生化檢測(cè)技術(shù)健康大講堂---檢驗(yàn)專題第五講檢驗(yàn)科生化檢測(cè)技術(shù)健康大講堂---檢驗(yàn)專題第五講檢驗(yàn)科生化檢測(cè)技術(shù)制備離心差速密度梯度分析離心沉降速度沉降平衡等密度區(qū)帶吸收光譜發(fā)射光譜火焰光度、熒光散射光譜—比濁氣相高效液相離心電化學(xué)光譜電泳層析醋酸纖維薄膜瓊脂糖凝膠聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦雙向電泳電位分析法離子選擇電極（直接、間接）玻璃膜Na+、K+、氣敏電極NH3、CO2酶電極尿酶電極電導(dǎo)法電容量法生化檢測(cè)技術(shù)制備離心吸收光譜氣相離心電化學(xué)光譜電泳層析醋酸纖主要內(nèi)容光譜分析技術(shù)電化學(xué)分析技術(shù)影響因素交叉污染結(jié)果審核報(bào)告主要內(nèi)容光譜分析技術(shù)電化學(xué)分析技術(shù)影響因素交叉污染結(jié)果審據(jù)儀器的結(jié)構(gòu)原理不同連續(xù)流動(dòng)式（管道式如SMA系列）

分立式（BECKMANCX；Hitachi-7系列）離心式（Encore、Cobas）干片式四類據(jù)儀器的復(fù)雜程度及功能小型、中型、大型據(jù)儀器的自動(dòng)化程度全自動(dòng)和半自動(dòng)自動(dòng)生化分析儀類型據(jù)儀器的結(jié)構(gòu)原理不同自動(dòng)生化分析儀類型三種生化儀的比較三種生化儀的比較

貝克曼DxC800貝克曼DxC800

拜爾2400拜爾2400全自動(dòng)生化分析儀基本結(jié)構(gòu)

樣品系統(tǒng)試劑系統(tǒng)條形碼適讀系統(tǒng)反應(yīng)系統(tǒng)清洗系統(tǒng)比色系統(tǒng)程序控制系統(tǒng)全自動(dòng)生化分析儀基本結(jié)構(gòu)樣品系統(tǒng)分析系統(tǒng)加樣系統(tǒng)清洗系統(tǒng)控制系統(tǒng)自動(dòng)生化分析儀樣品試劑系統(tǒng)軟件數(shù)據(jù)傳輸反應(yīng)比色數(shù)據(jù)處理水、洗液清洗針生化分析儀基本結(jié)構(gòu)分析系統(tǒng)加樣系統(tǒng)清洗系統(tǒng)控制系統(tǒng)自動(dòng)生化分析儀樣品系統(tǒng)軟件反加樣系統(tǒng)反應(yīng)比色池光電檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)控制器單元前提核心功能的擴(kuò)展保證全自動(dòng)生化分析儀基本結(jié)構(gòu)示意圖附件：供排水電源供應(yīng)加樣系統(tǒng)反應(yīng)比色池光電檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)控制器單元前提核心功樣品盤進(jìn)樣裝置(樣本杯/管、樣本架、進(jìn)樣軌道)分配加樣裝置(注射器、步進(jìn)馬達(dá)、加樣臂、樣品探針)稀釋裝置(對(duì)樣本進(jìn)行預(yù)稀釋)樣品探針(液面感應(yīng)器、阻塞報(bào)警、防撞報(bào)警、精度1ul)樣品（Sample）系統(tǒng)樣品盤樣品（Sample）系統(tǒng)樣品(Sample)系統(tǒng)

樣品(Sample)系統(tǒng)試劑倉(cāng)（冷藏，提高在線試劑穩(wěn)定性）試劑轉(zhuǎn)盤（與試劑倉(cāng)結(jié)合）試劑瓶（配套試劑常有條形碼）分配加液裝置（注射器、步進(jìn)馬達(dá)、加樣臂、試劑探針）試劑探針（液面感應(yīng)器、對(duì)試劑預(yù)加溫、阻塞報(bào)警、防撞報(bào)警、精度1ul）試劑（Sample）系統(tǒng)試劑倉(cāng)（冷藏，提高在線試劑穩(wěn)定性）試劑（Sample）系統(tǒng)試劑(Reagent)系統(tǒng)

試劑(Reagent)系統(tǒng)試劑(Reagent)系統(tǒng)

試劑(Reagent)系統(tǒng)掃描系統(tǒng)信號(hào)整形譯碼器條形碼（Barcode）識(shí)讀系統(tǒng)掃描系統(tǒng)條形碼（Barcode）識(shí)讀系統(tǒng)反應(yīng)盤（轉(zhuǎn)盤）反應(yīng)杯或比色杯石英玻璃、硬質(zhì)玻璃、丙烯酸塑料混合裝置攪拌棒--特氟隆不粘涂層溫控裝置(37℃)

空氣浴恒溫水浴循環(huán)式恒溫液循環(huán)間接加熱式反應(yīng)（Reaction）系統(tǒng)反應(yīng)盤（轉(zhuǎn)盤）反應(yīng)（Reaction）系統(tǒng)生化檢測(cè)技術(shù)課件探針和攪拌棒清洗激流式、涌泉式比色杯清洗吸液針、吐液針、擦拭刷清洗液

堿性液、酸性液、水 清洗（Wash）系統(tǒng)探針和攪拌棒清洗清洗（Wash）系統(tǒng)清洗(Wash)系統(tǒng)

清洗(Wash)系統(tǒng)光源比色杯單色器檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理及顯示比色系統(tǒng)光源比色系統(tǒng)

鹵素（溴、碘鎢）燈

工作波長(zhǎng)325-800nm

使用壽命短1000-1500h

氙燈

工作波長(zhǎng)285-750nm

使用壽命長(zhǎng)，數(shù)年光源光源比色杯

比色杯=反應(yīng)杯比色杯光徑

0.5-0.7cm省試劑部分儀器可自動(dòng)校正為1cm比色杯材料石英玻璃、硬質(zhì)玻璃、丙烯酸塑料自動(dòng)清洗比色杯比色杯=反應(yīng)杯

濾光片、棱鏡、光柵干涉濾光片

光學(xué)干涉濾光片是建立在光學(xué)薄膜干涉原理上的精密光學(xué)濾光器件。通過(guò)設(shè)計(jì)和改變膜系的結(jié)構(gòu)和膜層的光學(xué)參數(shù)，可以獲得各種光譜特性，用于控制、調(diào)整和改變光波的透射、反射、吸收、偏振或相位狀態(tài)。光柵

光柵是根據(jù)光的衍射原理進(jìn)行分光的，具有可用波長(zhǎng)范圍寬，色散近于線性，譜線均勻并且光能損失少。平面反射光柵是生化分析儀最常用的分光元件。但光柵單色器有次級(jí)光譜干擾，同時(shí)雜散光影響也較棱鏡大。光柵光譜的譜線隨刻線的距離減少而增大，因此單位長(zhǎng)度內(nèi)的刻線數(shù)是光柵單色器的重要指標(biāo)。光柵分光可分為全息反射式光柵和蝕刻式凹面光柵兩種。單色器

濾光片、棱鏡、光柵單色器干涉濾光片與光柵的比較干涉濾光片光能量利用率高易于維護(hù)、更換340nm易氧化光柵單色性好，但光能量損失大波長(zhǎng)連續(xù)，可任選維護(hù)更換復(fù)雜，須專業(yè)工程師干涉濾光片與光柵的比較干涉濾光片光柵前分光特點(diǎn)；光源經(jīng)一系列透鏡反射后成為單色光通過(guò)樣本，因此只能進(jìn)行相同波長(zhǎng)項(xiàng)目的檢測(cè)。后分光特點(diǎn)：可連續(xù)不斷檢測(cè)不同波長(zhǎng)的反應(yīng)，適用于多項(xiàng)目檢測(cè)，目前全自動(dòng)生化儀多用此法分光。前分光特點(diǎn)；后分光特點(diǎn)：光電接收器光電池光電管光電倍增管數(shù)據(jù)處理及顯示前置放大器A/D轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)處理顯示分析檢測(cè)系統(tǒng)光電接收器數(shù)據(jù)處理及顯示分析檢測(cè)系統(tǒng)控制系統(tǒng)

微處理器和主機(jī)電腦顯示器系統(tǒng)及配套軟件采用Windows-NT或Windows界面人機(jī)對(duì)話數(shù)據(jù)傳輸通過(guò)RS232C等數(shù)據(jù)接口與其它計(jì)算機(jī)、打印機(jī)等設(shè)備傳輸數(shù)據(jù)控制系統(tǒng)微處理器和主機(jī)電腦主機(jī)電腦顯示界面

主機(jī)電腦顯示界面生化檢測(cè)技術(shù)課件方法學(xué)檢測(cè)原理

光譜分析技術(shù)生化檢驗(yàn)反應(yīng)原理分析監(jiān)測(cè)方法方法學(xué)檢測(cè)原理光譜分析技術(shù)二、臨床生化檢驗(yàn)反應(yīng)原理酶偶聯(lián)法

---脫氫酶法ALTASTLDH-LMBHBDHCKBUN340nm---氧化酶法GLUTCTGUACr550nm色原底物法

α-AMYALPGGT405nm化學(xué)法

TBILDBILCaMgTP

ALBCr630nm免疫比濁法

IgGAMC3C4CRPASORFAPOAAPOB340nm二、臨床生化檢驗(yàn)反應(yīng)原理酶偶聯(lián)法

NADH和NADPH在340nm有最大吸收峰，而NAD+和NADP+在340nm無(wú)吸收峰，利用其偶聯(lián)的脫氫酶(工具酶)反應(yīng)，根據(jù)340nm吸光度的變化，可以測(cè)定物質(zhì)的濃度或活性。目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定的臨床項(xiàng)目有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、α-HBDH、Glu（己糖激酶法）、UREA、NH4+

、CO2等。NAD+－NADH(NADP+－NADPH)指示系統(tǒng)：NADH和NADPH在340nm有最大吸收峰，而ALT為例：R1：NADH、乳酸脫氫酶（LDH）R2：L-丙氨酸、α-酮戊二酸

ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸

LDH丙酮酸+NADH+H+→L-乳酸+NAD++H2ONAD+－NADH(NADP+－NADPH)指示系統(tǒng)：ALT為例：NAD+－NADH(NADP+－NADPH)指生化檢測(cè)技術(shù)課件

p-NP和p-NA在405nm有特征性吸收峰，根據(jù)405nm吸光度的變化，可以測(cè)定物質(zhì)的濃度或活性。目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定的臨床項(xiàng)目有ALP、r-GT、AMY等。p-NP和p-NA指示系統(tǒng)：p-NP和p-NA在405nm有特征性吸收峰，根據(jù)4ALP為例：R1：AMP緩沖液、MgCl2

R2：對(duì)硝基苯磷酸鹽

ALP對(duì)硝基苯磷酸鹽+H2O→磷酸鹽+對(duì)硝基苯酚p-NP和p-NA指示系統(tǒng)：ALP為例：p-NP和p-NA指示系統(tǒng)：H2O2偶聯(lián)的指示系統(tǒng)：

H2O2在過(guò)氧化物酶的作用下，可使單一個(gè)或成對(duì)的無(wú)色的色素原氧化成有色的色素，導(dǎo)致某一波長(zhǎng)吸光度的增加，因此可用來(lái)測(cè)定物質(zhì)的濃度或活性。目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定的臨床項(xiàng)目有TC、TG、HDL-C、LDL-C、Glu（氧化酶法）、Cr、UA等。H2O2偶聯(lián)的指示系統(tǒng)：H2O2在過(guò)氧化物酶的作H2O2偶聯(lián)的指示系統(tǒng)：GLU為例：R1：4-氨基安替吡啉、抗壞血酸氧化酶R2：葡萄糖氧化酶、過(guò)氧化物酶、酚。

GOD葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖酸+H2O2

POD2H2O2+4-氨基安替吡啉+酚→醌亞胺+4H2O

H2O2偶聯(lián)的指示系統(tǒng)：其他顯色反應(yīng)：TP為例：

蛋白質(zhì)中的肽鍵在堿性溶液中與銅離子作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物，導(dǎo)致540nm吸光度的增加，增加程度與蛋白質(zhì)的含量成正比。

堿性條件肽鍵+Cu2+→紫紅色絡(luò)合物

其他顯色反應(yīng)：TP為例：抗原抗體反應(yīng)指示系統(tǒng)：特異性抗體與抗原(待測(cè)物質(zhì))在相應(yīng)的緩沖環(huán)境下反應(yīng)生成抗原抗體復(fù)合物，形成一定的濁度，導(dǎo)致特定波長(zhǎng)透光率的改變。在抗體過(guò)剩的前提下，改變程度與抗原濃度成正比。目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定的臨床項(xiàng)目有apoAI、apoB、Lp(a)、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP等?？乖贵w反應(yīng)指示系統(tǒng)：特異性抗體與抗原(待測(cè)物質(zhì))抗原抗體反應(yīng)指示系統(tǒng)：載脂蛋白為例：R1：磷酸鹽緩沖液pH7.5,表面活性劑，防腐劑，穩(wěn)定劑；R2：羊抗人apoAl（apoB）抗血清，防腐劑，穩(wěn)定劑。抗原(血清中apoAl,apoB)+抗體(R2)

緩沖環(huán)境

>抗原抗體免疫復(fù)合物?？乖贵w反應(yīng)指示系統(tǒng)：載脂蛋白為例：光譜分析技術(shù)光譜分析技術(shù)生化檢測(cè)技術(shù)課件透光度T與吸光度A的關(guān)系IinIoutT=Iout/IinA=-lgT透光度T與吸光度A的關(guān)系IinIoutT=Iout/I方法：吸收光譜法：比色分析基于溶液對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的一種分析方法。

比濁法：通過(guò)監(jiān)測(cè)物質(zhì)對(duì)光的散射透射強(qiáng)度來(lái)測(cè)定的方法，比濁法是一種濁度測(cè)定，而不是比色測(cè)定。

檢測(cè)方法方法：檢測(cè)方法分光光度法

分光光度法依據(jù)的原理為某樣品，如：病人樣品、質(zhì)控品或定標(biāo)液，和一個(gè)或多個(gè)化學(xué)試劑混和后，產(chǎn)生某物質(zhì)，該物質(zhì)具有對(duì)特定波長(zhǎng)吸收光的能力。該物質(zhì)稱為發(fā)色團(tuán)（CHROMOPHORE）。

郎伯-比爾定律

發(fā)色團(tuán)吸收的光量和欲測(cè)定的成分之濃度呈比例。

A=εdc

式中A=發(fā)色團(tuán)的吸光度

ε=在特定測(cè)定波長(zhǎng)下吸收物質(zhì)的吸收率

d=比色杯光徑（cm）

c=成分濃度（mmol/L）分光光度法郎伯-比爾定律摩爾吸光系數(shù)ε

在一定λ下，C=1mol/L，L=1cm時(shí)的吸光度

TV*△A/minSVε=

----------SVF=----（樣本體積分?jǐn)?shù)）

SV*C*dTV全自動(dòng)生化儀摩爾吸光系數(shù)和因數(shù)值（ε值或F值）的檢查和校正

TV*103F

=

--------SV*C*d

若ε為毫摩爾吸光系數(shù)，值乘以1000

ε為摩爾吸光系數(shù)，值不需乘1000

TV---總反應(yīng)體積SV---標(biāo)本體積ε---毫摩爾吸光系數(shù)d---比色杯內(nèi)光徑摩爾吸光系數(shù)εTV---總反應(yīng)體積注：公式中ΔA/min為1min吸光度的變化值，TV為反應(yīng)液的總體積，SV為樣品體積，d為比色杯光徑（cm），C為標(biāo)準(zhǔn)液濃度（mol/l）注：公式中ΔA/min為1min吸光度的變化值，TV為反應(yīng)液終點(diǎn)法一點(diǎn)終點(diǎn)法二點(diǎn)終點(diǎn)法動(dòng)力學(xué)法（零級(jí)動(dòng)力學(xué)法）固定時(shí)間法（一級(jí)動(dòng)力學(xué)法）吸收光譜法：終點(diǎn)法吸收光譜法：終點(diǎn)法：一點(diǎn)終點(diǎn)法計(jì)算公式：

C樣本＝(A樣本－A試劑空白/A標(biāo)準(zhǔn)－A試劑空白)×C標(biāo)準(zhǔn)

F＝C標(biāo)準(zhǔn)/（A標(biāo)準(zhǔn)－A試劑空白）

C樣本＝（A樣本－A試劑空白）×F二點(diǎn)終點(diǎn)法（樣本空白法）公式：

C樣本＝(A樣本－A樣本空白/A標(biāo)準(zhǔn)－A標(biāo)準(zhǔn)空白)×C標(biāo)準(zhǔn)

F＝C標(biāo)準(zhǔn)/（A標(biāo)準(zhǔn)－A標(biāo)準(zhǔn)空白）

C樣本＝（A樣本－A樣本空白）×F

終點(diǎn)法：動(dòng)力學(xué)法：因數(shù)法：△A樣本＝A樣本－A試劑空白

C樣本＝（?A樣本/min）×F?A樣本/min：每分鐘樣本吸光度變化率反應(yīng)度計(jì)算：檢測(cè)方法動(dòng)力學(xué)法：檢測(cè)方法動(dòng)力學(xué)法：摩爾消光系數(shù)法

：C樣本＝

?A樣本/min×Vt×1000

ε×VS×dF＝

Vt×1000

ε×Vs×d＝

1000

ε×d

×(1+

)

VRVSε：摩爾消光系數(shù)d:比色杯光徑（cm）

Vt：總反應(yīng)量

VS：樣品量VR：試劑量

檢測(cè)方法動(dòng)力學(xué)法：C樣本＝?A樣本/min×Vt×1000ε×V固定時(shí)間法：固定時(shí)間法公式：?A＝At4－At3C樣本＝(?

A樣本/?

A標(biāo)準(zhǔn))×C標(biāo)準(zhǔn)

F＝C標(biāo)準(zhǔn)/?

A標(biāo)準(zhǔn)

C樣本＝?A樣本×F

反應(yīng)度計(jì)算：

R＝（At4－At3）/（t4－t3）

檢測(cè)方法固定時(shí)間法：檢測(cè)方法檢測(cè)方法比濁法：免疫比濁法：免疫透射比濁法：是在光源的光路方向測(cè)量透射強(qiáng)度，用終點(diǎn)法測(cè)量。用于血清特種蛋白的檢測(cè)。免疫散射比濁法：常用于血凝儀中。化學(xué)比濁法檢測(cè)方法比濁法：校準(zhǔn)品定標(biāo)：濃度和反應(yīng)度關(guān)系，找K值。

K＝C標(biāo)準(zhǔn)/（A標(biāo)準(zhǔn)－A試劑空白）決定因素：

1、標(biāo)準(zhǔn)液濃度，最好是血清基質(zhì)，否則可能會(huì)因?yàn)榛|(zhì)效應(yīng)而影響定標(biāo)效果。

2、標(biāo)準(zhǔn)液吸光度與試劑空白吸光度要準(zhǔn)確。吸光度受儀器狀況、試劑狀況的影響，如果您的儀器相當(dāng)穩(wěn)定，試劑是影響K值的一個(gè)主要因素。校準(zhǔn)品定標(biāo)：濃度和反應(yīng)度關(guān)系，找K值。何時(shí)定標(biāo)？更換試劑廠家；同一試劑廠家但更換批號(hào)；試劑過(guò)長(zhǎng)時(shí)間使用。校準(zhǔn)品何時(shí)定標(biāo)？校準(zhǔn)品校準(zhǔn)品定標(biāo)方法：

線性定標(biāo)單點(diǎn)線性兩點(diǎn)線性多點(diǎn)線性

非線性定標(biāo)

SPlineLogistic-Log4P

Logistic-Log5P

Exponential5P校準(zhǔn)品定標(biāo)方法：校準(zhǔn)品單點(diǎn)線性：

校準(zhǔn)品單點(diǎn)線性：校準(zhǔn)品兩點(diǎn)線性：

校準(zhǔn)品兩點(diǎn)線性：校準(zhǔn)品Logistic-Log4P：

校準(zhǔn)品Logistic-Log4P：校準(zhǔn)品Exponential5P：

校準(zhǔn)品Exponential5P：理論因數(shù)F與校準(zhǔn)因數(shù)F：

校準(zhǔn)品F＝

Vt×1000

ε×Vs×d＝

1000

ε×d

×(1+

)

VRVS在臨床測(cè)試中，外界環(huán)境因素、試劑本身底物濃度和PH值，都無(wú)法提供和保證理論測(cè)量狀態(tài)，所以應(yīng)用理論F在測(cè)量時(shí)可能會(huì)存在誤差。因此推薦用校準(zhǔn)F，它能消除儀器偏差，將試劑系統(tǒng)誤差降到最低。理論因數(shù)F與校準(zhǔn)因數(shù)F：校準(zhǔn)品F＝Vt×100校準(zhǔn)品校準(zhǔn)因數(shù)F的條件：

必須使用配套的試劑；必須使用配套的高質(zhì)量的校準(zhǔn)品。校準(zhǔn)品校準(zhǔn)因數(shù)F的條件：校準(zhǔn)品復(fù)溶保存規(guī)則：

將干粉校準(zhǔn)品打開，按要求準(zhǔn)確加入定量的復(fù)溶液體（蒸餾水），在手心中劃“8”字復(fù)溶，30min后上機(jī)測(cè)量和分裝。注意事項(xiàng)：開蓋時(shí)緩慢旋轉(zhuǎn)啟開瓶蓋，不要濺出里面的粉末；復(fù)溶時(shí)不要?jiǎng)×艺袷?，避免產(chǎn)生大量氣泡；一定復(fù)溶完全，30min后測(cè)量；分裝后冷凍避光保存，用前復(fù)溶，凍溶一次后棄掉。校準(zhǔn)品校準(zhǔn)品復(fù)溶保存規(guī)則：校準(zhǔn)品操作人員正確良好操作習(xí)慣：

操作人員的操作習(xí)慣是由我們裝機(jī)工程師規(guī)定和指導(dǎo)養(yǎng)成的。操作人員的操作習(xí)慣直接反映裝機(jī)人員的能力。操作人員正確良好操作習(xí)慣：作用生化檢驗(yàn)的作用：

1、用化學(xué)方法來(lái)闡述疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程；

2、協(xié)助臨床診斷某些疾病，鑒別診斷疾??；

3、協(xié)助分析病情、觀察療效、判斷愈后；

4、指導(dǎo)安全用藥，監(jiān)護(hù)治療；

5、術(shù)前準(zhǔn)備；

6、有助于預(yù)防疾病和職業(yè)病的普查，為預(yù)防疾病提供資料；

7、有助于遺傳病的預(yù)測(cè)。作用生化檢驗(yàn)的作用：三、分析監(jiān)測(cè)方法終點(diǎn)法TimeAA2A1CHOt1t2兩點(diǎn)終點(diǎn)法ATBILTime一點(diǎn)終點(diǎn)法A0Aet0te方法學(xué)原理三、分析監(jiān)測(cè)方法終點(diǎn)法TimeAA2A1CHOt1終點(diǎn)法（平衡法）是指被測(cè)物質(zhì)在反應(yīng)過(guò)程中達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)時(shí)被測(cè)物質(zhì)與產(chǎn)物達(dá)到一個(gè)動(dòng)態(tài)的化學(xué)平衡，據(jù)終點(diǎn)吸光度的大小求出被測(cè)物濃度。測(cè)量的值是設(shè)定的時(shí)間最后測(cè)定的吸光度值不計(jì)算每分鐘的變化吸光度不計(jì)算和監(jiān)測(cè)反應(yīng)的非線性

兩點(diǎn)法指樣品和單一試劑混合后分別讀取延滯期后和反應(yīng)一定時(shí)間后的吸光度，計(jì)算待測(cè)物濃度?；蚴褂秒p試劑，加入樣品后分別讀取試劑1、2吸光度值，計(jì)算待測(cè)物濃度。可消除樣品、試劑的顏色、濁度及干擾物對(duì)測(cè)定的影響。該方法用于解決某些反應(yīng)的非特異性問(wèn)題。方法學(xué)原理終點(diǎn)法（平衡法）是指被測(cè)物質(zhì)在反應(yīng)過(guò)程中達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)時(shí)被測(cè)物三、分析監(jiān)測(cè)方法連續(xù)監(jiān)測(cè)法（速率法）A?A/minTimeALTALPATime?A/min方法學(xué)原理三、分析監(jiān)測(cè)方法連續(xù)監(jiān)測(cè)法（速率法）A?A/minTimeA在速率項(xiàng)目中，反應(yīng)進(jìn)行時(shí)的某特定時(shí)間間隙內(nèi)，進(jìn)行一系列測(cè)定記錄。在某時(shí)間間隔內(nèi)有效測(cè)定其吸光度變化速率是分析濃度的函數(shù)。特別是在測(cè)定時(shí)間間隙內(nèi)，記錄下表現(xiàn)出反應(yīng)中最佳線性部分的吸光度讀數(shù)。方法學(xué)原理在速率項(xiàng)目中，反應(yīng)進(jìn)行時(shí)的某特定時(shí)間間隙內(nèi)，進(jìn)行一系列測(cè)定記三、分析監(jiān)測(cè)方法固定時(shí)間法（兩點(diǎn)速率法）ABATimet1t2?A/min=（B-A）/（t2-t1）ABUNABTimet1t2?A/min=（B-A）/（t2-t1）Cr方法學(xué)原理三、分析監(jiān)測(cè)方法固定時(shí)間法（兩點(diǎn)速率法）ABATimet1四、校準(zhǔn)設(shè)置校準(zhǔn)物名稱，批號(hào)，失效期校準(zhǔn)曲線類型校準(zhǔn)標(biāo)本種類校準(zhǔn)次數(shù)校準(zhǔn)物濃度吸光度范圍F值校準(zhǔn)穩(wěn)定時(shí)間方法學(xué)原理方法學(xué)四、校準(zhǔn)設(shè)置校準(zhǔn)物名稱，批號(hào)，失效期方法學(xué)原理方法學(xué)五、校準(zhǔn)曲線類型方法學(xué)五、校準(zhǔn)曲線類型方法學(xué)六、校正物的選擇選擇合適的校正物：比如說(shuō)質(zhì)量要好，要與自己的測(cè)定系統(tǒng)配套等。日立7170使用寶靈曼的試劑和校準(zhǔn)品在貝克曼生化分析儀上使用貝克曼的試劑和校準(zhǔn)品注意校正物的保存：包括復(fù)溶前和復(fù)溶后，使用說(shuō)明書上一般會(huì)告知復(fù)溶后不同項(xiàng)目在不同環(huán)境下穩(wěn)定的時(shí)間，注意在規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用。注意復(fù)溶的方法：注意用水、手法，復(fù)溶后一般要穩(wěn)定一段時(shí)間（大約30分鐘）后再用。不能反復(fù)凍融。注意選擇對(duì)應(yīng)的方法學(xué)的定值。方法學(xué)六、校正物的選擇選擇合適的校正物：比如說(shuō)質(zhì)量要好，要與自己的校準(zhǔn)品的選擇選擇合適的校準(zhǔn)品：質(zhì)量好、與測(cè)定系統(tǒng)配套日立7170使用寶靈曼的試劑和校準(zhǔn)品貝克曼生化分析儀上使用貝克曼的試劑和校準(zhǔn)品注意校準(zhǔn)品的保存：包括復(fù)溶前和復(fù)溶后，使用說(shuō)明書上一般會(huì)告知復(fù)溶后不同項(xiàng)目在不同環(huán)境下穩(wěn)定的時(shí)間，注意在規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用。注意復(fù)溶的方法：注意用水、手法，復(fù)溶后一般要穩(wěn)定一段時(shí)間（大約30分鐘）后再用。不能反復(fù)凍融。注意選擇對(duì)應(yīng)的方法學(xué)的定值。校準(zhǔn)品校準(zhǔn)品的選擇選擇合適的校準(zhǔn)品：質(zhì)量好、與測(cè)定系統(tǒng)配套校準(zhǔn)品校準(zhǔn)方式一點(diǎn)校準(zhǔn)方法學(xué)校準(zhǔn)方式一點(diǎn)校準(zhǔn)方法學(xué)兩點(diǎn)校準(zhǔn)方法學(xué)兩點(diǎn)校準(zhǔn)方法學(xué)多點(diǎn)校準(zhǔn)方法學(xué)多點(diǎn)校準(zhǔn)方法學(xué)a)

理論K值：根據(jù)理論摩爾消光系數(shù)（ε）來(lái)計(jì)算，如NADH為6.22×103b)

實(shí)測(cè)K值：由于儀器波長(zhǎng)的精密及半寬度不同，而應(yīng)根據(jù)實(shí)測(cè)ε值來(lái)設(shè)定K值c)

廠家給的K值：廠家生產(chǎn)試劑盒說(shuō)明書上提供的K值d)

校準(zhǔn)K值：通過(guò)校準(zhǔn)物直接校準(zhǔn)得到的K值常用K值方法學(xué)a)

理論K值：根據(jù)理論摩爾消光系數(shù)（ε）來(lái)計(jì)算，如生化分析儀臨床應(yīng)用

分析儀參數(shù)設(shè)置試劑選擇校準(zhǔn)品選擇儀器操作流程儀器主要性能指標(biāo)及評(píng)價(jià)臨床應(yīng)用生化分析儀臨床應(yīng)用分析儀參數(shù)設(shè)置臨床應(yīng)用感謝您的聆聽!感謝您的聆聽!生化檢測(cè)技術(shù)健康大講堂---檢驗(yàn)專題第五講檢驗(yàn)科生化檢測(cè)技術(shù)健康大講堂---檢驗(yàn)專題第五講檢驗(yàn)科生化檢測(cè)技術(shù)制備離心差速密度梯度分析離心沉降速度沉降平衡等密度區(qū)帶吸收光譜發(fā)射光譜火焰光度、熒光散射光譜—比濁氣相高效液相離心電化學(xué)光譜電泳層析醋酸纖維薄膜瓊脂糖凝膠聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦雙向電泳電位分析法離子選擇電極（直接、間接）玻璃膜Na+、K+、氣敏電極NH3、CO2酶電極尿酶電極電導(dǎo)法電容量法生化檢測(cè)技術(shù)制備離心吸收光譜氣相離心電化學(xué)光譜電泳層析醋酸纖主要內(nèi)容光譜分析技術(shù)電化學(xué)分析技術(shù)影響因素交叉污染結(jié)果審核報(bào)告主要內(nèi)容光譜分析技術(shù)電化學(xué)分析技術(shù)影響因素交叉污染結(jié)果審據(jù)儀器的結(jié)構(gòu)原理不同連續(xù)流動(dòng)式（管道式如SMA系列）

分立式（BECKMANCX；Hitachi-7系列）離心式（Encore、Cobas）干片式四類據(jù)儀器的復(fù)雜程度及功能小型、中型、大型據(jù)儀器的自動(dòng)化程度全自動(dòng)和半自動(dòng)自動(dòng)生化分析儀類型據(jù)儀器的結(jié)構(gòu)原理不同自動(dòng)生化分析儀類型三種生化儀的比較三種生化儀的比較

貝克曼DxC800貝克曼DxC800

拜爾2400拜爾2400全自動(dòng)生化分析儀基本結(jié)構(gòu)

樣品系統(tǒng)試劑系統(tǒng)條形碼適讀系統(tǒng)反應(yīng)系統(tǒng)清洗系統(tǒng)比色系統(tǒng)程序控制系統(tǒng)全自動(dòng)生化分析儀基本結(jié)構(gòu)樣品系統(tǒng)分析系統(tǒng)加樣系統(tǒng)清洗系統(tǒng)控制系統(tǒng)自動(dòng)生化分析儀樣品試劑系統(tǒng)軟件數(shù)據(jù)傳輸反應(yīng)比色數(shù)據(jù)處理水、洗液清洗針生化分析儀基本結(jié)構(gòu)分析系統(tǒng)加樣系統(tǒng)清洗系統(tǒng)控制系統(tǒng)自動(dòng)生化分析儀樣品系統(tǒng)軟件反加樣系統(tǒng)反應(yīng)比色池光電檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)控制器單元前提核心功能的擴(kuò)展保證全自動(dòng)生化分析儀基本結(jié)構(gòu)示意圖附件：供排水電源供應(yīng)加樣系統(tǒng)反應(yīng)比色池光電檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)控制器單元前提核心功樣品盤進(jìn)樣裝置(樣本杯/管、樣本架、進(jìn)樣軌道)分配加樣裝置(注射器、步進(jìn)馬達(dá)、加樣臂、樣品探針)稀釋裝置(對(duì)樣本進(jìn)行預(yù)稀釋)樣品探針(液面感應(yīng)器、阻塞報(bào)警、防撞報(bào)警、精度1ul)樣品（Sample）系統(tǒng)樣品盤樣品（Sample）系統(tǒng)樣品(Sample)系統(tǒng)

樣品(Sample)系統(tǒng)試劑倉(cāng)（冷藏，提高在線試劑穩(wěn)定性）試劑轉(zhuǎn)盤（與試劑倉(cāng)結(jié)合）試劑瓶（配套試劑常有條形碼）分配加液裝置（注射器、步進(jìn)馬達(dá)、加樣臂、試劑探針）試劑探針（液面感應(yīng)器、對(duì)試劑預(yù)加溫、阻塞報(bào)警、防撞報(bào)警、精度1ul）試劑（Sample）系統(tǒng)試劑倉(cāng)（冷藏，提高在線試劑穩(wěn)定性）試劑（Sample）系統(tǒng)試劑(Reagent)系統(tǒng)

試劑(Reagent)系統(tǒng)試劑(Reagent)系統(tǒng)

試劑(Reagent)系統(tǒng)掃描系統(tǒng)信號(hào)整形譯碼器條形碼（Barcode）識(shí)讀系統(tǒng)掃描系統(tǒng)條形碼（Barcode）識(shí)讀系統(tǒng)反應(yīng)盤（轉(zhuǎn)盤）反應(yīng)杯或比色杯石英玻璃、硬質(zhì)玻璃、丙烯酸塑料混合裝置攪拌棒--特氟隆不粘涂層溫控裝置(37℃)

空氣浴恒溫水浴循環(huán)式恒溫液循環(huán)間接加熱式反應(yīng)（Reaction）系統(tǒng)反應(yīng)盤（轉(zhuǎn)盤）反應(yīng)（Reaction）系統(tǒng)生化檢測(cè)技術(shù)課件探針和攪拌棒清洗激流式、涌泉式比色杯清洗吸液針、吐液針、擦拭刷清洗液

堿性液、酸性液、水 清洗（Wash）系統(tǒng)探針和攪拌棒清洗清洗（Wash）系統(tǒng)清洗(Wash)系統(tǒng)

清洗(Wash)系統(tǒng)光源比色杯單色器檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理及顯示比色系統(tǒng)光源比色系統(tǒng)

鹵素（溴、碘鎢）燈

工作波長(zhǎng)325-800nm

使用壽命短1000-1500h

氙燈

工作波長(zhǎng)285-750nm

使用壽命長(zhǎng)，數(shù)年光源光源比色杯

比色杯=反應(yīng)杯比色杯光徑

0.5-0.7cm省試劑部分儀器可自動(dòng)校正為1cm比色杯材料石英玻璃、硬質(zhì)玻璃、丙烯酸塑料自動(dòng)清洗比色杯比色杯=反應(yīng)杯

濾光片、棱鏡、光柵干涉濾光片

光學(xué)干涉濾光片是建立在光學(xué)薄膜干涉原理上的精密光學(xué)濾光器件。通過(guò)設(shè)計(jì)和改變膜系的結(jié)構(gòu)和膜層的光學(xué)參數(shù)，可以獲得各種光譜特性，用于控制、調(diào)整和改變光波的透射、反射、吸收、偏振或相位狀態(tài)。光柵

光柵是根據(jù)光的衍射原理進(jìn)行分光的，具有可用波長(zhǎng)范圍寬，色散近于線性，譜線均勻并且光能損失少。平面反射光柵是生化分析儀最常用的分光元件。但光柵單色器有次級(jí)光譜干擾，同時(shí)雜散光影響也較棱鏡大。光柵光譜的譜線隨刻線的距離減少而增大，因此單位長(zhǎng)度內(nèi)的刻線數(shù)是光柵單色器的重要指標(biāo)。光柵分光可分為全息反射式光柵和蝕刻式凹面光柵兩種。單色器

濾光片、棱鏡、光柵單色器干涉濾光片與光柵的比較干涉濾光片光能量利用率高易于維護(hù)、更換340nm易氧化光柵單色性好，但光能量損失大波長(zhǎng)連續(xù)，可任選維護(hù)更換復(fù)雜，須專業(yè)工程師干涉濾光片與光柵的比較干涉濾光片光柵前分光特點(diǎn)；光源經(jīng)一系列透鏡反射后成為單色光通過(guò)樣本，因此只能進(jìn)行相同波長(zhǎng)項(xiàng)目的檢測(cè)。后分光特點(diǎn)：可連續(xù)不斷檢測(cè)不同波長(zhǎng)的反應(yīng)，適用于多項(xiàng)目檢測(cè)，目前全自動(dòng)生化儀多用此法分光。前分光特點(diǎn)；后分光特點(diǎn)：光電接收器光電池光電管光電倍增管數(shù)據(jù)處理及顯示前置放大器A/D轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)處理顯示分析檢測(cè)系統(tǒng)光電接收器數(shù)據(jù)處理及顯示分析檢測(cè)系統(tǒng)控制系統(tǒng)

微處理器和主機(jī)電腦顯示器系統(tǒng)及配套軟件采用Windows-NT或Windows界面人機(jī)對(duì)話數(shù)據(jù)傳輸通過(guò)RS232C等數(shù)據(jù)接口與其它計(jì)算機(jī)、打印機(jī)等設(shè)備傳輸數(shù)據(jù)控制系統(tǒng)微處理器和主機(jī)電腦主機(jī)電腦顯示界面

主機(jī)電腦顯示界面生化檢測(cè)技術(shù)課件方法學(xué)檢測(cè)原理

光譜分析技術(shù)生化檢驗(yàn)反應(yīng)原理分析監(jiān)測(cè)方法方法學(xué)檢測(cè)原理光譜分析技術(shù)二、臨床生化檢驗(yàn)反應(yīng)原理酶偶聯(lián)法

---脫氫酶法ALTASTLDH-LMBHBDHCKBUN340nm---氧化酶法GLUTCTGUACr550nm色原底物法

α-AMYALPGGT405nm化學(xué)法

TBILDBILCaMgTP

ALBCr630nm免疫比濁法

IgGAMC3C4CRPASORFAPOAAPOB340nm二、臨床生化檢驗(yàn)反應(yīng)原理酶偶聯(lián)法

NADH和NADPH在340nm有最大吸收峰，而NAD+和NADP+在340nm無(wú)吸收峰，利用其偶聯(lián)的脫氫酶(工具酶)反應(yīng)，根據(jù)340nm吸光度的變化，可以測(cè)定物質(zhì)的濃度或活性。目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定的臨床項(xiàng)目有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、α-HBDH、Glu（己糖激酶法）、UREA、NH4+

、CO2等。NAD+－NADH(NADP+－NADPH)指示系統(tǒng)：NADH和NADPH在340nm有最大吸收峰，而ALT為例：R1：NADH、乳酸脫氫酶（LDH）R2：L-丙氨酸、α-酮戊二酸

ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸

LDH丙酮酸+NADH+H+→L-乳酸+NAD++H2ONAD+－NADH(NADP+－NADPH)指示系統(tǒng)：ALT為例：NAD+－NADH(NADP+－NADPH)指生化檢測(cè)技術(shù)課件

p-NP和p-NA在405nm有特征性吸收峰，根據(jù)405nm吸光度的變化，可以測(cè)定物質(zhì)的濃度或活性。目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定的臨床項(xiàng)目有ALP、r-GT、AMY等。p-NP和p-NA指示系統(tǒng)：p-NP和p-NA在405nm有特征性吸收峰，根據(jù)4ALP為例：R1：AMP緩沖液、MgCl2

R2：對(duì)硝基苯磷酸鹽

ALP對(duì)硝基苯磷酸鹽+H2O→磷酸鹽+對(duì)硝基苯酚p-NP和p-NA指示系統(tǒng)：ALP為例：p-NP和p-NA指示系統(tǒng)：H2O2偶聯(lián)的指示系統(tǒng)：

H2O2在過(guò)氧化物酶的作用下，可使單一個(gè)或成對(duì)的無(wú)色的色素原氧化成有色的色素，導(dǎo)致某一波長(zhǎng)吸光度的增加，因此可用來(lái)測(cè)定物質(zhì)的濃度或活性。目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定的臨床項(xiàng)目有TC、TG、HDL-C、LDL-C、Glu（氧化酶法）、Cr、UA等。H2O2偶聯(lián)的指示系統(tǒng)：H2O2在過(guò)氧化物酶的作H2O2偶聯(lián)的指示系統(tǒng)：GLU為例：R1：4-氨基安替吡啉、抗壞血酸氧化酶R2：葡萄糖氧化酶、過(guò)氧化物酶、酚。

GOD葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖酸+H2O2

POD2H2O2+4-氨基安替吡啉+酚→醌亞胺+4H2O

H2O2偶聯(lián)的指示系統(tǒng)：其他顯色反應(yīng)：TP為例：

蛋白質(zhì)中的肽鍵在堿性溶液中與銅離子作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物，導(dǎo)致540nm吸光度的增加，增加程度與蛋白質(zhì)的含量成正比。

堿性條件肽鍵+Cu2+→紫紅色絡(luò)合物

其他顯色反應(yīng)：TP為例：抗原抗體反應(yīng)指示系統(tǒng)：特異性抗體與抗原(待測(cè)物質(zhì))在相應(yīng)的緩沖環(huán)境下反應(yīng)生成抗原抗體復(fù)合物，形成一定的濁度，導(dǎo)致特定波長(zhǎng)透光率的改變。在抗體過(guò)剩的前提下，改變程度與抗原濃度成正比。目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定的臨床項(xiàng)目有apoAI、apoB、Lp(a)、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP等。抗原抗體反應(yīng)指示系統(tǒng)：特異性抗體與抗原(待測(cè)物質(zhì))抗原抗體反應(yīng)指示系統(tǒng)：載脂蛋白為例：R1：磷酸鹽緩沖液pH7.5,表面活性劑，防腐劑，穩(wěn)定劑；R2：羊抗人apoAl（apoB）抗血清，防腐劑，穩(wěn)定劑。抗原(血清中apoAl,apoB)+抗體(R2)

緩沖環(huán)境

>抗原抗體免疫復(fù)合物。抗原抗體反應(yīng)指示系統(tǒng)：載脂蛋白為例：光譜分析技術(shù)光譜分析技術(shù)生化檢測(cè)技術(shù)課件透光度T與吸光度A的關(guān)系IinIoutT=Iout/IinA=-lgT透光度T與吸光度A的關(guān)系IinIoutT=Iout/I方法：吸收光譜法：比色分析基于溶液對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的一種分析方法。

比濁法：通過(guò)監(jiān)測(cè)物質(zhì)對(duì)光的散射透射強(qiáng)度來(lái)測(cè)定的方法，比濁法是一種濁度測(cè)定，而不是比色測(cè)定。

檢測(cè)方法方法：檢測(cè)方法分光光度法

分光光度法依據(jù)的原理為某樣品，如：病人樣品、質(zhì)控品或定標(biāo)液，和一個(gè)或多個(gè)化學(xué)試劑混和后，產(chǎn)生某物質(zhì)，該物質(zhì)具有對(duì)特定波長(zhǎng)吸收光的能力。該物質(zhì)稱為發(fā)色團(tuán)（CHROMOPHORE）。

郎伯-比爾定律

發(fā)色團(tuán)吸收的光量和欲測(cè)定的成分之濃度呈比例。

A=εdc

式中A=發(fā)色團(tuán)的吸光度

ε=在特定測(cè)定波長(zhǎng)下吸收物質(zhì)的吸收率

d=比色杯光徑（cm）

c=成分濃度（mmol/L）分光光度法郎伯-比爾定律摩爾吸光系數(shù)ε

在一定λ下，C=1mol/L，L=1cm時(shí)的吸光度

TV*△A/minSVε=

----------SVF=----（樣本體積分?jǐn)?shù)）

SV*C*dTV全自動(dòng)生化儀摩爾吸光系數(shù)和因數(shù)值（ε值或F值）的檢查和校正

TV*103F

=

--------SV*C*d

若ε為毫摩爾吸光系數(shù)，值乘以1000

ε為摩爾吸光系數(shù)，值不需乘1000

TV---總反應(yīng)體積SV---標(biāo)本體積ε---毫摩爾吸光系數(shù)d---比色杯內(nèi)光徑摩爾吸光系數(shù)εTV---總反應(yīng)體積注：公式中ΔA/min為1min吸光度的變化值，TV為反應(yīng)液的總體積，SV為樣品體積，d為比色杯光徑（cm），C為標(biāo)準(zhǔn)液濃度（mol/l）注：公式中ΔA/min為1min吸光度的變化值，TV為反應(yīng)液終點(diǎn)法一點(diǎn)終點(diǎn)法二點(diǎn)終點(diǎn)法動(dòng)力學(xué)法（零級(jí)動(dòng)力學(xué)法）固定時(shí)間法（一級(jí)動(dòng)力學(xué)法）吸收光譜法：終點(diǎn)法吸收光譜法：終點(diǎn)法：一點(diǎn)終點(diǎn)法計(jì)算公式：

C樣本＝(A樣本－A試劑空白/A標(biāo)準(zhǔn)－A試劑空白)×C標(biāo)準(zhǔn)

F＝C標(biāo)準(zhǔn)/（A標(biāo)準(zhǔn)－A試劑空白）

C樣本＝（A樣本－A試劑空白）×F二點(diǎn)終點(diǎn)法（樣本空白法）公式：

C樣本＝(A樣本－A樣本空白/A標(biāo)準(zhǔn)－A標(biāo)準(zhǔn)空白)×C標(biāo)準(zhǔn)

F＝C標(biāo)準(zhǔn)/（A標(biāo)準(zhǔn)－A標(biāo)準(zhǔn)空白）

C樣本＝（A樣本－A樣本空白）×F

終點(diǎn)法：動(dòng)力學(xué)法：因數(shù)法：△A樣本＝A樣本－A試劑空白

C樣本＝（?A樣本/min）×F?A樣本/min：每分鐘樣本吸光度變化率反應(yīng)度計(jì)算：檢測(cè)方法動(dòng)力學(xué)法：檢測(cè)方法動(dòng)力學(xué)法：摩爾消光系數(shù)法

：C樣本＝

?A樣本/min×Vt×1000

ε×VS×dF＝

Vt×1000

ε×Vs×d＝

1000

ε×d

×(1+

)

VRVSε：摩爾消光系數(shù)d:比色杯光徑（cm）

Vt：總反應(yīng)量

VS：樣品量VR：試劑量

檢測(cè)方法動(dòng)力學(xué)法：C樣本＝?A樣本/min×Vt×1000ε×V固定時(shí)間法：固定時(shí)間法公式：?A＝At4－At3C樣本＝(?

A樣本/?

A標(biāo)準(zhǔn))×C標(biāo)準(zhǔn)

F＝C標(biāo)準(zhǔn)/?

A標(biāo)準(zhǔn)

C樣本＝?A樣本×F

反應(yīng)度計(jì)算：

R＝（At4－At3）/（t4－t3）

檢測(cè)方法固定時(shí)間法：檢測(cè)方法檢測(cè)方法比濁法：免疫比濁法：免疫透射比濁法：是在光源的光路方向測(cè)量透射強(qiáng)度，用終點(diǎn)法測(cè)量。用于血清特種蛋白的檢測(cè)。免疫散射比濁法：常用于血凝儀中?；瘜W(xué)比濁法檢測(cè)方法比濁法：校準(zhǔn)品定標(biāo)：濃度和反應(yīng)度關(guān)系，找K值。

K＝C標(biāo)準(zhǔn)/（A標(biāo)準(zhǔn)－A試劑空白）決定因素：

1、標(biāo)準(zhǔn)液濃度，最好是血清基質(zhì)，否則可能會(huì)因?yàn)榛|(zhì)效應(yīng)而影響定標(biāo)效果。

2、標(biāo)準(zhǔn)液吸光度與試劑空白吸光度要準(zhǔn)確。吸光度受儀器狀況、試劑狀況的影響，如果您的儀器相當(dāng)穩(wěn)定，試劑是影響K值的一個(gè)主要因素。校準(zhǔn)品定標(biāo)：濃度和反應(yīng)度關(guān)系，找K值。何時(shí)定標(biāo)？更換試劑廠家；同一試劑廠家但更換批號(hào)；試劑過(guò)長(zhǎng)時(shí)間使用。校準(zhǔn)品何時(shí)定標(biāo)？校準(zhǔn)品校準(zhǔn)品定標(biāo)方法：

線性定標(biāo)單點(diǎn)線性兩點(diǎn)線性多點(diǎn)線性

非線性定標(biāo)

SPlineLogistic-Log4P

Logistic-Log5P

Exponential5P校準(zhǔn)品定標(biāo)方法：校準(zhǔn)品單點(diǎn)線性：

校準(zhǔn)品單點(diǎn)線性：校準(zhǔn)品兩點(diǎn)線性：

校準(zhǔn)品兩點(diǎn)線性：校準(zhǔn)品Logistic-Log4P：

校準(zhǔn)品Logistic-Log4P：校準(zhǔn)品Exponential5P：

校準(zhǔn)品Exponential5P：理論因數(shù)F與校準(zhǔn)因數(shù)F：

校準(zhǔn)品F＝

Vt×1000

ε×Vs×d＝

1000

ε×d

×(1+

)

VRVS在臨床測(cè)試中，外界環(huán)境因素、試劑本身底物濃度和PH值，都無(wú)法提供和保證理論測(cè)量狀態(tài)，所以應(yīng)用理論F在測(cè)量時(shí)可能會(huì)存在誤差。因此推薦用校準(zhǔn)F，它能消除儀器偏差，將試劑系統(tǒng)誤差降到最低。理論因數(shù)F與校準(zhǔn)因數(shù)F：校準(zhǔn)品F＝Vt×100校準(zhǔn)品校準(zhǔn)因數(shù)F的條件：

必須使用配套的試劑；必須使用配套的高質(zhì)量的校準(zhǔn)品。校準(zhǔn)品校準(zhǔn)因數(shù)F的條件：校準(zhǔn)品復(fù)溶保存規(guī)則：

將干粉校準(zhǔn)品打開，按要求準(zhǔn)確加入定量的復(fù)溶液體（蒸餾水），在手心中劃“8”字復(fù)溶，30min后上機(jī)測(cè)量和分裝。注意事項(xiàng)：開蓋時(shí)緩慢旋轉(zhuǎn)啟開瓶蓋，不要濺出里面的粉末；復(fù)溶時(shí)不要?jiǎng)×艺袷?，避免產(chǎn)生大量氣泡；一定復(fù)溶完全，30min后測(cè)量；分裝后冷凍避光保存，用前復(fù)溶，凍溶一次后棄掉。校準(zhǔn)品校準(zhǔn)