⑶檢測靈敏度為1/1萬~1/5萬稀釋血痕。采用單克隆抗體-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，靈敏度達(dá)64萬倍稀釋。利用DNA序列的種屬特異性，以PCR-DNA分析作生物學(xué)檢材的種屬鑒定，無論從靈敏度或者特異性都有明顯的進(jìn)步。注意事項(xiàng)：5、遺傳標(biāo)記的檢測

現(xiàn)場收集的血痕受外界影響是不可預(yù)知的，①發(fā)案時(shí)間不可預(yù)測；②現(xiàn)場檢材的環(huán)境影響因素不可預(yù)測。是法醫(yī)物證材料共同的特點(diǎn)。

目前常規(guī)檢測是PCR-STR分型。只要能夠提取到檢材的模板DNA，就可以檢測出檢材的的DNA遺傳標(biāo)記。滿足取材廣泛、對(duì)超微量、腐敗檢材的鑒定要求。

5、遺傳標(biāo)記的檢測二、精斑檢驗(yàn)

精斑（seminalstains）常見于性犯罪案件，呈灰白色漿糊狀不規(guī)則斑痕。成年男子一次射精量2~5ml，精子含量1~1.5億/ml。精子細(xì)胞蝌蚪狀，分頭、頸和尾三部分，長50~60m。

二、精斑檢驗(yàn)精斑的檢驗(yàn)程序肉眼檢查預(yù)試驗(yàn)（+）提示：可能是精斑確證試驗(yàn)（-）（+）提示：肯定是精斑（-）人精P30（+）提示：肯定含人精斑（-）種屬測定各類動(dòng)物血檢驗(yàn)其它遺傳學(xué)標(biāo)志檢測ABH血型物質(zhì)測定精斑的檢驗(yàn)程序肉眼檢查預(yù)試驗(yàn)（+）提示：可能是精斑確證試驗(yàn)（目的：發(fā)現(xiàn)可疑精斑、確定所在位置及分布，以便準(zhǔn)確取材，提高陽性檢出率。記錄：精斑的分布情況、數(shù)目、位置、形狀、大小、顏色及光澤等。1、精斑的肉眼檢驗(yàn)?zāi)康模喊l(fā)現(xiàn)可疑精斑、確定所在位置及分布，以便準(zhǔn)確取材，提高陽精斑部位

人體---犯罪嫌疑人或被害人的外陰或大腿內(nèi)側(cè)、衣褲現(xiàn)場---被褥、毛巾、手紙、草席外觀形狀多呈不規(guī)則地圖狀，身體表面可成白色鱗片痂狀深色布料---濃厚精斑成灰白色狀斑跡淺色布料---精斑多呈黃白色地圖狀。邊緣較深軟質(zhì)載體---觸之有硬感輔助檢查：陳舊或水洗過的精斑，可疑借助紫外光進(jìn)行觀察現(xiàn)象---紫外光下精斑呈銀白色熒光，邊緣呈淺紫蘭色原因----精斑中含有黃素，在紫外線下發(fā)熒光意義---陽性可能是精斑，（陰道分泌物、唾液、鼻涕、乳汁等都可發(fā)熒光）精斑部位2、

預(yù)試驗(yàn)?zāi)康模汉Y選精斑。常規(guī)酸性磷酸酶試驗(yàn)。原理：精液中含大量的酸性磷酸酶，可以分解磷酸苯二鈉，產(chǎn)生奈酚，奈酚經(jīng)過鐵氰化鉀氧化后與氨基安替吡林結(jié)合，生成紅色的醌類化合物。

特點(diǎn)：⑴靈敏度高，意義在陰性結(jié)果。⑵部分內(nèi)臟浸液，鼻涕、唾液、男性尿液呈弱陽性。2、

預(yù)試驗(yàn)3、確證試驗(yàn)1.精子檢出法2.抗人精血清沉淀反應(yīng)

靈敏度2000~4000倍稀釋精液。3.P30檢測

精液中具有前列腺特異性抗原（prostatespecificantigen），或者稱γ-精漿蛋白（

-seminoprotein，

-sm），屬于一種糖蛋白，PI約6.9，MW30,000，簡稱P30。精液P30平均含量2mg/ml。

P30具有高度特異性，用抗P30單克隆抗體，以沉淀試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測，陽性為精斑。

3、確證試驗(yàn)

精子檢出法精子是認(rèn)定精斑最簡便、最可靠的方法。不需要特殊的儀器和試劑。直接鏡檢：精子存活時(shí)間受多種因素的影響男性前列腺液—有利于精子精囊液—有害于精子女性陰道液—酸性—不利于精子宮頸液—堿性---保護(hù)精子精斑的確證試驗(yàn)精子檢出法精斑的確證試驗(yàn)4、精斑的遺傳標(biāo)記檢測1.ABO血型測定：精液含豐富的可溶性ABH物質(zhì)，采用吸收-抑制法測定。2.DNA遺傳標(biāo)記：采用PCR-STR分型。3.混合斑：混合DNA，女性成分對(duì)精液個(gè)體識(shí)別有干擾。目前采用二次裂解法或稱差異裂解法：精子細(xì)胞膜—二硫交聯(lián)結(jié)構(gòu)—穩(wěn)定。將斑跡浸出細(xì)胞，先SDS和PK處理，再用還原劑二硫蘇糖醇(DTT)+SDS+PK裂解精子細(xì)胞，獲得精子DNA。4、精斑的遺傳標(biāo)記檢測三、其他生物學(xué)檢材的個(gè)人識(shí)別鑒定

個(gè)體識(shí)別鑒定，目前的關(guān)鍵的問題在生物材料的DNA提取。只要能夠從材料中提取到有效量的DNA，就可以直接運(yùn)用PCR-STR標(biāo)準(zhǔn)分型方法檢測。種屬鑒別，PCR的引物設(shè)計(jì)就已具有人特異性，一般動(dòng)物的材料是沒有PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的。值得一提的是：高度腐敗，陳舊，洗滌或雨淋血痕，極其微量的物證，沒有細(xì)胞核的檢材，可以采用mtDNA序列多態(tài)性分析技術(shù)。后者的靈敏度比STR分析高10倍。三、其他生物學(xué)檢材的個(gè)人識(shí)別鑒定案例評(píng)析案例評(píng)析案例1：通過微量血痕的檢驗(yàn)認(rèn)定搶劫作案人鑒定事由：對(duì)樹葉和塑料紙上的血跡進(jìn)行個(gè)體識(shí)別案情：信用社遭搶，職工圍堵歹徒，歹徒三樓躍下，被二樓窗戶劃破大腿，鮮血淋漓，逃之夭夭?，F(xiàn)場提取帶血樹葉和塑料袋。調(diào)查取證，某男去醫(yī)院包扎過傷口，但矢口否認(rèn)，需通過法醫(yī)物證學(xué)鑒定來擺明事實(shí)。案例1：通過微量血痕的檢驗(yàn)認(rèn)定搶劫作案人檢測過程與結(jié)果血痕預(yù)試驗(yàn)確證試驗(yàn)血斑陽性DNA檢測結(jié)果檢測過程與結(jié)果血痕預(yù)試驗(yàn)確證試驗(yàn)血斑陽性DNA檢測結(jié)果鑒定結(jié)論：送檢的樹葉、塑料袋均檢出血跡，經(jīng)21個(gè)DNA位點(diǎn)檢驗(yàn)，其基因型與嫌疑人薛某一致，偶合率僅7.8709×10^32，因此認(rèn)定樹葉、塑料袋上的血跡為薛某所留。鑒定結(jié)論：送檢的樹葉、塑料袋均檢出血跡，經(jīng)21個(gè)DNA位點(diǎn)檢案例2對(duì)一個(gè)扎精管強(qiáng)奸嫌疑人的認(rèn)定委托事由：對(duì)犯罪嫌疑人鄒某與送檢內(nèi)褲上精斑之間DNA基因型的比對(duì)案情摘要：陸某舉報(bào)其就讀小學(xué)的女兒被代課老師鄒某強(qiáng)奸，并提供小陸內(nèi)褲一條。審訊時(shí)，鄒某大呼冤枉，稱其三年前就做了輸精管結(jié)扎手術(shù)。案例2對(duì)一個(gè)扎精管強(qiáng)奸嫌疑人的認(rèn)定（1）基因型完全一樣，偶合率10-10以下，可以認(rèn)定送檢內(nèi)褲上的精斑為鄒某所留。（2）文獻(xiàn)報(bào)道，輸精管結(jié)扎者不但不會(huì)影響男性性功能，極少數(shù)還會(huì)因?yàn)槭中g(shù)質(zhì)量等原因，能排出精子。（3）公安部門據(jù)此再次審訊鄒某時(shí)，不但承認(rèn)了對(duì)小陸的強(qiáng)奸事實(shí)，同時(shí)還供認(rèn)出另外兩起猥褻強(qiáng)奸幼女案。（1）基因型完全一樣，偶合率10-10以下，可以認(rèn)定送檢內(nèi)褲案例3石蠟包埋組織的DNA鑒定決定患者是否開刀案情摘要：某醫(yī)院接受一位病人，對(duì)該病人進(jìn)行全面檢查，懷疑該病人乳腺組織可能有癌癥之嫌，切取少量乳腺組織進(jìn)行病理切片檢查，當(dāng)時(shí)該院一位進(jìn)修醫(yī)生因工作疏忽，將該病人組織與其他兩份組織搞混，事后對(duì)其三分份組織檢查，發(fā)現(xiàn)一塊石蠟組織有癌變，另兩份組織是正常的。為了明確該癌變組織是否來自于病人，院方委托對(duì)癌變組織進(jìn)行DNA同一認(rèn)定。案例3石蠟包埋組織的DNA鑒定決定患者是否開刀（1）可以認(rèn)為病人不是送檢的石蠟包埋組織的身源者。（2）國內(nèi)外研究表明，同一個(gè)體各種正常組織的基因型相同，而癌變組織有可能會(huì)引起部分基因突變，從而改變基因型。本案所檢的21個(gè)位點(diǎn)中18個(gè)位點(diǎn)的基因型與病人完全不一致，一般可以認(rèn)為癌變石蠟包埋組織不是病人的組織，這樣病人可以少開一次刀，避免了一次醫(yī)療事故。（1）可以認(rèn)為病人不是送檢的石蠟包埋組織的身源者。案例4DNA檢驗(yàn)證實(shí)骨髓移植成功檢驗(yàn)事由：對(duì)老胡與小胡進(jìn)行STR位點(diǎn)DNA檢驗(yàn)檢驗(yàn)材料：老胡和小胡兩人血痕紗布。情況摘要：小胡接受干細(xì)胞移植，供者為其父老胡。兩周后，老胡攜帶小胡接受骨髓移植前后的血樣及自己的血樣要求進(jìn)行DNA檢驗(yàn)。案例4DNA檢驗(yàn)證實(shí)骨髓移植成功接受移植兩周后，小胡的基因發(fā)生了改變，其基因型與其父親老胡的完全相同，說明骨髓移植是成功的。接受移植兩周后，小胡的基因發(fā)生了改變，其基因型與其父親老胡的TheEndTheEnd復(fù)習(xí)思考題1.遺傳標(biāo)記及其分類2.親子鑒定的概念3.簡述親子鑒定的原理復(fù)習(xí)思考題1.遺傳標(biāo)記及其分類法醫(yī)物證學(xué)法醫(yī)物證學(xué)

法醫(yī)物證學(xué)以法醫(yī)物證為研究對(duì)象，以提供科學(xué)證據(jù)為目的，應(yīng)用生命科學(xué)技術(shù)解決案件中與人體有關(guān)的生物檢材鑒定的一門學(xué)科。法醫(yī)物證學(xué)以法醫(yī)物證為研究對(duì)象，以提供科學(xué)證據(jù)物證（materialevidence）：對(duì)案件的真實(shí)情況有證明作用的物品或痕跡。法醫(yī)物證：主要指與人體有關(guān)的生物性檢材。包括人體組織與器官、體液、分泌物、排泄物及由它們形成的斑痕，如血液、精液、唾液、骨骼、牙齒、毛發(fā)、肌肉、皮膚、粘膜等。物證檢驗(yàn)（examinationofmaterialevidence）：為了偵破或?qū)徖戆讣瑢?duì)與案件有關(guān)的物證進(jìn)行檢驗(yàn)鑒定的過程。物證（materialevidence）：對(duì)案件的真實(shí)情況法醫(yī)物證的特點(diǎn)法醫(yī)物證的穩(wěn)定性受環(huán)境影響法醫(yī)物證屬于“科學(xué)證據(jù)”--是查明案件事實(shí)的依據(jù)（案件重現(xiàn)）--是審查其他證據(jù)的手段（客觀、可靠、邏輯性）法醫(yī)物證的特點(diǎn)法醫(yī)物證的穩(wěn)定性受環(huán)境影響“物證不怕恫嚇，物證不會(huì)遺忘，物證不會(huì)受外界影響而情緒激動(dòng)。……在審判過程中，被告人會(huì)說謊，證人會(huì)說謊，辯護(hù)律師和檢查官會(huì)說謊，甚至法官也會(huì)說謊，惟有物證不會(huì)說謊?！?美)郝伯特?麥克唐奈讓證據(jù)說話。(美)李昌鈺“物證不怕恫嚇，物證不會(huì)遺忘，物證不會(huì)受外界影響而情緒激動(dòng)。法醫(yī)物證學(xué)的基本任務(wù)：個(gè)人識(shí)別（personalidentification）:

刑事案件的痕跡、強(qiáng)奸輪奸的精斑、交通事故的責(zé)任認(rèn)定、災(zāi)難事故（空難、海嘯、地震、火災(zāi)等個(gè)體確認(rèn)）親子鑒定（Paternitytesting)：

血緣關(guān)系（私生、錯(cuò)調(diào)、拐騙、財(cái)產(chǎn)繼承、移民等）法醫(yī)物證學(xué)的基本任務(wù)：個(gè)人識(shí)別（personaliden親子鑒定

Paternitytesting親子鑒定

Paternitytesting法醫(yī)物證學(xué)--課件“親子鑒定熱”摧毀家庭的基石造福人類還是戕害家庭？親子鑒定殺死了中國人的家庭忠誠“親子鑒定”折射家庭信任危機(jī)親子鑒定拷問“真實(shí)的謊言”親子鑒定有什么錯(cuò)“親子鑒定熱”摧毀家庭的基石造福人類還是戕害家庭？親子鑒定親權(quán)鑒定（indentificationindisputedpatermity）：是指應(yīng)用醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、和人類學(xué)的方法檢測遺傳標(biāo)記，并依據(jù)遺傳學(xué)理論進(jìn)行分析，從而對(duì)被檢者之間是否存在生物學(xué)親緣關(guān)系所作的科學(xué)判定。親子鑒定：判斷父母與子女之間是否存在生物學(xué)親緣關(guān)系，稱為親子鑒定。父權(quán)鑒定：在親子鑒定中，母子關(guān)系確定，要求判斷爭議父親和子女間是否存在親子關(guān)系。親權(quán)鑒定（indentificationindisp滴血認(rèn)親三國：滴骨驗(yàn)親明代：合血法電視劇《洗冤錄》中滴骨驗(yàn)親劇照電影《九品芝麻官》中滴血認(rèn)親劇照滴血認(rèn)親電視劇《洗冤錄》中滴骨驗(yàn)親劇照電影《九品芝麻官》中滴1920年，歐洲將血型用于親子鑒定1935年，美國開始親子鑒定1985年，PCR技術(shù)發(fā)明/使親子鑒定從排除走向認(rèn)定基于PCR的STR分型已成為非常成熟的技術(shù)手段，商業(yè)化試劑盒的開發(fā)和自動(dòng)測序儀的應(yīng)用，結(jié)果科學(xué)可靠。1920年，歐洲將血型用于親子鑒定親子鑒定類型涉及民事糾紛涉及刑事案件涉及行政事務(wù)子女撫養(yǎng)、財(cái)產(chǎn)繼承懷疑產(chǎn)院調(diào)錯(cuò)嬰兒強(qiáng)奸致孕案的生父確認(rèn)碎尸案的身源認(rèn)定殺嬰或拐賣兒童案孩子身源認(rèn)定移民涉外公證失散親人親緣關(guān)系認(rèn)定計(jì)劃外生育責(zé)任人確認(rèn)或上戶口親子鑒定類型涉及民事糾紛涉及刑事案件涉及行政事務(wù)子女撫養(yǎng)、財(cái)親子鑒定的依據(jù)親子鑒定的依據(jù)

遺傳性狀：生物體表現(xiàn)的一切形態(tài)特征、生理特征和代謝類型的統(tǒng)稱。單位性狀：其中可檢測的、由遺傳決定的特征，并能夠按預(yù)期的方式從一代遺傳給下一代的性狀，在遺傳學(xué)上稱為單位性狀。遺傳標(biāo)記（geneticmarker)：這種具有相對(duì)差異的單位性狀作為標(biāo)志來識(shí)別攜帶它的個(gè)體、細(xì)胞和染色體‘或用以研究細(xì)胞、個(gè)體、家系、群體的遺傳方式時(shí)稱為遺傳標(biāo)記。遺傳性狀：生物體表現(xiàn)的一切形態(tài)特征、生理特征和代謝類型的遺傳標(biāo)記的傳遞遵循孟德爾遺傳規(guī)律：①同基因座等位基因在配子形成過程中彼此分離，分別進(jìn)入各自的配子細(xì)胞（分離律）；②不同基因座等位基因在配子形成過程中，可分可合，隨機(jī)組合進(jìn)入同一配子細(xì)胞（自由組合律）。遺傳標(biāo)記的傳遞遵循孟德爾遺傳規(guī)律：紅細(xì)胞型、白細(xì)胞型、血小板型基因產(chǎn)物水平遺傳標(biāo)記DNA水平遺傳標(biāo)記血液細(xì)胞表面的遺傳標(biāo)記血液蛋白質(zhì)的遺傳標(biāo)記紅細(xì)胞酶型、血清酶型、血清型長度多態(tài)性序列多態(tài)性RFLP，VNTR，STR

SNP、mtDNA遺傳標(biāo)記分類紅細(xì)胞型、白細(xì)胞型、血小板型基因產(chǎn)物水平遺傳標(biāo)記DNA水平遺用于親權(quán)鑒定的遺傳標(biāo)記的要求遺傳方式明確遺傳標(biāo)記的分型終身不變，具有體細(xì)胞的穩(wěn)定性和遺傳的穩(wěn)定性檢測方法穩(wěn)定,不同實(shí)驗(yàn)室、不同批次的結(jié)果相同具有遺傳多態(tài)性用于親權(quán)鑒定的遺傳標(biāo)記的要求遺傳方式明確基因產(chǎn)物水平遺傳標(biāo)記的局限性為基因編碼產(chǎn)物，多態(tài)信息容量小，應(yīng)用價(jià)值有限在基因表達(dá)過程中受許多因素影響，不能正確反映DNA多態(tài)性情況某些血型系統(tǒng)存在生理性變異和病理性變異，使判型錯(cuò)誤易受環(huán)境中各種理化因素影響而失活，檢材難以保存檢測方法多樣、復(fù)雜，技術(shù)、人為誤差較大基因產(chǎn)物水平遺傳標(biāo)記的局限性為基因編碼產(chǎn)物，多態(tài)信息容量小，DNA遺傳標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)⑴遺傳標(biāo)記多，信息量大。

DNA多態(tài)性標(biāo)記在生物體內(nèi)的分布遠(yuǎn)多于蛋白質(zhì)標(biāo)記,標(biāo)記多態(tài)性程度大大超過蛋白質(zhì)標(biāo)記。僅分析其中的少部分遺傳標(biāo)記就完全可以直接進(jìn)行個(gè)體同一認(rèn)定與親子鑒定,具有非常高的識(shí)別率和鑒定能力。

⑵標(biāo)記的遺傳類型全。有按孟德爾分離和自由組合律遺傳的常染色體遺傳標(biāo)記

,也有只父系遺傳的Y染色體的遺傳標(biāo)記和母系遺傳的線粒體DNA序列差異。利用DNA遺傳標(biāo)記可以進(jìn)行幾代甚至隔代、多代的血緣關(guān)系的鑒定。

DNA遺傳標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)⑴遺傳標(biāo)記多，信息量大。DNA遺傳標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)⑶可分析的物證種類多，存在比較廣泛。凡是含有細(xì)胞的生物材料均能進(jìn)行DNA分析，這類物質(zhì)可在很多種案件中提取到。具有檢材的多樣性與應(yīng)用的廣泛性。⑷對(duì)于自然環(huán)境具有相對(duì)比較高的穩(wěn)定性。

DNA遺傳標(biāo)記相對(duì)穩(wěn)定，保存幾十年的血痕、精斑仍可以進(jìn)行DNA分析,甚至歷時(shí)數(shù)千年的木乃伊也可以獲得含有一定遺傳信息的結(jié)果。DNA遺傳標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)⑶可分析的物證種類多，存在比較廣泛。⑸方法靈敏,檢材用量少。當(dāng)前的主流技術(shù)都是以PCR技術(shù)為基礎(chǔ),具有比較高的靈敏度，理論上一個(gè)細(xì)胞的DNA即可分析。實(shí)際應(yīng)用中，靈敏度為ng級(jí)DNA,只需很少的檢材，即可獲得檢驗(yàn)結(jié)果。⑹同一個(gè)體物證具有比對(duì)的通用性。同一個(gè)體的各種組織DNA具有相同的序列特征，即個(gè)體組織的同一性，可以用同一個(gè)體的任一部分組織或體液得到該個(gè)體的相同的全部信息，進(jìn)行比對(duì)和鑒定，而不必一定要采用相同的組織。

⑺自動(dòng)化程度高，速度快。

⑻可以建立數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行查檔比對(duì)，檢索破案。DNA遺傳標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)⑸方法靈敏,檢材用量少。DNA遺傳標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)DNA標(biāo)記的發(fā)展1980：White首次描述限制片段長度多態(tài)性(RFLP)標(biāo)記1985：Jeffreys發(fā)現(xiàn)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)(VNTR)1985：聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)第一篇論文發(fā)表1988：FBI開始利用DNA分析協(xié)助辦案1991：短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)第一篇論文發(fā)表1995：英國開始建立DNA數(shù)據(jù)庫1998：美國啟動(dòng)CODIS（DNA檢索系統(tǒng)）數(shù)據(jù)庫2001：人類基因組計(jì)劃HGP完成/同時(shí)發(fā)現(xiàn)300萬SNP……DNA標(biāo)記的發(fā)展1980：White首次描述限制片段長度多態(tài)即DNA的結(jié)構(gòu)在不同的個(gè)體或等位基因之間存在差異。其本質(zhì)就是由于進(jìn)化過程中各種原因引起染色體DNA中核苷酸排列順序發(fā)生了改變/即產(chǎn)生的DNA片段和DNA序列在個(gè)體間的差異。長度多態(tài)性序列多態(tài)性DNA多態(tài)性即DNA的結(jié)構(gòu)在不同的個(gè)體或等位基因之間存在差異。其1.DNA長度多態(tài)性(DNAlengthpolymorphisms)

人類基因組DNA長3×109bp，編碼基因序列約占不到5%，非編碼序列包括間隔序列，基因調(diào)控序列，基因內(nèi)含子等。基因組DNA中大約10%是串聯(lián)重復(fù)（tandemrepeats）DNA，結(jié)構(gòu)形式是以一個(gè)序列相對(duì)恒定的DNA片段構(gòu)成核心序列（coresequence），作為重復(fù)單位，首尾相接，串聯(lián)重復(fù)。這種特殊的串聯(lián)重復(fù)序列叫作：衛(wèi)星DNA

(satelliteDNA)?！瑿GATCGATCGATCGATCGATCGAT…….1.DNA長度多態(tài)性(DNAlengthpolymo

⑴衛(wèi)星DNA分類：按照核心序列的堿基結(jié)構(gòu)特征，衛(wèi)星DNA分為：●大衛(wèi)星(macrosatelliteDNA)●小衛(wèi)星(minisatelliteDNA)●微衛(wèi)星(microsatelliteDNA)DNA長度遺傳標(biāo)記主要位于小衛(wèi)星和微衛(wèi)星DNA序列中。⑴衛(wèi)星DNA分類：小衛(wèi)星和微衛(wèi)星

小衛(wèi)星和微衛(wèi)星是依據(jù)核心序列的長度人為的分類。小衛(wèi)星重復(fù)單位：15~30bp，重復(fù)次數(shù)數(shù)次至數(shù)百次；微衛(wèi)星重復(fù)單位：2~6bp，重復(fù)次數(shù)至數(shù)十次。小衛(wèi)星和微衛(wèi)星是DNA長度多態(tài)性的主要序特征性序列。小衛(wèi)星和微衛(wèi)星⑵可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列

小衛(wèi)星和微衛(wèi)星都具有特定的基因座位，其中部分衛(wèi)星DNA序列，因不同個(gè)體、不同等位基因之間，重復(fù)單位的串聯(lián)重復(fù)的次數(shù)不同形成了DNA片段長度差異，稱作可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列（variablenumberoftandemrepeats,VNTR），VNTR序列大約占一半左右，是構(gòu)成DNA片段長度多態(tài)性的主要原因。⑵可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列DNA長度多態(tài)性DNA長度多態(tài)性法醫(yī)物證學(xué)--課件法醫(yī)物證學(xué)--課件

小衛(wèi)星序列都位于基因組高變區(qū)，是基因組中的重組熱點(diǎn)。其中VNTR序列呈現(xiàn)極其復(fù)雜的長度多態(tài)性。例如：某小衛(wèi)星VNTR座位重復(fù)單位17bp，重復(fù)次數(shù)70～450次則最短的基因長：17bp×70＝1190bp

最長的基因有：17bp×450＝7650bp小衛(wèi)星序列都位于基因組高變區(qū)，是基因組中的重

早期的法醫(yī)DNA分型是針對(duì)小衛(wèi)星靶序列，應(yīng)用限制性片段長度多態(tài)性（restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP）分析，RFLP圖譜具有高度個(gè)體特異性，被稱為DNAfingerprint。以小衛(wèi)星核心序列為探針，對(duì)人類基因組DNA作RFLP分析，顯示圖譜類似超市商品條碼，由10~30條譜帶組成，不同個(gè)體間，譜帶數(shù)目不同，譜帶的位置不同。人群中隨機(jī)兩個(gè)體的DNA指紋完全相同的幾率為10-12~10-19。法醫(yī)物證鑒定：①從蛋白質(zhì)水平進(jìn)入DNA水平

②實(shí)現(xiàn)從否定到認(rèn)定的飛躍早期的法醫(yī)DNA分型是針對(duì)小衛(wèi)星靶序列，應(yīng)用限法醫(yī)物證學(xué)--課件1，2，4，5，6，7：均為隨機(jī)個(gè)體。3為兇器上血痕。與現(xiàn)場收集的血痕的DNA指紋一致。1711，2，4，5，6，7：均為隨機(jī)個(gè)體。35

微衛(wèi)星：

DNA重復(fù)單位2~6bp,重復(fù)次數(shù)10~30次，又稱短串聯(lián)重復(fù)序列

(shorttandemrepeats，STR)

>30,000個(gè)每10kb存在一個(gè)STR位點(diǎn)擴(kuò)增片段為100-400bp微衛(wèi)星：重復(fù)單位的長度2CA3AAT4AGAT5AAAGA二核苷三核苷四核苷五核苷重復(fù)單位的長度2CA3AAT4AGAT5AAAGA二核苷三核法醫(yī)學(xué)上使用四核苷酸重復(fù)序列

二、三核苷酸重復(fù)序列會(huì)出現(xiàn)非特異性PCR產(chǎn)物三核苷酸重復(fù)序列與疾病有關(guān)四核苷酸重復(fù)序列位點(diǎn)比二、三核苷酸重復(fù)序列的等位基因更容易彼此區(qū)分法醫(yī)學(xué)上使用四核苷酸重復(fù)序列

二、三核苷酸重復(fù)序列會(huì)出現(xiàn)非（3）STR分型基本技術(shù)

PCR-STR分型技術(shù)：①參照STR重復(fù)序列的側(cè)翼序列設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增STR片段長度等位基因。②擴(kuò)增產(chǎn)物用聚丙烯酰胺(polyacrylamidegel，PAG)凝膠電泳分離，③不同長度等位基因按重復(fù)次數(shù)(allelicladder)參照,以重復(fù)次數(shù)命名等位基因。

▲銀染技術(shù)，電泳分離后用銀染顯帶。

（3）STR分型基本技術(shù)法醫(yī)物證學(xué)--課件

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熒光標(biāo)記PCR引物，擴(kuò)增產(chǎn)物