電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒說明書注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。貨號(hào)：UPLC-MS-4543規(guī)格：100T/48S

微量法產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體60mL×1瓶4℃保存試劑一粉劑0.1g×5支4℃保存試劑二液體8mL×1瓶4℃保存試劑三液體8mL×1瓶4℃保存試劑四液體18mL×1瓶4℃保存試劑五液體90mL×1瓶（自備）4℃保存試劑六液體25mL×1瓶4℃保存溶液的配制：11mL10黑后即不可再繼續(xù)使用2（160mL空瓶）產(chǎn)品說明：3蛋白質(zhì)羰基化是指氨基酸殘基側(cè)鏈中的氨基或亞氨基受到氧自由基攻擊最后轉(zhuǎn)變成醛基，并釋放NH+的過程.其在體內(nèi)的形成主要是通過金屬離子催化氧化系統(tǒng)完成。蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過程中的早期標(biāo)志，其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小，是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。3羰基與2,4-二硝基苯肼反應(yīng)生成紅色2,4-二硝基苯腙，在370nm處有特征吸收峰。注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。需自備的儀器和用品：//比色皿/96UV板、研缽/勻漿器、蒸餾水、無水乙醇、乙酸乙酯。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）0.1g1mL4℃，5000rpm10min，取上清（20μL2μL蒸餾水后用于測定蛋白含量，剩余的進(jìn)行后續(xù)步驟0.1mL10in，4℃，12000rpm10min，取上清待測。500~10001mL提取液，冰浴超聲破碎（200W3s9s3mn4℃5000rpm10min（20L2μL0.1mL10min，4℃，12000rpm10min，取上清待測。二、測定步驟30min370nm，試劑六調(diào)零。操作表對(duì)照管測定管樣本（μL）160160試劑二（μL）120試劑三（μL）120混勻，37℃避光反應(yīng)1h，每10min振蕩一次試劑四（μL）150150靜置5min，4℃，12000rpm離心15min，棄上清，留沉淀試劑五（μL）300300漩渦混勻，4℃，12000rpm離心10min，棄上清，留沉淀。重復(fù)3次。試劑六（μL）20020037℃15min4℃12000rpm15mi微量石英比色皿/96UVA370。三、計(jì)算公式用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下1、按蛋白濃度計(jì)算：（gprot=（A370-A370÷（ε×d×V÷(Cpr×V)=（370-A370÷17.6÷Cpr2、按樣本質(zhì)量計(jì)算：蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/g質(zhì)量）=（A370測定管-A370對(duì)照管）÷（ε×d）×V÷(W×V樣本÷V提取)=（A370測定管-A370對(duì)照管）÷16÷W3、按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/104cell）=（A370測定管-A370對(duì)照管）÷（ε×d）×V÷(500×V樣本÷V提取)=（A370測定管-A370對(duì)照管）÷80004、按液體體積計(jì)算：蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mL）=（A370測定管-A370對(duì)照管）÷（ε×d）×V÷V樣本=（A370測定管-A370對(duì)照管）÷17.6ε：蛋白質(zhì)羰基消光系數(shù)，22mL/μmol/cm：比色皿光徑，1cm；V：加入試劑六體積，0.2mL；V樣本：加入樣本體積，0.16mL；V1.1mL；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)