第三章消毒滅菌與實驗室

生物安全

DisinfectionandBiosafety病原生物學(xué)教研室第一節(jié)消毒滅菌的常用術(shù)語滅菌(sterilization)

利用理化因素殺死物體上所有微生物的過程，包括芽胞/病毒/真菌/細(xì)菌等。消毒(disinfection)

殺死物體或環(huán)境中病原微生物的措施，并不一定能殺死細(xì)菌芽胞或非病原微生物。防腐(antisepsis)：體外防止或抑制細(xì)菌生長繁殖的方法。清潔

(cleaning)：

通過除去塵埃和一切污穢以減少微生物數(shù)

量的過程。無菌(asepsis):不存在任何活菌,即滅菌結(jié)果無菌操作(aseptictechnique)：防止細(xì)菌進入人體或其他物品的操作技術(shù)

Ⅰ

焚燒：

Ⅱ

燒灼：

Ⅲ

干烤：常規(guī)160~180℃,2h

Ⅳ

紅外線：（一）熱力滅菌法1、干熱滅菌法脫水和分子變性。一般繁殖體在干燥狀態(tài)下80~100℃1h，芽胞160~170℃2h被殺死。電熱恒溫干燥箱2、濕熱滅菌法①

巴氏消毒法(pasteurization)

61.1~62.8℃30min；71.7℃15~30s，牛奶、酒類消毒。②

煮沸法：一般細(xì)菌100℃5min,芽胞1~2h；加入2％碳酸鈉可提高沸點，又可防止金屬器皿生銹，用于消毒食具/刀剪/注射器。③

流動蒸汽消毒法：100℃蒸汽15~30min殺死細(xì)菌，但芽胞不能全部殺滅。④

間歇蒸汽滅菌法

100℃蒸汽15~30min殺死繁殖體，孵箱37℃過夜；如此重復(fù)三次以上。適于不耐高熱的含糖、牛奶等培養(yǎng)基。⑤

高壓蒸汽滅菌法

103.4kPa蒸汽壓，121.3℃，15~20min.適于培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等耐高溫、耐濕熱物品的滅菌。不能殺滅朊粒。2、濕熱滅菌法

濕熱比干熱滅菌好的原因1、細(xì)菌蛋白質(zhì)在濕熱中易于凝固變性。2、濕熱穿透力較強。3、濕熱蒸氣有潛在熱效應(yīng)，可迅速提高被滅菌物體的溫度。（二）輻射滅菌法電離輻射非電離輻射

2、非電離輻射

（1）紫外線

改變DNA分子構(gòu)型，干擾DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄穿透力弱，只能用于手術(shù)室、傳染病房、細(xì)菌實驗室等的空氣消毒。（2）日光

能殺死大部分的微生物（3）微波

非金屬器械(玻璃陶瓷塑料等)消毒；必須有一定量水才有滅菌效果。（三）濾過除菌法主要適合于不耐高溫滅菌的血清、毒素、抗生素以及空氣的等的除菌。不能濾過支原體、衣原體和病毒。層流室（四）超聲波消毒法

原理：空穴效應(yīng)

用途：裂解細(xì)菌，尤其對G+更敏感。主要用于粉碎細(xì)胞，提取細(xì)胞組分或制備抗原等。（五）干燥與低溫抑菌法干燥法常用于保存食物低溫可使細(xì)菌的新陳代謝減慢，故常用作保存細(xì)菌菌種；冷凍真空干燥法是目前保存菌種的最好方法。

（一）高效消毒劑

(high-leveldisinfectants)

1.含氯消毒劑；

2.過氧化物消毒劑；

3.醛類消毒劑；

4.環(huán)氧乙烷（二）中效消毒劑

(intermediate-leveldisinfectants)

1、含碘消毒劑；

1)碘酊

2)碘伏

2、醇類消毒劑1)乙醇

2)異丙醇第三節(jié)消毒滅菌的應(yīng)用（一）高危器械物品；

所有這些物品都應(yīng)該滅菌。（二）中危器械物品；采用消毒即可。（三）低危器械物品；

一般用后清洗、消毒即可。（四）快速周轉(zhuǎn)的醫(yī)療器械；一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌影響消毒滅菌的因素消毒劑的性質(zhì)、濃度與作用時間微生物的種類與數(shù)量溫度酸堿度有機物第四節(jié)、實驗室生物安全

實驗室安生物全、生物武器、生物恐怖、重大傳染病的暴發(fā)流行等，均是人類所面臨的最現(xiàn)實的病原微生物安全問題。病原微生物實驗室生物安全的核心是防擴散和防感染。（一）病原微生物分類第一類：能夠引起人類或者動物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。第二類：能夠引起人類或者動物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。（二）生物安全實驗室防護水平分級BSL-1指普通建筑結(jié)構(gòu)的實驗室；BSL-2應(yīng)配備負(fù)壓生物安全柜和高壓蒸汽滅菌器等設(shè)備；BSL-3實驗室房間保持負(fù)壓，有獨立的送排風(fēng)系統(tǒng)，排除的氣需經(jīng)高效過濾器過濾。BSL-4防護級別最高，配備生命支持系統(tǒng)，對實驗室內(nèi)部設(shè)施和外部環(huán)境都有更特殊的要求。生物安全防護水平(biosafetylevelBSL)級別處理對象一級對人體、動植物或環(huán)境危害較低，不具有對健康成人、動植物致病的致病因子。二級對人體、動植物或環(huán)境具有中等危害或具有潛在危險的致病因子，對健康成人、動植物和環(huán)境不會造成嚴(yán)重危害，具有有效的預(yù)防和治療措施。三級對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性，主要通過氣溶膠使人類傳染上嚴(yán)重的甚至是致命的疾病，或?qū)又参锖铜h(huán)境具有高度危害的致病因子。通常有預(yù)防治療措施。四級對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明或未知的危險的致病因子。沒有預(yù)防治療措施。病原微生物實驗室分級

BSL一、二級實驗室不得從事高致病性病原微生物實驗活動。

從事高致病性病原微生物相關(guān)實驗活動應(yīng)當(dāng)有２名以上的工作人員共同進行。同一個獨立安全區(qū)域內(nèi)，只能同時從事一種高致病性病原微生物的相關(guān)實驗活動。(三)、實驗室感染的控制

以及監(jiān)督和法律責(zé)任

工作人員應(yīng)掌握實驗室技術(shù)規(guī)范、操作規(guī)程、生物安全防護知識和實際操作技能。應(yīng)有符合要求的防護用品，建立健康檔案；進行預(yù)防接種。

實驗室應(yīng)有科學(xué)、嚴(yán)格的管理制度，定期對實驗室設(shè)施設(shè)備、材料等進行檢查、維護和更新，應(yīng)對廢水、廢氣以及其他廢物進行合理處置，防止環(huán)境污染。復(fù)習(xí)思考題消毒滅菌的常用術(shù)語和常用方法。簡述濕熱滅菌的原理和用途。濕熱滅菌有哪些方法？在溫度和時間相同的條件下，為什么濕熱滅菌效果較干熱滅菌效果好？簡述紫外殺菌的作用機制。常用化學(xué)消毒劑有哪些？簡述其用途。消毒劑的主要種類、濃度及用途1酚類：作用：菌體蛋白凝固；損傷細(xì)胞膜；滅活酶類濃度：石炭酸為3%-5%、來蘇兒為2%

用途：地面、器具表面和皮膚的消毒2醇類：作用機制：使菌體蛋白變性與凝固；干擾細(xì)菌代謝濃度：乙醇70%-75%用途：用于皮膚的消毒和體溫計等的浸泡

3重金屬鹽類：使細(xì)菌發(fā)生變性和沉淀；酶活性喪失

（1）2%紅汞：皮膚、粘膜和小創(chuàng)傷

（2）0.05-0.01%升汞：非金屬器皿4氧化劑：氧化作用；使蛋白質(zhì)變性

（1）0.1%高錳酸鉀：皮膚、尿道、水果（2）3%過氧化氫：創(chuàng)傷、皮膚粘膜（3）2%-2.5%碘酒：皮膚消毒（4）0.2ppm-0.5ppm氯：飲水和游泳池

（5）10%-20%漂白粉：地