電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁糖化酶活性檢測(cè)試劑盒說明書

可見分光光度法UPLC-MS-423950T/24S試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體110mL×1瓶2-8℃保存試劑一粉劑×2瓶2-8℃保存試劑二液體35mL×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支2-8℃保存溶液的配制：1、120L約10n，24周；210mg1mL10mg/mL2-8℃周；糖化酶，即葡萄糖淀粉酶（EC），又稱γ-淀粉酶。糖化酶是由一系列微生物分泌的，具有外切酶活性α-1,4α-1,63,5-540nmSolubleStarch

Glycosylase

GlucoseGlucose+3,5-DinitrosalicylicAcid 3-Amino-5-Nitrosalicylate（540nm）注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、研缽/勻漿器，超聲破碎儀、冰和蒸餾水。一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）為0.1g1mL4℃，10000g離心10min（104個(gè)為（5001mL冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。（）30min540nm1.5、1.00.8、0.4、0.2、0.1mg/mL。序號(hào)稀釋前濃度（mg/mL）標(biāo)準(zhǔn)液體積（μL）蒸餾水體積（μL）稀釋后濃度（mg/mL）1102008002.022.0150501.532.03003001.041.0320800.850.82002000.460.42002000.270.22002000.1實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需50μL標(biāo)準(zhǔn)溶液。50μL1.5mLEP5min試劑（μL）對(duì)照管測(cè)定管空白管標(biāo)準(zhǔn)管滅活樣本50樣本50蒸餾水50標(biāo)準(zhǔn)品50試劑一500500500500充分混勻，40℃反應(yīng)20min后沸水浴5min，常溫10000g離心10min。上清液500500500500試劑二500500500500混勻，沸水浴5min，流水冷卻后，測(cè)定540nm處吸光值A(chǔ)，計(jì)算ΔA測(cè)=A測(cè)定管-A對(duì)照管，ΔA標(biāo)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做1-2次。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標(biāo)（y，ΔA標(biāo)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測(cè)（y，ΔA測(cè)）帶入公式計(jì)算樣本濃度（x，mg/mL）。酶活性定義：在40℃每毫克蛋白每小時(shí)產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。糖化酶活性（U/mgprot）=x×V樣總÷（V樣總×Cpr）÷T=3x÷Cpr酶活性定義：在40℃每克組織每小時(shí)產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。糖化酶活性（U/g質(zhì)量）=x×V樣總÷W÷T=3x÷W酶活性定義：在40℃每毫升液體每小時(shí)產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。糖化酶活性（U/mL）=x×V樣÷V樣÷T=3x酶活性定義：在40℃每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。糖化酶活性（U/104cell）=x×V樣總÷500÷T=0.006xV樣：反應(yīng)體系中加入的樣本體積，50μL=0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，需自行測(cè)定；W：樣本質(zhì)量，g；T：反