第三章蛋白質(zhì)的化學(xué)(二)海洋學(xué)院制藥工程系齊興柱蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)是通過四種水平描述的：一級(jí)結(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu)、三級(jí)結(jié)構(gòu)和四級(jí)結(jié)構(gòu)。

一級(jí)結(jié)構(gòu)-Ala-Glu-Val-Thr-Asp-Pro-Gly-

二級(jí)結(jié)構(gòu)《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!

四級(jí)結(jié)構(gòu)三級(jí)結(jié)構(gòu)《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的主要層次一級(jí)結(jié)構(gòu)二級(jí)結(jié)構(gòu)三級(jí)結(jié)構(gòu)四級(jí)結(jié)構(gòu)超二級(jí)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)域

《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!節(jié)蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)（Primarystructure）(一).定義：蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)指多肽鏈中氨基酸的排列順序,又稱為共價(jià)結(jié)構(gòu)或基本化學(xué)結(jié)構(gòu)。維持蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的作用力，即主要的化學(xué)鍵有：肽鍵，有些蛋白質(zhì)還包括二硫鍵。二硫鍵：由多肽鏈2個(gè)半胱氨酸殘基的側(cè)鏈的-SH基之間形成CHCCH2NO…H…SSCHCCH2NO…H…CHCCH2NO…H…SHSHCHCCH2NO…H…《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!肽鍵和肽的結(jié)構(gòu)《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!CHCR1H2NOCHCOOHR2NHC《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!第二節(jié)天然活性肽自然界中有自由存在的活性肽，主要有：1.谷胱甘肽（GSH）：三肽（Glu-Cys-Gly），廣泛存在于生物細(xì)胞中，含有自由的巰基，具有很強(qiáng)的還原性，可作為體內(nèi)重要的還原劑，保護(hù)某些蛋白質(zhì)或酶分子中的巰基免遭氧化，使它們處于活性狀態(tài)。

CHCH2CH2COOHCOH2NCHCH2SHCOHNCH2COOHHNαβγγ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸谷胱甘肽還原性《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!谷胱甘肽的生理功能十分廣泛，其主要功能有：(1)清除自由基、過氧化物、重金屬及黃曲霉毒素等毒物；(2)參與氨基酸(谷氨酰氨、半胱氨酸及其它中性氨基酸)的轉(zhuǎn)運(yùn)；(3)利于鐵的吸收、硒的吸收、鈣的吸收，谷胱甘肽還可以使飼料中的過氧化脂肪酸在吸收時(shí)或吸收后恢復(fù)為正常的脂肪；(4)保護(hù)胃腸道黏膜上皮，防止因炎癥、局部缺血、氧化物質(zhì)等對(duì)腸黏膜的損傷；(5)貯存并提供其組成氨基酸(1尤其是半胱氧酸)；(6)參與蛋白質(zhì)和DNA的合成;(7)作為還原物質(zhì)，利于維生素E、維生素c的還原，維持巰基酶活性，并可作為甘油醛磷酸脫氫酶的輔基，也是乙二醛酶、磷酸丙糖脫氫酶的輔酶；(8)谷胱甘肽在免疫系統(tǒng)抗感染和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用，它對(duì)于淋巴細(xì)胞增殖及正常功能的發(fā)揮起著重要的作用；(9)參與胰島素的代謝，一降低雌激素、前列腺素、白細(xì)胞三烯的活性；(10)作為抗癌、抗腫瘤及治療艾滋病的輔助藥物?！兜鞍踪|(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!據(jù)路透社健康新聞2003年3月24日紐約訊研究人員在本周一召開的美國化學(xué)協(xié)會(huì)年會(huì)上報(bào)告說，由葡萄糖、麥芽糖或者麥芽三糖這樣的糖類與神經(jīng)肽結(jié)合形成糖基化腦啡肽在藥效方面是嗎啡的兩到三倍，而不具備其它一些造成使用者成癮的特性

來自Arizona大學(xué)的RobinPolt介紹了如何將這種簡單的糖分子與神經(jīng)肽相結(jié)合，這類糖基化腦啡肽與嗎啡一樣能夠穿透血腦屏障。Polt告訴路透社記者說，糖基化腦啡肽的效果十分特異，不僅在作用方面十分特異，就是在不作用方面也十分特異。他介紹說，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，這類化合物并不會(huì)造成嗎啡使用后的欣快感，但是它的鎮(zhèn)痛效果卻是嗎啡的兩到三倍。來自Arizona大學(xué)的RobinPolt介紹了如何將這種簡單的糖分子與神經(jīng)肽相結(jié)合，這類糖基化腦啡肽與嗎啡一樣能夠穿透血腦屏障?！兜鞍踪|(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!第三節(jié)蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)研究

蛋白質(zhì)與多肽并無嚴(yán)格的界線，通常是將分子量在6000道爾頓以上的多肽稱為蛋白質(zhì)。Sanger簡介Sanger英國劍橋大學(xué)2次獲諾貝爾獎(jiǎng)（1958，1980）（1）.確定胰島素分子的一級(jí)結(jié)構(gòu)

（2）.雙脫氧鏈終止法DNA序列分析《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!N末端C末端牛核糖核酸酶《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測定1.測定蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的要求：a、樣品必須是均一的，純度應(yīng)在97%以上；b、知道蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量，其誤差允許在10%左右；《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!將肽段順序進(jìn)行疊聯(lián)以確定完整的順序

將肽段分離并測出順序?qū)Ｒ恍粤呀饽┒税被釡y定二硫鍵拆開純蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)順序測定基本方法路線《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!胰島素

-巰基乙醇碘乙酸二硫鍵的斷裂幾條多肽鏈通過二硫鍵交聯(lián)在一起。可在8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍存在下，用過量的-巰基乙醇(還原法)處理，使二硫鍵還原為巰基，然后用烷基化試劑（ICH2COOH）保護(hù)生成的巰基，以防止它重新被氧化?！兜鞍踪|(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!(1)Sanger法DNFB

（二硝基氟苯）反應(yīng)黃色:根據(jù)它在薄層層析或紙電泳中的遷移特性進(jìn)行鑒定在弱堿中發(fā)生親核芳環(huán)取代反應(yīng)《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!(2)（DNS法）丹磺酰氯(二甲氨基萘磺酰氯)反應(yīng)-HCl+氨基酸混合物水解多肽多肽DNS-氨基酸具有熒光《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!(4)氨肽酶法從多肽鏈的N末端依次向內(nèi)切

NH2---aa---aa---aa---aa…….

據(jù)一定時(shí)間內(nèi)釋放出的AA的數(shù)量和種類來推測.《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!CHCR1H2NO…CHCR（n-1）OH2NCHCOOHRnNHNH2H2N+++NHNH2CHCR1H2NONH…CHCR（n-1）ONHCONHCHCOOHRnNH2NH2無水100℃（n-1）個(gè)氨基酸酰肼C-末端氨基酸氨基酸酰肼可與苯甲醛反應(yīng)生成沉淀，與C-末端氨基酸分離《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!酶解法：如胰蛋白酶胰凝乳蛋白酶化學(xué)法：如溴化氰法羥胺法5、裂解多肽鏈成較小的片段《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!糜蛋白酶或稱胰凝乳蛋白酶：R1=Phe,Trp,Tyr時(shí)水解快;R1=Leu，Met和His水解稍慢。R2=Pro時(shí)抑制水解《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!嗜熱菌蛋白酶R2=Phe,Trp,Tyr;Leu，Ile,Met以及其它疏水性強(qiáng)的氨基酸水解速度較快。R2=Pro或Gly水解受抑。R1或R3=Pro水解受抑?！兜鞍踪|(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!6、測定各肽段的氨基酸序列基本方法：

Sanger法Edman降解法DNS-Edman測序法蛋白質(zhì)順序儀測序《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!第二步環(huán)化斷裂反應(yīng)：CF3COOH（強(qiáng)酸性）無水NHCCHR1HNC=OS+CHR2H3NOHN肽C++ATZ（噻唑啉酮苯胺）減少一個(gè)殘基的肽NCCHCR1HNOCHCR2HNOHN肽SPTC-肽H《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁!7、片段重疊法重建完整多肽鏈一級(jí)結(jié)構(gòu)

所得資料：

氨基末端殘基H羧基末端殘基S套肽段第二套肽段

OUS

SEO

PS

WTOU

EOVE

VERL

RLA

APS

HOWT

HO《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁!8、確定半胱氨酸殘基間形成二硫鍵的位置

蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的順序測定完成后，將未拆開二硫鍵的同一種蛋白質(zhì)再一次進(jìn)行專一性的酶解，由此就可以確定完整的蛋白質(zhì)中二硫鍵的位置。《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁!對(duì)角線電泳：

把水解的混合肽段點(diǎn)到濾紙中央，在pH6.5的條件下，進(jìn)行向電泳，肽段將按其大小及電荷的不同分離開來。然后把濾紙暴露在過甲酸蒸氣中，使-S-S-斷裂。這時(shí)每個(gè)含二硫鍵的肽段被氧化成一對(duì)含半胱氨磺酸的肽。濾紙旋轉(zhuǎn)90度角在與向完全相同的條件下進(jìn)行第二向電泳。在這里，大多數(shù)肽段的遷移率未變，并將位于濾紙的一條對(duì)角線上，而含半胱氨磺酸的肽段比原來含二硫鍵的肽小而負(fù)電荷增加，結(jié)果它們都偏離了對(duì)角線。肽斑可用茚三酮顯色確定?！兜鞍踪|(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁!蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)分析例題1:從真菌中分離得到一種八肽,氨基酸分析表明它是由Lys、Lys、Tyr、Phe、Gly、Ser、Ala、Asp組成。此肽與FDNB作用，進(jìn)行酸水解，釋放出DNP-Ala。用胰蛋白酶裂解產(chǎn)生兩個(gè)三肽（Lys、Ala、Ser）和（Gly、Phe、Lys）以及一個(gè)二肽。此肽與糜蛋白酶反應(yīng)即放出自由的天冬氨酸，一個(gè)四肽（Lys、Ser、Phe、Ala）及一個(gè)三肽。此三肽與FDNB反應(yīng)隨后用酸水解產(chǎn)生DNP-Gly，試寫出此八肽的氨基酸序列。《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁!蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)分析例題1答案:AlaSerLysPheGlyLysTyrAsp蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)分析例題2答案:Ala-Cys-Phe-Pro-Lys-Arg-Trp-Cys-Arg-Arg-Val-CysSSCys-Tyr-Cys-Phe-CysSSSS《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁!三.蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁!《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁!一級(jí)結(jié)構(gòu)(primarystructure)二級(jí)結(jié)構(gòu)(secondarystructure)超二級(jí)結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域三級(jí)結(jié)構(gòu)(tertiarystructure)四級(jí)結(jié)構(gòu)(quaternarystructure)高級(jí)結(jié)構(gòu)說明：1.實(shí)際上在二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)之間還有超二級(jí)結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域2個(gè)結(jié)構(gòu)層次。2.不是所有蛋白質(zhì)都有四級(jí)結(jié)構(gòu)3.二、三、四級(jí)結(jié)構(gòu)都是空間立體結(jié)構(gòu)4.蛋白質(zhì)越復(fù)雜，其空間立體結(jié)構(gòu)也越復(fù)雜《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁!（二）肽鍵與肽鏈1.肽鍵（酰胺鍵）：一個(gè)氨基酸的α-COOH和相鄰的另一個(gè)氨基酸的α-NH2脫水形成共價(jià)鍵。如下圖：CHCOOH+R1H2NCHCOOHR2H2NCHCR1H2NOCHCOOHR2NHH2OH2O《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁!2.氨基酸借肽鍵連接起來叫肽，肽是一大類物質(zhì).1）肽的命名：某氨基酰某氨基?！嘲被?）二肽；寡肽；多肽3）氨基酸借肽鍵連成長鏈，稱為肽鏈，肽鏈兩端有自由-NH2和-COOH，自由-NH2端稱為N-末端（氨基末端）自由-COOH端稱為C-末端（羧基末端）；4）構(gòu)成肽鏈的氨基酸已殘缺不全，稱為氨基酸殘基；5）肽鏈中的氨基酸的排列順序，一般-NH2端開始，由N指向C，即多肽鏈有方向性，N端為頭，C端為尾。一般習(xí)慣把氨基寫在左端，羧基寫在右端;注意氨基酸殘基順序的差別：如：甘-丙；丙-甘?！兜鞍踪|(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁!肽鍵的酰胺氮和羰基氧之間發(fā)生共振相互作用產(chǎn)生幾個(gè)重要結(jié)果:1.肽鍵的實(shí)質(zhì)是介于圖A、B兩種極端形式的平均中間態(tài)，即圖C，所以肽鍵具有部分雙鍵的性質(zhì)。2.限制繞肽鍵的自由旋轉(zhuǎn)3.組成肽基的4個(gè)原子和2個(gè)相鄰的Cα原子傾向于共平面,稱酰胺平面或肽平面.《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁!《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁!2.促甲狀腺素釋放激素：三肽（焦谷氨酰組氨酰脯氨酸），可促進(jìn)甲狀腺素的釋放。

3.短桿菌素S：環(huán)十肽，含有D-苯丙氨酸、鳥氨酸，對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌有破壞作用，主要作用于細(xì)胞膜。

4.青霉素：含有D—半胱氨酸和D—纈氨酸的二肽衍生物。主要破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁粘肽的合成引起溶菌。

《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第38頁!5.牛催產(chǎn)素與加壓素：均為九肽，分子中含有一對(duì)二硫鍵，兩者結(jié)構(gòu)類似。前者第九位為Gly或Lys或Phe，后者為Arg。前者可刺激子宮的收縮，促進(jìn)分娩。后者可促進(jìn)小動(dòng)脈收縮，使血壓升高，也有抗利尿作用，參與水、鹽代謝的調(diào)節(jié)。

牛催產(chǎn)素: SS Cys·Tyr·Ile·Gln·Asn·Cys·Pro·Leu·Gly-NH2牛加壓素:7.腦啡肽：為五肽，具有鎮(zhèn)痛作用。SS Cys·Tyr·Phe·Gln·Asn·Cys·Pro·Ary·Gly-NH26.舒緩激肽：促進(jìn)血管舒張，促進(jìn)水、鈉離子的排出。《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第39頁!《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第40頁!F.Frederick

Sanger

(1918～)國生物化學(xué)家。1918年

8月13日生于格洛斯特郡倫德庫姆。曾在劍橋大學(xué)學(xué)習(xí)化學(xué)，1943年以研究賴氨酸的課題獲博士學(xué)位。曾任英國醫(yī)學(xué)委員會(huì)分子生物學(xué)研究所蛋白質(zhì)化學(xué)實(shí)驗(yàn)室主任。1954年當(dāng)選為英國皇家學(xué)會(huì)會(huì)員。現(xiàn)任劍橋大學(xué)教授。

桑格在50年代以前，主要研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。經(jīng)過多年的研究，找到一種試劑，名為2，4－二硝基氟化苯（桑格試劑），用以測定胰島素的分子結(jié)構(gòu)，獲得成功。后經(jīng)10年的努力，應(yīng)用逐段分解和逐步遞增的方法，測定出胰島素兩條肽鏈分別含21個(gè)和30個(gè)氨基酸的排列順序和位置，于1955年測定了胰島素的一級(jí)結(jié)構(gòu)，因此獲1958年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。60年代后，桑格的工作轉(zhuǎn)向核酸方面，致力于對(duì)核糖核酸和脫氧核糖核酸結(jié)構(gòu)的分析研究。他利用酶的生物活性，用生物學(xué)的處理方法，正確地確定了核糖核酸中每種堿基的排列順序和脫氧核糖核酸中核苷酸的排列順序。他還發(fā)展了脫氧核糖核酸的精確快速分析法。他用此法于1977年成功地測定了細(xì)菌病毒ΦΧ-174脫氧核糖核酸分子的全部共5386個(gè)核苷酸的排列順序。桑格因設(shè)計(jì)出一種測定

DNA內(nèi)核苷酸排列順序的方法而與W.吉爾伯特、P.伯格共獲1980年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第41頁!蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的存在有三種形式:1.無分支的開鏈多肽;2.有分支的開鏈多肽;3.環(huán)狀多肽《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第42頁!

2.測定一級(jí)結(jié)構(gòu)的基本原理和方法基本策略：

氨基酸順序直測法＋片段重疊法基本步驟：(1)測定末端氨基酸數(shù)目，確定蛋白質(zhì)分子是由幾條肽鏈構(gòu)成的；(2)拆分蛋白質(zhì)分子的多肽鏈，斷開多肽鏈內(nèi)二硫鍵并分離出每條肽鏈。(3)將肽鏈完全水解，測定每條多肽鏈的氨基酸組成(4)鑒定多肽鏈N－末端、C－末端氨基酸殘基(5)至少用兩種方法將多肽鏈水解成較小的片段；(6)分離并測定各肽段的氨基酸序列；(7)片段重疊法重建完整多肽鏈一級(jí)結(jié)構(gòu)；(8)確定半胱氨酸殘基間形成二硫鍵交聯(lián)橋的位置。《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第43頁!1、測定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈的數(shù)目。通過測定末端氨基酸殘基的摩爾數(shù)與之間的關(guān)系，即可確定多肽鏈的數(shù)目。2、拆分蛋白質(zhì)的多肽鏈，斷開多肽鏈內(nèi)二硫鍵《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第44頁!3、分析每一條多肽鏈的氨基酸組成經(jīng)分離、純化的多肽鏈一部分樣品進(jìn)行完全水解，測定它的氨基酸組成，并計(jì)算出氨基酸成分的分子比或各種殘基的數(shù)目。4、鑒定多肽鏈N－末端、C－末端氨基酸殘基

Sanger法（二硝基氟苯反應(yīng)）DNS法（丹磺酰氯反應(yīng)）Edman法（異硫氰酸苯脂反應(yīng)）氨肽酶法肼解法羧肽酶法

LiBH4還原法N端C端《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第45頁!（ＨＣl中）ＤＮＰ－多肽《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第46頁!(3)Edman法（異硫氰酸苯脂反應(yīng)）PITC無N-端氨基的剩余部分用層析法分離《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第47頁!C-未端的測定方法1.肼解法

是目前最好的方法

用色譜法鑒定

多肽與肼在無水條件下加熱，C-端氨基酸即從肽鏈上解離出來，其余的氨基酸則變成肼化物。肼化物能夠與苯甲醛縮合成不溶于水的物質(zhì)而與C-端氨基酸分離。

注:末端若為半胱氨酸、天冬酰胺、精氨酸在肼解過程中易被破壞?！兜鞍踪|(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第48頁!3.LiBH4還原法

多肽+LiBH4

水解

α-氨基醇+

n氨基酸含C—端氨基酸,用層析法鑒定2.羧肽酶的方法

是目前最有效也是最常用的方法。羧肽酶是一類肽鏈外切酶，它專一地從肽鏈的C－端依次切下一個(gè)氨基酸殘基，釋放出游離的氨基酸。據(jù)一定時(shí)間內(nèi)切下的數(shù)量來測氨基酸的數(shù)量?！兜鞍踪|(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第49頁!胰蛋白酶R1=Lys和Arg側(cè)鏈(即Lys和Arg的羧基參與形成的肽鍵)（專一性較強(qiáng)，水解速度快）。R2=Pro時(shí)抑制水解《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第50頁!胃蛋白酶R1和R2＝Phe,Trp,Tyr;Leu以及其它疏水性氨基酸水解速度較快。R1=Pro水解受抑最適PH=2《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第51頁!化學(xué)法：可獲得較大的肽段溴化氰水解法：它能選擇性地切割由甲硫氨酸（Met）的羧基所形成的肽鍵。羥胺（NH2OH）：專一性斷裂-Asn-Gly-之間的肽鍵。也能部分裂解-Asn-Leu-之間的肽鍵以及-Asn-Ala-之間的肽鍵?！兜鞍踪|(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第52頁!Edman化學(xué)降解法N=C=S+CHCR1H2NOCHCR2HNOHN肽PH=9NHCCHCR1HNOCHCR2HNOHN肽S步偶聯(lián)反應(yīng)：PTC-肽（苯氨基硫甲酰肽）《蛋白質(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第53頁!第三步環(huán)化反應(yīng)：NHCCHR1HNC=OS+ATZH2O1mol/LHClNHCCHCR1HNOOHS[]PTC-氨基酸NC=CHR1NHO=CSPTH-氨基酸（苯乙內(nèi)酰硫脲氨基酸）注：1.PTH-氨基酸可用各種層析技術(shù)分離.2.反應(yīng)的多肽的羧基與不溶性樹脂偶聯(lián)，這樣多肽掛在樹脂上，便于前一輪反應(yīng)后剩下多肽的回收?！兜鞍踪|(zhì)的化學(xué)二》課件共61頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第54頁!末端殘基HS末端肽段HOWT

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