DNA重組技術的基本工具DNA重組技術的基本工具11、原理：2、操作水平：3、又稱：4、優(yōu)點：基因重組DNA分子水平DNA重組技術或基因拼接技術⑴定向改造生物性狀⑵克服遠緣雜交不親和的障礙⑶育種周期短1、原理：2、操作水平：3、又稱：4、優(yōu)點：基因重組DNA分2基因工程的別名操作環(huán)境操作對象操作水平基本過程實質(zhì)結果基因拼接技術或DNA重組技術生物體外基因DNA分子水平人類需要的基因產(chǎn)物剪切→拼接→導入→表達基因重組一、基因工程的概念基因工程的別名操作環(huán)境操作對象操作水平基本過程實質(zhì)結果基因拼3二、基因工程的基本工具看書，思考以下問題：1、基因工程中三種基本工具的作用分別是什么？2、工具酶的作用部位分別在哪？3、具備什么條件才能充當“分子運輸車”？二、基因工程的基本工具看書，思考以下問題：1、基因工程中三種4解決培育抗蟲棉的關鍵步驟需要哪些工具？關鍵步驟一的工具：關鍵步驟二的工具：關鍵步驟三的工具：基因的剪刀——限制酶基因的針線——DNA連接酶基因的運載工具——運載體解決培育抗蟲棉的關鍵步驟需要哪些工具？關鍵步驟一的工具：基因5（一）“分子手術刀”——限制性核酸內(nèi)切酶1、來源：主要來自原核生物2、特點：具有專一性（特異性）表現(xiàn)在兩方面：(1)識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列(2)從特定部位的兩個核苷酸之間切開3、作用：特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開4、結果：產(chǎn)生黏性末端或平末端（一）“分子手術刀”——限制性核酸內(nèi)切酶1、來源：主要來自原6基因工程概念課件7SmaⅠ平末端平末端SmaⅠ平末端平末端8

EcoRⅠ黏性末端黏性末端EcoRⅠ黏性末端黏性末端9黏性末端和平末端黏性末端和平末端10限制酶所識別的序列有什么特點

限制酶所識別的序列，無論是6個堿基還是4個堿基，都可以找到一條中心軸線，中軸線兩側的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復排列的。限制酶所識別的序列有什么特點限制酶所識別的序列，無論是6個11（二）“分子縫合針”——DNA連接酶1、種類：⑴E·coliDNA連接酶⑵T4DNA連接酶2、作用：（二）“分子縫合針”——DNA連接酶1、種類：⑴E·col12

可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，E·coliDNA連接酶或T4DNA連接酶即恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，E·coliDNA13

DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？T4DNA連接酶還14DNA連接酶DNA聚合酶連接DNA鏈雙鏈單鏈連接部位在兩DNA片段之間形成磷酸二酯鍵將單個核苷酸加到已存在的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵DNA連接酶DNA聚合酶連接DNA鏈雙鏈單鏈在兩DNA片段之15

常用的運載體：質(zhì)粒、噬菌體和動、植物病毒等（三）“分子運輸車”——運載體常用的運載體：質(zhì)粒、（三）“分子運輸車”——運載體16載體必須具備的條件如果載體對受體細胞有害將怎樣？目的基因是否進入受體細胞，沒有標記基因我們能否鑒定？假如目的基因?qū)胧荏w細胞后不能復制將怎樣？作為載體沒有切割位點將怎樣？載體必須具備的條件如果載體對受體細胞有害將怎樣？17作為載體的必要條件1、能夠在宿主細胞中復制并穩(wěn)定地保存；2、具有多個限制酶切點，以便與外源基因連接；3、具有某些標記基因，便于進行篩選。（如抗菌素的抗性基因、產(chǎn)物具有顏色反應的基因等）4、對受體細胞無害作為載體的必要條件1、能夠在宿主細胞中復制并穩(wěn)定地保存；18（三）“分子運輸車”——運載體2、種類：1、需要具備的條件：（1）在受體細胞中穩(wěn)定存在，能自我復制（2）有一個或多個切割位點（3）有標記基因（4）對受體細胞無害質(zhì)粒、噬菌體、動植物病毒等（三）“分子運輸車”——運載體2、種類：1、需要具備的條件：19以下是兩種限制酶切割后形成的DNA片段，試分析：①GC…②AATTC…③…GC④…CTTAACG…G……CG…G

(1)其中①和

是由一種限制酶切割形成的

末端，（2）

和

是由另一種限制酶切割形成的

末端，反饋練習：以下是兩種限制酶切割后形成的DNA片段，試分析：(1)其中20在基因工程中，切割運載體和含有目的基因的DNA片段，需使用（）同種限制酶B.兩種限制酶同種連接酶D.兩種連接酶基因工程常用的受體細胞有（）(1)大腸桿菌（2）枯草桿菌（3）支原體（4）動植物細胞A.（3）（4）B.（1）（2）（4）C.（2）（3）（4）D.（1）（2）（3）在基因工程中，切割運載體和含有目的基因的DNA片段，需使用（21不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是A、能復制(）B、有多個限制酶切點C、具有標記基因D、它是環(huán)狀DNAD不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是D221、下列不適合用于基因工程的運載體是（）A、質(zhì)粒B、噬菌體C、細菌D、病毒選我C2、下列說法正確的是：（）A、限制酶的切口一定是GAATTC堿基序列B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運載體C、重組技術所用的工具酶是限制酶、連接酶、運載體D、利用運載體在宿主細胞內(nèi)對目的基因進行大量復制的過程可稱為“克隆”選我D審題1、下列不適合用于基因工程的運載體選我C2、下列說法正確的是233、下列黏性末端屬于同種內(nèi)切酶切割而成的是（）A、①②B、①③C、①④D、②③TCGAGCTTAAAGGTTCCAAGCTTCAGAATTCG③①②④4、下列哪一種酶是基因工程的工具酶（）A、DNA連接酶B、DNA酶C、RNA酶D、運載體選我A選我A記住了3、下列黏性末端屬于同種內(nèi)切酶切割而成的TCG24基因工程概念課件25基因工程是在DNA分子水平上進行設計施工的。在基因操作的基本步驟中，不進行堿基互補配對的步驟是（）A、人工合成目的基因B、目的基因與運載體結合C、將目的基因?qū)胧荏w細胞D、目的基因的檢測和表達C基因工程是在DNA分子水平上進行設計施工的。在基因操作的基26DNA重組技術的基本工具DNA重組技術的基本工具271、原理：2、操作水平：3、又稱：4、優(yōu)點：基因重組DNA分子水平DNA重組技術或基因拼接技術⑴定向改造生物性狀⑵克服遠緣雜交不親和的障礙⑶育種周期短1、原理：2、操作水平：3、又稱：4、優(yōu)點：基因重組DNA分28基因工程的別名操作環(huán)境操作對象操作水平基本過程實質(zhì)結果基因拼接技術或DNA重組技術生物體外基因DNA分子水平人類需要的基因產(chǎn)物剪切→拼接→導入→表達基因重組一、基因工程的概念基因工程的別名操作環(huán)境操作對象操作水平基本過程實質(zhì)結果基因拼29二、基因工程的基本工具看書，思考以下問題：1、基因工程中三種基本工具的作用分別是什么？2、工具酶的作用部位分別在哪？3、具備什么條件才能充當“分子運輸車”？二、基因工程的基本工具看書，思考以下問題：1、基因工程中三種30解決培育抗蟲棉的關鍵步驟需要哪些工具？關鍵步驟一的工具：關鍵步驟二的工具：關鍵步驟三的工具：基因的剪刀——限制酶基因的針線——DNA連接酶基因的運載工具——運載體解決培育抗蟲棉的關鍵步驟需要哪些工具？關鍵步驟一的工具：基因31（一）“分子手術刀”——限制性核酸內(nèi)切酶1、來源：主要來自原核生物2、特點：具有專一性（特異性）表現(xiàn)在兩方面：(1)識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列(2)從特定部位的兩個核苷酸之間切開3、作用：特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開4、結果：產(chǎn)生黏性末端或平末端（一）“分子手術刀”——限制性核酸內(nèi)切酶1、來源：主要來自原32基因工程概念課件33SmaⅠ平末端平末端SmaⅠ平末端平末端34

EcoRⅠ黏性末端黏性末端EcoRⅠ黏性末端黏性末端35黏性末端和平末端黏性末端和平末端36限制酶所識別的序列有什么特點

限制酶所識別的序列，無論是6個堿基還是4個堿基，都可以找到一條中心軸線，中軸線兩側的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復排列的。限制酶所識別的序列有什么特點限制酶所識別的序列，無論是6個37（二）“分子縫合針”——DNA連接酶1、種類：⑴E·coliDNA連接酶⑵T4DNA連接酶2、作用：（二）“分子縫合針”——DNA連接酶1、種類：⑴E·col38

可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，E·coliDNA連接酶或T4DNA連接酶即恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，E·coliDNA39

DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？T4DNA連接酶還40DNA連接酶DNA聚合酶連接DNA鏈雙鏈單鏈連接部位在兩DNA片段之間形成磷酸二酯鍵將單個核苷酸加到已存在的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵DNA連接酶DNA聚合酶連接DNA鏈雙鏈單鏈在兩DNA片段之41

常用的運載體：質(zhì)粒、噬菌體和動、植物病毒等（三）“分子運輸車”——運載體常用的運載體：質(zhì)粒、（三）“分子運輸車”——運載體42載體必須具備的條件如果載體對受體細胞有害將怎樣？目的基因是否進入受體細胞，沒有標記基因我們能否鑒定？假如目的基因?qū)胧荏w細胞后不能復制將怎樣？作為載體沒有切割位點將怎樣？載體必須具備的條件如果載體對受體細胞有害將怎樣？43作為載體的必要條件1、能夠在宿主細胞中復制并穩(wěn)定地保存；2、具有多個限制酶切點，以便與外源基因連接；3、具有某些標記基因，便于進行篩選。（如抗菌素的抗性基因、產(chǎn)物具有顏色反應的基因等）4、對受體細胞無害作為載體的必要條件1、能夠在宿主細胞中復制并穩(wěn)定地保存；44（三）“分子運輸車”——運載體2、種類：1、需要具備的條件：（1）在受體細胞中穩(wěn)定存在，能自我復制（2）有一個或多個切割位點（3）有標記基因（4）對受體細胞無害質(zhì)粒、噬菌體、動植物病毒等（三）“分子運輸車”——運載體2、種類：1、需要具備的條件：45以下是兩種限制酶切割后形成的DNA片段，試分析：①GC…②AATTC…③…GC④…CTTAACG…G……CG…G

(1)其中①和

是由一種限制酶切割形成的

末端，（2）

和

是由另一種限制酶切割形成的

末端，反饋練習：以下是兩種限制酶切割后形成的DNA片段，試分析：(1)其中46在基因工程中，切割運載體和含有目的基因的DNA片段，需使用（）同種限制酶B.兩種限制酶同種連接酶D.兩種連接酶基因工程常用的受體細胞有（）(1)大腸桿菌（2）枯草桿菌（3）支原體（4）動植物細胞A.（3）（4）B.（1）（2）（4）C.（2）（3）（4）D.（1）（2）（3）在基因工程中，切割運載體和含有目的基因的DNA片段，需使用（47不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是A、能復制(）B、有多個限制酶切點C、具有標記基因D、它是環(huán)狀DNAD不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是D481、下列不適合用于基因工程的運載體是（）A、質(zhì)粒B、噬菌體C、細菌D、病毒選我C2、下列說法正確的是：（）A、限制酶的切口一定是GAATTC堿基序列B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運載體C、重組技術所用的工具酶是限制酶、連接酶、運載體D、利用運載體在宿主細胞內(nèi)對目的基因