電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第3頁，共3頁多聚半乳糖醛酸酶（PG）活性檢測(cè)試劑盒說明書貨號(hào)：UPLC-MS-4144規(guī)格：50T/24S

可見分光光度法產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體30mL×1瓶4℃保存試劑一液體8mL×1瓶4℃保存試劑二粉劑×1瓶4℃保存試劑三液體20mL×1瓶4℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支4℃保存溶液的配制：1、試劑一：若溶液中有晶體析出，37℃水浴溶解；2、試劑二：臨用前加入8mL蒸餾水，60℃水浴助溶；3、標(biāo)準(zhǔn)品：10mg半乳糖醛酸。臨用前加入0.943mL蒸餾水，配成50μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。PGDNS540nm540nm處吸光值變化可計(jì)算得果膠酶活性。注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。需自備的儀器和用品：可見分光光度計(jì)、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）提取液體積(mL)1:5~10的比例（0.1g1mL提取液）4℃，16000g10min，取上清置于冰上待測(cè)。（104個(gè)提取液體積（mL）500~1000︰1的比例（5001mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)菌（20%200W3s75min）；4℃，16000g10min取上清置于冰上待測(cè)。液體：直接檢測(cè)或用提取液稀釋后檢測(cè)。二、測(cè)定步驟1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm，蒸餾水調(diào)零。2、將50μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為10、6、4、3、2、1.5、1.2μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。3、操作表：(在1.5mL離心管中)試劑名稱(μL)測(cè)定管對(duì)照管空白管標(biāo)準(zhǔn)管樣本5050--蒸餾水--50-標(biāo)準(zhǔn)溶液--50試劑一100100100100試劑二100-10010040℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)2h后，沸水浴加熱10min（蓋緊，防止水分散失），取出后冷卻至室溫。-試劑二-100--試劑三250250250250沸水浴加熱5min（蓋緊，防止水分散失），取出后冷卻至室溫。蒸餾水500500500500540nmAAAAΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。三、PG酶活計(jì)算1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：xΔAyy=ΔA帶x（μmol/mL）2、PG酶活的計(jì)算：按樣本蛋白濃度計(jì)算酶活定義：在40℃，pH6.0的條件下，每毫克蛋白每小時(shí)分解多聚半乳糖醛酸產(chǎn)生1μmol的半乳糖醛酸定義為一個(gè)酶活力單位。PG酶活（U/mgprot）=x×V提取÷（V提取×Cpr）÷T=0.5x÷Cpr按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活定義：在40℃，pH6.0的條件下，每克樣本每小時(shí)分解多聚半乳糖醛酸產(chǎn)生1μmol的半乳糖醛酸定義為一個(gè)酶活力單位。PG酶活（U/g質(zhì)量）=x×V提取÷W÷T=0.5x÷W按照細(xì)菌數(shù)量計(jì)算酶活定義：在40℃，pH6.0的條件下，每104個(gè)細(xì)菌每小時(shí)分解多聚半乳糖醛酸產(chǎn)生1μmol的半乳糖醛酸定義為一個(gè)酶活力單位。PG酶活（U/104cell）=x×V提取÷T÷細(xì)菌數(shù)量（萬個(gè)）=0.5x÷細(xì)菌數(shù)量（萬個(gè)）按液體體積計(jì)算酶活定義：在40℃，pH6.0的條件下，每mL樣本每小時(shí)分解多聚半乳糖醛酸產(chǎn)生1μmol的半乳糖醛酸定義為一個(gè)酶活力單位。PG酶活（U/mL）=x×V樣÷V樣÷T＝0.5xV提?。杭尤胩崛∫后w積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.05mL；T：酶促反應(yīng)時(shí)間，2h。注意事項(xiàng)：1、樣本提取上清液置于冰上待測(cè)，且樣本提取完成后建議當(dāng)天提取當(dāng)天內(nèi)測(cè)完。2、當(dāng)A大于1.2時(shí)，建議將樣本用提取液