花中皇后月季又稱“月月紅”，自然花期5至11月，開花連續(xù)不斷，通常扦插就可以成活。

課題2月季的花藥培養(yǎng)知識(shí)回顧花藥培養(yǎng)的原理（單倍體育種的過程？）花藥離體培養(yǎng)（N）單倍體植株（N）秋水仙素處理，使染色體加倍植株（2N）優(yōu)點(diǎn)：1明顯縮短育種年限2后代植株都為純合子。正常植株（2N）（一）被子植物的花粉發(fā)育（1）被子植物定義：凡是種子有果皮包被著，胚珠有子房壁包被著的植物，就叫做被子植物（綠色開花植物）1、被子植物和裸子植物（2）裸子植物定義：凡是胚珠裸露，外面沒有子房壁包被，種子外面沒有果皮包被的植物稱為裸子植物（無真正意義上的花）實(shí)例：玉米、大豆、梨、杏實(shí)例：松、杉、柏一、基礎(chǔ)知識(shí)花藥花絲（一）被子植物的花粉發(fā)育花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉（一）被子植物的花粉發(fā)育雄蕊花藥藥隔：花藥中部，由薄壁細(xì)胞構(gòu)成，內(nèi)有維管束（疏導(dǎo)組織）花粉囊（4或2個(gè)）表皮纖維層（3）花藥的結(jié)構(gòu)：（4）被子植物的花粉發(fā)育①經(jīng)歷時(shí)期：四分體時(shí)期、單核期、雙核期等階段②花粉發(fā)育過程：花粉的概念:由花粉母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂形成的單倍體的生殖細(xì)胞.小孢子母細(xì)胞（花粉母細(xì)胞）減數(shù)分裂4個(gè)小孢子（小孢子四分體時(shí)期）

1個(gè)小孢子（單核居中期）：這時(shí)的細(xì)胞含有濃厚的原生質(zhì)，核位于細(xì)胞中央稱為單核居中期②花粉發(fā)育過程：4個(gè)單倍體細(xì)胞連在一起，進(jìn)入單核期時(shí)（四分體的4個(gè)單倍體細(xì)胞彼此分離，各自形成具有4個(gè)單細(xì)胞核的花粉粒）有絲絲分分裂裂1個(gè)個(gè)小小孢孢子子（單核核靠靠邊邊期期））：隨隨著著細(xì)細(xì)胞胞不不斷斷長(zhǎng)長(zhǎng)大大，，細(xì)細(xì)胞胞核核由由中中央央移移向向細(xì)細(xì)胞胞一一側(cè)側(cè)稱稱為為單單核核靠靠邊邊期期花粉粉管管細(xì)細(xì)胞胞核核生殖殖細(xì)細(xì)胞胞核核營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)細(xì)細(xì)胞胞生殖殖細(xì)細(xì)胞胞有絲分裂2個(gè)個(gè)精精子子（基基因因型型相相同同））雙核核期期兩個(gè)個(gè)精精子子和和一一個(gè)個(gè)營(yíng)營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)核核的的基基因因型型相相同同生殖殖細(xì)細(xì)胞胞核核與與花花粉粉管管細(xì)細(xì)胞胞核核基基因因型型相相同同；；（一一））被被子子植植物物的的花花粉粉發(fā)發(fā)育育減數(shù)分裂細(xì)胞生長(zhǎng)小孢孢子子母母細(xì)細(xì)胞胞或花花粉粉母母細(xì)細(xì)胞胞2N4個(gè)小小孢孢子子N四分分體體時(shí)時(shí)期期1個(gè)小小孢孢子子N單核核居居中中期期單核核靠靠邊邊期期N單核花粉粒有絲分裂有絲分裂精子子（花花粉粉或或花花粉粉細(xì)細(xì)胞胞））營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)細(xì)細(xì)胞胞核核雙核花粉粒N×2三核花粉粒N×3（二二））產(chǎn)產(chǎn)生生花花粉粉植植株株的的兩兩種種途途徑徑1、、體細(xì)細(xì)胞胞胚胚（（胚胚狀狀體體））：：在在組組織織培培養(yǎng)養(yǎng)過過程程中中，，某某些些體體細(xì)細(xì)胞胞在在形形態(tài)態(tài)上上轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)變變?yōu)闉榕c與合子子發(fā)發(fā)育育成成的的胚胚非非常常相相似似的的結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)，其發(fā)育育過過程程亦亦與與合合子子胚胚類類似似。（二二））產(chǎn)產(chǎn)生生花花粉粉植植株株的的兩兩種種途途徑徑2、、產(chǎn)生生花花粉粉植植株株的的兩兩種種途途徑徑：：通過過花花藥藥培培養(yǎng)養(yǎng)產(chǎn)產(chǎn)生生的的花花粉粉植植株株（（單單倍倍體體植植株株））一一般般有有兩兩種種途途徑徑：：一一種種是是花花粉粉通通過過胚胚狀狀體體階階段段發(fā)發(fā)育育為為植植株株；；另另一一種種是是花花粉粉在在誘誘導(dǎo)導(dǎo)培培養(yǎng)養(yǎng)基基上上先先形形成成愈愈傷傷組組織織，，再再將將愈愈傷傷組組織織誘誘導(dǎo)導(dǎo)分分化化成成植植株株。。①花藥藥中中的的花花粉粉②花藥藥中中的的花花粉粉脫分分化化胚狀狀體體（花花粉粉胚胚））分化化叢芽芽脫分分化化愈傷傷組組織織再分分化化叢芽芽誘導(dǎo)導(dǎo)生根根移栽栽兩種種途途徑徑之之間間無絕絕對(duì)對(duì)界界限限，主要要取取決決于于培養(yǎng)養(yǎng)基基中中激素素的的種種類類及及其其濃濃度度配配比比。。誘導(dǎo)導(dǎo)花花粉粉植植株株能能否否成成功功及及誘誘導(dǎo)導(dǎo)成成功功率率的的高高低低，，受受多多種種因因素素影影響響，，其其中中材料料的的選選擇擇與培養(yǎng)養(yǎng)基基的的組組成成是主要要影影響響因因素素。（三三））影影響響花花藥藥培培養(yǎng)養(yǎng)的的因因素素①不同同植植物物的誘誘導(dǎo)導(dǎo)成成功功率率很很不相相同同；②同一一種種植植物物的的生理理狀狀況況對(duì)誘誘導(dǎo)導(dǎo)成成功功率率也也有有直直接接影響響：花期期早期期時(shí)的的花花藥藥比后后期期的更容容易易產(chǎn)生生花花粉粉植植株株。。一般般月月季季的的花花藥藥培培養(yǎng)養(yǎng)時(shí)時(shí)間間選選在在5月月初初到到5月月中中旬旬，，即即月月季季的的初初花花期期。。選材材是是否否成成功功是是花花藥藥培培養(yǎng)養(yǎng)成成功功的的關(guān)關(guān)鍵鍵（1））選選材材1、、材材料料的的選選擇擇：：花期期：：花期期一一般般指指在在一一個(gè)個(gè)生生長(zhǎng)長(zhǎng)季季內(nèi)內(nèi)植植株株開開花花的的時(shí)時(shí)間間段段。。比比如如某某些些種種類類的的月月季季，，從從5月月初初一一直直到到11月月都都連連續(xù)續(xù)開開花花。。那那么么5月月初初就就叫叫做做該該種種月月季季的的初初花花期期或或花花期期早早期期。?；ɑㄆ谄谠缭缙谄诘牡幕ɑɡ倮贍I(yíng)營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)狀狀態(tài)態(tài)及及生生理理狀狀態(tài)態(tài)都都比比較較好好，，能能提提高高花花粉粉誘誘導(dǎo)導(dǎo)成成功功率率。。選材是否否成功是是花藥培培養(yǎng)成功功的關(guān)鍵鍵（2）花藥培養(yǎng)養(yǎng)時(shí)期的的選擇：：合適的花花粉發(fā)育時(shí)期期是提高誘導(dǎo)導(dǎo)成功率率的重要因素素①原因：：因?yàn)椴⒉皇侨稳魏螘r(shí)期期的花粉都可以經(jīng)過培養(yǎng)養(yǎng)產(chǎn)生愈愈傷組織織或胚狀狀體，花花粉發(fā)育育的過程程中，只有某一一個(gè)時(shí)期期對(duì)離體體刺激敏敏感。（三）影影響花藥藥培養(yǎng)的的因素一般來說說，在單單核期，，細(xì)胞核核由中央央移向細(xì)細(xì)胞一側(cè)側(cè)的時(shí)期期，花藥藥培養(yǎng)的的成功率率最高。。即：最適合花花藥培養(yǎng)養(yǎng)的小孢孢子發(fā)育育時(shí)期為為單核靠靠邊期。。②花藥時(shí)期期選擇：：?jiǎn)魏丝窟呥吰?。選擇單核期以以前的花藥接接種，質(zhì)地幼嫩嫩，極易易破碎；選擇單核期之之后的花藥接接種，花瓣松動(dòng)動(dòng)，又給材料的消毒困難難，且難以挑選到單核期的的花藥。③其它時(shí)期選擇擇的缺點(diǎn)點(diǎn)④單核期花花藥的挑挑選：通常選擇擇完全未未開放的的花蕾。。盛開的或略微微開放的的花，都都不宜選選作實(shí)驗(yàn)驗(yàn)材料。。⑤選擇完全全未開放放花蕾的的原因：：花瓣松動(dòng)動(dòng)后，微生生物就可可能侵入入到花藥藥給材料的的消毒帶來來困難。。旁欄思考考：為什么花花瓣松動(dòng)動(dòng)會(huì)給消消毒帶來來困難？？可挑選到到單核期期的花,菌少、易易消毒2、培養(yǎng)養(yǎng)基的組組成：培培養(yǎng)基的的組成會(huì)會(huì)影響脫脫分化與與再分化化花藥培養(yǎng)養(yǎng)基可能能因植物物的不同同而有所所變化如如小麥中為為N6馬鈴薯、、月季中中為MS油菜中為為B5培培養(yǎng)基月季花藥藥培養(yǎng)基基配方：：在1000mlMS培養(yǎng)基基配方中中添加2,4——D(0.4mg)、、KT(0.2mg)、IAA(4mg)；調(diào)節(jié)節(jié)PH至至5.83、其他他影響因因素：如親本的生生長(zhǎng)條件件、材料的低低溫預(yù)處處理以及接種密度度對(duì)誘導(dǎo)成成功率都都有影響響。月季花藥藥培養(yǎng)時(shí)時(shí)的花粉粉粒最好好是（））A、四分分體時(shí)期期B、二核或三三核花粉粉粒C、單核核期C實(shí)驗(yàn)操作作一、材料料的選取取二、材料料的消毒毒三、接種種和培養(yǎng)養(yǎng)（一）材材料選取取2、通過鏡檢來確定是是否處于于適宜的的發(fā)育期期。方法：醋酸洋紅紅法(將染色體體染成紅紅色)焙花青-鉻礬法(花粉細(xì)胞胞核染成成藍(lán)黑色色)。1、從花藥看看：從花粉看看：從花蕾看看：花藥（載載玻片上上）→1%的醋酸洋洋紅1滴→用鑷鑷柄將花花藥搗碎碎，蓋上上蓋玻片片→鏡檢檢（花粉粉粒的細(xì)細(xì)胞核被被染成紅紅色）花藥（在在卡諾氏氏固定液液中處理理20min）→取出出，置于于載玻片片上→焙花青－－鉻礬溶溶液染色色→蓋上蓋蓋玻片→→鏡檢（（花粉粒粒的細(xì)胞胞核被染染成藍(lán)黑黑色）月季的初初花期單核期完全未開開放的（二）材材料的消消毒5、無菌水水沖洗3～5次花藥的外外面有花花萼、花花瓣保護(hù)護(hù)，通常常處于無無菌狀態(tài)態(tài)1、花蕾蕾用體積分?jǐn)?shù)數(shù)為70%的酒酒精浸泡30秒2、無菌菌水清洗洗3、無菌菌吸水紙紙吸干花花蕾表面面的水分分4、放入入質(zhì)量分?jǐn)?shù)數(shù)為0.1%的的氯化汞汞溶液中2～4分鐘（（質(zhì)量分?jǐn)?shù)數(shù)為1%的次氯酸鈣鈣溶液或飽和漂漂白粉溶溶液）（三）接接種和培培養(yǎng)1滅菌后花花蕾，要要在下除去萼萼片和花花瓣，并并立即將將花藥接接種到培培養(yǎng)基上上。3通常每瓶瓶接種花花藥，溫度控控制在左右，。幼小植植株形成成后才。2在剝離花花藥時(shí)，，要盡量量（否則接種種后，容容易從受受傷部位位產(chǎn)生二二倍體愈愈傷組織織），同時(shí)時(shí)還要徹徹底，因?yàn)榕c花花絲相連連的花藥藥不利于于愈傷組組織或胚胚狀體的的形成。一般經(jīng)過過20-30天天培養(yǎng)后后，會(huì)發(fā)發(fā)現(xiàn)花藥藥開裂，，長(zhǎng)出愈傷組織織或釋放放出胚狀狀體。將愈傷傷組織及及時(shí)轉(zhuǎn)移移到分化化培養(yǎng)基基上，以以便進(jìn)一一步分化化出再生生植株。。如果花藥藥開裂釋釋放出胚胚狀體，，則一個(gè)個(gè)花藥內(nèi)內(nèi)就會(huì)產(chǎn)產(chǎn)生大量量幼小的的植株，，必須在在花藥開開裂后盡盡快將幼幼小植株株分開，，分別移移植到新新的培養(yǎng)養(yǎng)基上，，否則這這些植株株將很難難分開。。無菌條件件不損傷花花藥去除花絲絲7-10個(gè)25℃不需要光光照需要光照照部分花藥藥通過胚胚狀體途途徑形成成小植株株煙草花藥藥培養(yǎng)胚狀體發(fā)發(fā)育途徑徑愈傷組織織轉(zhuǎn)接種種到再生生培養(yǎng)基基愈傷組織織分化形形成再生生植株水稻花藥藥培養(yǎng)愈傷組織織發(fā)育途途徑部分花藥藥產(chǎn)生愈愈傷組織織接種在平平板上的的水稻花花藥鑒定和篩篩選：常常會(huì)出出現(xiàn)染色色體倍性性的變化化主要原因因是花粉管核核和生殖殖核融合合造成的植物組織織培養(yǎng)技技術(shù)與花花藥培養(yǎng)養(yǎng)技術(shù)的的比較1離體體培養(yǎng)的的外植體體為體細(xì)胞。2有絲絲分裂的的過程，，染色體數(shù)數(shù)量不變變。1花粉粉是