杭州昊鑫生物科技股份有限公司杭州昊鑫生物科技股份有限公司杭州昊鑫生物科技股份有限公司：杭州昊鑫生物科技股份有限公司：---13,000rpm離心1分鐘，盡可能吸棄上清，加1801緩沖液YB充分重懸細(xì)胞團(tuán)。加入201的蛋白酶K溶液（20mg/m1），立刻渦旋振蕩充分混勻。將混合物放置在55℃水浴消化直到消化完全，期間輕柔的振蕩幾次幫助裂解。所需消化時(shí)間和酵母數(shù)量、種類(lèi)和生長(zhǎng)狀態(tài)有關(guān)，一般15分鐘即可，但是如果方便的話消化過(guò)夜也無(wú)不良影響?？蛇x步驟，一般不需要：如果RNA殘留較多，需要去除RNA，可在完成操作步驟5后加201RNA（25mg/m1）溶液，振蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。加入200l結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，70℃放置10分鐘。平衡液預(yù)處理吸附柱備用：使用平衡液預(yù)處理硅膠膜吸附柱為必做步驟，具體方法參見(jiàn)前文“關(guān)于平衡液的使用”冷卻后加入1001異丙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀。將上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。加入5001抑制物去除液IR，12,000rpm離心30秒，棄廢液。加入6001漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇?。?，12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。加入6001漂洗液WB，12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。取出吸附柱AC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加1001洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好），室溫放置3-5分鐘，12,000rpm離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積，但是最小體積不應(yīng)少于貝體積過(guò)小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。DNA可以存放在2-8℃，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在一20℃?！鰡?wèn)題與解決方法問(wèn)題評(píng)論與建議*某些種類(lèi)酵母裂解困難-建議：仔細(xì)閱讀步驟2,確認(rèn)處理的酵母種類(lèi)可以用lyticEnzyme裂解，還可以考慮選用其它裂解方法如玻璃珠渦旋擊打、煮沸、反復(fù)凍融等，使用早對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期酵母。*蛋白酶K失效了-建議:按照每次使用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，DNA產(chǎn)量低延長(zhǎng)處理時(shí)間。*裂解不完全或者和異丙醇沒(méi)有充分混勻-建議：加入結(jié)合液后，和加入蛋白酶K后立即吹打或者渦旋混勻；加入異丙醇后立即吹打或者渦旋混勻才加入吸附柱，如果太粘稠必須渦旋振蕩15秒充分混勻。DNA降解了*組織中核酸酶活性導(dǎo)致降解-建議：樣品處理前妥善保存在一20℃,處理量不要過(guò)量。未提取到DNA*漂洗液WB中忘記加無(wú)水乙醇-建議：第一次實(shí)驗(yàn)時(shí)，在漂洗液WB中加入指定量無(wú)水乙醇。*離心柱殘留有較多乙醇或者底部不慎沾有乙醇-建議：確保做了步洗脫下來(lái)的驟12,否則殘留乙醇會(huì)影響洗脫效率。DNA產(chǎn)量低*使用了水或者其它非最佳液體代替洗脫緩沖液-建議：仔細(xì)閱讀注意事項(xiàng)7和步驟13和只使用洗脫緩沖液EB洗脫。A26吸光值*一些硅基質(zhì)膜成分一起洗脫下來(lái)，干擾了吸光值-建議：將洗脫的異常偏高基因組DNA溶液13,000rpm再離心一分鐘，小心取上清使用。

DNA下游酶切不能切開(kāi)或者酶切不完全*一些硅基質(zhì)膜成分一起洗脫下來(lái)，抑制了酶切反應(yīng)-建議：將洗脫的基因組DNA溶液13,000rpm