第三次實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容熱力對細(xì)菌繁殖體和芽胞的殺菌作用：（1套/組）紫外線的殺菌作用：（1個(gè)/組）抗生素敏感試驗(yàn)：（1套/組）細(xì)菌耐藥性變異（示教）細(xì)菌的鞭毛變異（示教）高壓滅菌器的使用（講解）細(xì)菌分離鑒定程序（講解）全自動微生物生化分析儀簡要操作規(guī)程（講解、參觀）物理消毒滅菌法掌握的概念：消毒：指殺死物體上病原微生物的方法。但是不一定能殺死細(xì)菌的芽胞和某些非病原菌。滅菌：指殺死物體上所有微生物的方法。包括病原菌和非病原菌，細(xì)菌的芽胞和繁殖體。物理消毒滅菌法分類：熱力、紫外線、電力輻射、超聲波等。熱力滅菌法：干熱滅菌法與濕熱滅菌法。使菌體蛋白氧化變性、碳化或使電解質(zhì)濃縮，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。使菌體蛋白變性或凝固，或?qū)е录?xì)胞膜功能受損而致細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物漏出。一、熱力對細(xì)菌芽胞和繁殖體的殺菌作用材料肉湯培養(yǎng)基：6支（2人/組）菌種：大腸桿菌斜面培養(yǎng)物、枯草桿菌斜面培養(yǎng)物方法接種大腸桿菌接種枯草桿菌第一步：接種細(xì)菌方法第二步：分組處理大腸桿菌枯草桿菌大腸桿菌大腸桿菌枯草桿菌枯草桿菌第一組第二組第三組對照（直接放37℃培養(yǎng)）100℃煮沸10min121℃高壓滅菌20min冷水沖涼三組均放于37℃孵箱中培養(yǎng)18～24小時(shí)，觀察結(jié)果并分析產(chǎn)生結(jié)果的原因。方法第三步：培養(yǎng)高壓滅菌器的使用原理：蒸汽被限制在密閉的容器中，隨著壓力的升高，蒸汽的溫度也相應(yīng)升高。在103.4kpa蒸汽壓下，溫度達(dá)到121.3℃，維持15-20min，可殺死包括細(xì)菌芽胞在內(nèi)的所有微生物。鍋蓋內(nèi)鍋外鍋結(jié)果菌膜(表面生長長)均勻渾濁生長沉淀生長對照:兩管管均有細(xì)菌菌生長;100℃煮煮沸10min:枯草桿菌有有生長,形形成菌膜;大腸桿菌無無生長。高壓滅菌:兩管均無細(xì)細(xì)菌生長.結(jié)果普通條件培培養(yǎng)下細(xì)菌菌生長狀況況枯草桿菌大腸桿菌100℃滅滅菌后細(xì)菌菌生長狀況況枯草桿菌大腸桿菌三、紫外線線的殺菌作作用紫外線的特特點(diǎn)：穿透力較弱弱，可被普普通的玻璃璃、紙張、、塵埃、水水蒸氣等阻阻擋，只用用于手術(shù)室室、傳染病病房、實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室或不耐耐熱物品的的表面消毒毒。波長在200～300nm的的紫外線具具有殺菌作作用，以265～266nm的紫外線線殺菌作用用最強(qiáng)。主要是使同同一股DNA上相鄰鄰的嘧啶通通過共價(jià)鍵鍵結(jié)合成二二聚體，影影響DNA正常堿基基配對，干干擾DNA的復(fù)制與與轉(zhuǎn)錄，引引起細(xì)菌的的突變或死死亡；還能能使空氣中中的氧轉(zhuǎn)化化為臭氧而而具有殺菌菌作用。原理普通瓊脂平平板（1個(gè)個(gè)/2人））菌種：金黃黃色葡萄球球菌液體培培養(yǎng)基接種環(huán)紫外燈材料方法1、取2～～3環(huán)菌液液于平板中中央；2、接種環(huán)環(huán)涂均勻；；3、放紫外外線燈箱，，用平板蓋蓋蓋住1/2平皿，，照射30min；；4、取出后后放37℃℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)結(jié)果。紫外線照射射一側(cè)無細(xì)細(xì)菌生長。。結(jié)果照射一一側(cè)未照射射一側(cè)側(cè)四、抗抗生素素敏感感實(shí)驗(yàn)驗(yàn)紙片法法原理理一定大大小的的浸沾沾了一一定的的稀釋釋度的的抗生生素的的濾紙紙片，，貼附附于已已涂滿滿被測測細(xì)菌菌的瓊瓊脂平平板上上，孵孵育后后因藥藥物的的抑菌菌作用用及滲滲透性性，紙紙片周周圍可可出現(xiàn)現(xiàn)透明明的抑抑菌圈圈。根根據(jù)抑抑菌圈圈的有有無和和大小小，從從而測測知被被測細(xì)細(xì)菌對對抗生生素是是否敏敏感。。菌種：：大腸腸桿菌菌和葡葡萄球球菌肉肉湯培培養(yǎng)物物普通瓊瓊脂平平板（（1個(gè)個(gè)/人人）接種種環(huán)環(huán)、、鑷鑷子子抗生生素素紙紙片片：：青青霉霉素素、、鏈鏈霉霉素素、、復(fù)復(fù)方方新新諾諾明明、、環(huán)環(huán)丙丙沙沙星星材料料方法法青鏈復(fù)環(huán)1、、用用接接種種環(huán)環(huán)將將菌菌液液均均勻勻的的涂涂抹抹于于平平板板表表面面（（方方法法同同紫紫外外線線））；；2、、在在平平板板底底部部用用蠟蠟筆筆分分成成4區(qū)區(qū)；；3、、鑷鑷子子燒燒灼灼滅滅菌菌、、冷冷卻卻，，夾夾取取紙紙片片放放于于各各區(qū)區(qū)；；4、作作好標(biāo)標(biāo)記放放37℃培培養(yǎng)24h測量量抑菌菌圈的的大小小，判判斷結(jié)結(jié)果。。注意：1、鑷子子冷卻后后才能夾夾取紙片片；2、紙片片間距離離不能太太密。含藥物的的濾紙片片含菌平板板抑菌圈37℃培培養(yǎng)結(jié)果復(fù)鏈青環(huán)復(fù)環(huán)青鏈葡萄球菌菌大腸桿菌菌綠膿桿菌菌五、耐藥藥性變異異細(xì)菌產(chǎn)生生抗藥性性的機(jī)制制：改變藥物物作用機(jī)機(jī)制；產(chǎn)生各種種鈍化酶酶；R質(zhì)質(zhì)粒粒編編碼碼乙乙酰酰轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移移酶酶、、磷磷酸酸轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移移酶酶、、腺腺苷苷轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移移酶酶；；改變變細(xì)細(xì)胞胞膜膜通通透透性性。。方法法不耐耐青青霉霉素素耐青青霉霉素素六、含0.1%石石炭炭酸酸瓊瓊脂脂培培養(yǎng)養(yǎng)基基無無此此現(xiàn)現(xiàn)象象.普通通瓊瓊脂脂培培養(yǎng)養(yǎng)基基遷徙徙生生長長七、、全全自自動動微微生生物物生生化化分分析析儀儀VITEK2系統(tǒng)統(tǒng)簡簡易易操操作作規(guī)規(guī)程程介介紹紹主機(jī)機(jī)聰明明儀儀（一一））基基本本功功能能1、、從從分分離離菌菌落落中中對對微微生生物物進(jìn)進(jìn)行行鑒鑒定定；；2、、對對分分離離菌菌株株進(jìn)進(jìn)行行抗抗生生素素敏敏感感試試驗(yàn)驗(yàn)；；3、以MIC比較分分析為基礎(chǔ)礎(chǔ)利用高級級專家系統(tǒng)統(tǒng)來進(jìn)行菌菌株耐藥表表型分析。。（二）卡片片1、鑒定卡卡GNB/GN革蘭陰性桿桿菌鑒定卡卡；GPC/GP革蘭陽性球球菌鑒定卡卡；YST酵酵母菌鑒定定卡；BBL需需氧芽孢桿桿菌。2、VITEK2卡片細(xì)菌菌鑒定原理理是一組放在在64個(gè)30l容積小小孔的標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)化及微量量化試驗(yàn)。。這些小孔孔放有一些些乾燥的反反應(yīng)培養(yǎng)基基，被測試試的菌液是是接種到這這些培養(yǎng)基基上。每個(gè)個(gè)小孔代表表一個(gè)生化化反應(yīng)，有有些小孔是是用作讀數(shù)數(shù)對照。細(xì)細(xì)菌的新陳陳代謝令孔孔內(nèi)底物在在培養(yǎng)過程程產(chǎn)生反應(yīng)應(yīng)，從而使使熒光物產(chǎn)產(chǎn)生變化，，每15分分鐘儀器會會以波長365nm的激發(fā)發(fā)光照射每每個(gè)生化接接收二極管管收集激發(fā)發(fā)后產(chǎn)生的的445nm波長長的光訊號號。這里有有兩種熒光光指標(biāo)要檢檢測:微微生物的新新陳代謝導(dǎo)導(dǎo)致pH值值改變、、酶的活性性。3、藥敏卡卡AST-GNxx革蘭陰性桿桿菌藥敏卡卡AST-Pxxx革蘭陽性球球菌藥敏卡卡4、藥敏試試驗(yàn)的主要要原理儀器會連續(xù)續(xù)分析64-孔試卡卡（微孔內(nèi)內(nèi)）內(nèi)的細(xì)細(xì)菌生長。。每孔都放放有一種抗抗生素，并并且能產(chǎn)生生微需氧及及其他有利利細(xì)菌生長長的條件。。（三）操作作規(guī)程1.分純細(xì)細(xì)菌，18-24小小時(shí)培養(yǎng)物物（新鮮菌菌）2.根據(jù)細(xì)細(xì)菌選卡片片，恢復(fù)室室溫。3.按表一一建議配制制菌懸液4.根據(jù)自自身需要選選擇藥敏卡卡。5.在SCS操作臺臺完成初步步資料輸入入。6.船架放放入儀器，，關(guān)閉外門門。7.儀器自自動完成核核對，稀釋釋，填充，，切割，封封閉及上卡卡，卸卡。。八、細(xì)菌的的分離鑒定定程序標(biāo)本的采集集與送檢應(yīng)應(yīng)注意的問問題：1、注意無無菌操作，，避免正常常菌群污染染；2、根據(jù)致致病菌在體體內(nèi)分布和和排出部位位不同采取取標(biāo)本；3、應(yīng)在使使用抗生素素前采標(biāo)本本；4、、采采集集病病變變明明顯顯部部位位；；5、、盡盡快快送送檢檢；；6、、多多數(shù)數(shù)菌菌可可冷冷藏藏送送檢檢，，但但不不耐耐寒寒冷冷的的腦腦膜膜炎炎奈奈瑟瑟菌菌、、淋淋病病奈奈瑟瑟菌菌等等要要保保暖暖送送檢檢；；糞糞便便標(biāo)標(biāo)本本置置于于甘甘油油緩緩沖沖鹽鹽水水保保存存液液中中。。檢驗(yàn)驗(yàn)程程