實驗名稱：血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳（一）實驗?zāi)康模?.學(xué)習(xí)醋酸纖維薄膜電泳原理。2.掌握血清醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白質(zhì)的技術(shù)。3.熟悉血清蛋白組分定量方法，并確定血清中蛋白與球蛋白的比值。（二）實驗原理：血清絕大多數(shù)蛋白質(zhì)的等電點在～。在的巴比妥緩沖液中，血清蛋白全部帶負(fù)電荷，在直流電場中向正電極移動，移動的速度與帶電蛋白質(zhì)顆粒所帶電荷成正比，與蛋白質(zhì)顆粒的大小成反比。如果樣品點在醋酸纖維薄膜的同一條線上，電泳相同的時間，不同的蛋白質(zhì)顆粒移動的距離不同，通過染色，薄膜條上的血清的蛋白質(zhì)被分離成不同的條帶。將此薄膜條透明，可以進(jìn)行掃描，或?qū)⑸珟Ъ粝?，將顏色洗脫，進(jìn)行比色，都能獲得各色帶所含蛋白質(zhì)占血清總蛋白的百分比，并可計算血清中清蛋白／球蛋白比值，正常值為～。（三）實驗材料與儀器：1．實驗儀器材料：（1）醋酸纖維薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）（2）人血清；（3）燒杯及培養(yǎng)皿數(shù)只；（4）x光片；（5）鑷子；（6）試管六只；（7）電泳槽；（8）直流穩(wěn)壓電泳儀；（9）7220型分光光度計；（10）剪刀2．實驗試劑：（1）巴比妥-巴比妥鈉緩沖液：取兩個大燒杯，分別稱取巴比妥鈉和巴比妥溶解于500ml蒸餾水中；（2）染色液，可反復(fù)使用；（3）漂洗液：取乙醇45ml，冰醋酸10ml，混勻；（4）浸出液：LNaOH溶液；（四）實驗步驟：1．準(zhǔn)備和點樣取一條醋酸纖維薄膜，侵入緩沖液中，完全侵泡后，用鑷子輕輕取出，將薄膜無光澤的一面向上，平放在干凈濾紙上，再放一張干凈濾紙吸取多余的緩沖液。用X光片蘸取少量血清，然后輕輕于距離薄膜端處接觸，樣品即成一條線突于纖維膜上。待血清透入膜內(nèi)，將薄膜放在電泳槽上。2．電泳接通電源，設(shè)定電泳電壓為100V，通電50min.3．染色漂洗電泳完畢后，將薄膜侵泡在染色液中5min～10min.取出，用漂洗液漂至背景無色。4．定量取出六只試管，將漂凈的薄膜用濾紙吸干，剪下薄膜上各條蛋白質(zhì)色帶，另取一條與各區(qū)帶相近似寬的無蛋白質(zhì)附著的空白薄膜，分別侵泡于溶液中，然后用7200型分光光度計在650nm處比色，以空白條薄膜洗出液為空白調(diào)零，測定各管的吸光度。(五)實驗數(shù)據(jù)記錄：設(shè)各部分吸光率為、、、、白蛋白比率＝＝;球蛋白比率＝＝球蛋白比率＝＝;球蛋白比率＝＝球蛋白比率＝＝(六)實驗討論：1.以血清為樣品，和濾紙相比，用醋酸纖維薄膜電泳的優(yōu)點是用時少，效果較明顯。2.為什么用pH為的巴比妥緩沖溶液來侵泡醋酸纖維薄膜，是因為人體正常血液的pH值為7..35～，血清蛋白在堿性條件下帶負(fù)電荷，在直流電場中向正極流動。3.本次試驗結(jié)果中，球蛋白測得的含量偏低，原因可能是在剪裁電泳帶時遺漏了一條薄膜沒有剪下或剪裁時剪到其他蛋