北京百慧生化制藥有限責(zé)任公司工作標(biāo)準(zhǔn)文件名稱(chēng)生物指示劑管理規(guī)程文件編號(hào)22058-A編制人編制部門(mén)編制日期審核人審核部門(mén)審核日期批準(zhǔn)人批準(zhǔn)部門(mén)批準(zhǔn)日期生效日期年月日版本第2版頒發(fā)部門(mén)質(zhì)量管理部制作備份1份分發(fā)部門(mén)質(zhì)量管理部目的：為了安全、合理地使用生物指示劑，加強(qiáng)生物指示劑控制管理，制定本規(guī)程。范圍：本規(guī)程適用于干熱滅菌、濕熱滅菌驗(yàn)證或其他滅菌規(guī)程用生物指示劑的選擇、購(gòu)買(mǎi)、核對(duì)領(lǐng)取、保存、使用、銷(xiāo)毀等。責(zé)任：QC檢驗(yàn)員對(duì)本規(guī)程實(shí)施負(fù)責(zé)。內(nèi)容：操作依據(jù)：《中國(guó)藥典》2015年版四部通則1421滅菌法；生物指示劑說(shuō)明書(shū)。指示劑定義：生物指示劑系一類(lèi)特殊的活微生物制品，可用于確認(rèn)滅菌設(shè)備的性能、滅菌程序的驗(yàn)證、生產(chǎn)過(guò)程滅菌效果的監(jiān)控等。用于滅菌驗(yàn)證中的生物指示劑一般是細(xì)菌的抱子。制備生物指示劑用微生物的基本要求不同的滅菌方法使用不同的生物指示劑，制備生物指示劑所選用的微生物必須具備以下特性：菌種的耐受性應(yīng)大于需滅菌物品中所有可能污染菌的耐受性。菌種應(yīng)無(wú)致病性。菌株應(yīng)穩(wěn)定。存活期長(zhǎng)，易于保存。易于培養(yǎng)。若使用休眠抱子，生物指示劑中休眠抱子含量要在90%以上。生物指示劑的制備文件名稱(chēng)生物指示劑管理規(guī)程文件編號(hào)22058-A生物指示劑的制備應(yīng)按一定的程序進(jìn)行,制備前,需先確定所用

微生物的特性，如D值（微生物的耐熱參數(shù)，系指一定溫度下，將微生物殺滅90%所需的時(shí)間，以分鐘表示）等。菌株應(yīng)用適宜的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)物應(yīng)制成懸浮液，其中抱子的數(shù)量應(yīng)占優(yōu)勢(shì)，抱子應(yīng)懸浮于無(wú)營(yíng)養(yǎng)的液體中保存。生物指示劑中包含一定數(shù)量的一種或多種抱子，可制成多種形式。通常是將一定數(shù)量的抱子附著在惰性的載體上，如濾紙條、玻片、不銹鋼、塑料制品等；抱子懸浮液也可密封于安甑中；有的生物指示劑還配有培養(yǎng)基系統(tǒng)。D值除與滅菌條件相關(guān)外，還與微生物存在的環(huán)境有關(guān)。因此，一定形式的生物指示劑制備完成后，應(yīng)測(cè)定D值和抱子總數(shù)。生物指示劑應(yīng)選用合適的材料包裝，并設(shè)定有效期。載體和包裝材料在保護(hù)生物指示劑不致污染的同時(shí)，還應(yīng)保證滅菌劑穿透并能與生物指示劑充分接觸。載體和包裝的設(shè)計(jì)原則是便于貯存、運(yùn)輸、取樣、轉(zhuǎn)移接種。有些生物指示劑可直接將抱子接種至液體滅菌物或具有與其相似的物理和化學(xué)特性的替代品中。使用替代品時(shí)，應(yīng)用數(shù)據(jù)證明二者的等效性。生物指示劑的應(yīng)用在滅菌程序的驗(yàn)證中，盡管可通過(guò)滅菌過(guò)程參數(shù)的監(jiān)控來(lái)評(píng)估滅菌效果，但生物指示劑的被殺滅程度，則是評(píng)價(jià)一個(gè)滅菌程序有效性最直觀的指標(biāo)。可使用市售的標(biāo)準(zhǔn)生物指示劑，也可使用由日常生產(chǎn)污染菌監(jiān)控中分離的耐受性最強(qiáng)的微生物制備的抱子。在生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)中，需確定抱子在實(shí)際滅菌條件下的D值，并測(cè)定抱子的純度和數(shù)量。驗(yàn)證時(shí)，生物指示劑的微生物用量應(yīng)比日常檢出的微生物污染量大，耐受性強(qiáng)，以保證滅菌程序有更大的安全性。在最終滅菌法中，生物指示劑應(yīng)放在滅菌柜的不同部位。并避免指示劑直接接觸到被滅菌物品。生物指示劑按設(shè)定的條件滅菌后敢出，分別置培養(yǎng)基中培養(yǎng)，確定生物指示劑中的抱子是否被完全殺滅。過(guò)度殺滅產(chǎn)品滅菌驗(yàn)證一般不考慮微生物污染水平，可采用市售的生物指示劑。對(duì)滅菌手段耐受性差的產(chǎn)品，設(shè)計(jì)滅菌程序時(shí)，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)預(yù)計(jì)在該生產(chǎn)工藝中產(chǎn)品微生物污染的水平，選擇生物指示劑的菌種和抱子數(shù)量。這類(lèi)產(chǎn)品的無(wú)菌保證應(yīng)通過(guò)監(jiān)控每批滅菌前的微生物污染的數(shù)童、耐受性和滅菌程序驗(yàn)證所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估。文件名稱(chēng)生物指示劑管理規(guī)程文件編號(hào)22058-A常用生物指示劑濕熱滅菌法濕熱滅菌法最常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽抱桿菌抱子(SporesofBacillusstearothermophilus,如NCTC10007、NCIMB8157、ATCC7953)。D值為1.5?3.Omin，每片(或每瓶)活抱子數(shù)5X105?5X106個(gè)，在121C、19min下應(yīng)被完全殺滅。此外，還可使用生抱梭菌抱子(SporesofClostridiumsporogenes,如NCTC8594、NCIMB8053、ATCC7955),D值為0.4?0.8min.干熱滅菌法干熱滅菌法最常用的生物指示劑為枯草芽抱桿菌抱子(SporesofBacillussubtilis,如NCIMB8058ATCC9372).D值大于1.5min,每片活抱子數(shù)5X105?5X106個(gè)。去熱原驗(yàn)證時(shí)使用大腸埃希菌內(nèi)毒素(Escherichiacoliendoxin),加量不小于1000細(xì)菌內(nèi)毒素單位。輻射滅菌法輻射滅菌法最常用的生物指示劑為短小芽抱桿菌抱子(SporesofBacilluspumilus,如NCTC10327、NCIMB10692、ATCC27142h每片活抱子數(shù)107?108,置于放射劑量25kG爍件下，D值約3kGy。但應(yīng)注意滅菌物品中所負(fù)載的微生物可能比短小芽抱桿菌抱子顯示更強(qiáng)的抗輻射力。因此短小芽抱桿菌抱子可用于監(jiān)控滅菌過(guò)程，但不能用于滅菌輻射劑量建立的依據(jù)。氣體滅菌法環(huán)氧乙烷滅菌最常用的生物指示劑為枯草芽抱桿菌抱子(SporesofBacillussubtilis,如NCTC10073ATCC9372)8氣態(tài)過(guò)氧化氫滅菌最常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽抱桿菌抱子(SporesofBacillusstearothermophilus,如NCTC10007NCIMB8157ATCC7953)。每片活抱子數(shù)1X106?5X106個(gè)。環(huán)氧乙烷滅菌中，枯草芽抱桿菌抱子D值大于2.5min,在環(huán)氧乙烷濃度為600mg/L,相對(duì)濕度為60%,溫度為54c下滅菌，60min應(yīng)被殺滅。過(guò)濾除菌法過(guò)濾除菌法最常用的生物指示劑為缺陷假單胞菌(PseWomonasdiminuia,如ATCC19146),用于濾膜孔徑為0.22仙m3勺濾器；黏質(zhì)沙雷菌marcescem'X.ATCC14756)用于濾膜孔徑為0.45仙m的濾器。程序：購(gòu)買(mǎi)根據(jù)滅菌方式及工藝條件選擇適合的生物指示劑，由微生物實(shí)驗(yàn)室人員提出采購(gòu)計(jì)劃，經(jīng)QC主管審核，總經(jīng)理批準(zhǔn)后，交辦公室采購(gòu)。采購(gòu)單上應(yīng)注明

文件名稱(chēng)生物指示劑管理規(guī)程文件編號(hào)22058-A供應(yīng)商、有效期、生物指示劑質(zhì)量報(bào)告資料等。生物指示劑質(zhì)量報(bào)告資料應(yīng)含有D值、微生物含量、存活時(shí)間、死亡時(shí)間、有效期以及產(chǎn)品的最佳使用、貯存和培養(yǎng)條件等。核對(duì)及領(lǐng)?。汉藢?duì)：生物指示劑采購(gòu)回來(lái)后，由申購(gòu)人員對(duì)產(chǎn)品的供應(yīng)商、生物指示劑質(zhì)量報(bào)告資料中的D值、微生物含量、存活時(shí)間、死亡時(shí)間、有效期以及產(chǎn)品的最佳使用、貯存和培養(yǎng)條件等與采購(gòu)申請(qǐng)單進(jìn)行核對(duì)。核對(duì)通過(guò)后方能入庫(kù)。領(lǐng)取：申購(gòu)人員核對(duì)入庫(kù)后，由申購(gòu)人員填寫(xiě)領(lǐng)料單，立即領(lǐng)出，在規(guī)定的貯存條件保存，同時(shí)登記《生物指示劑臺(tái)賬》。保存：所有的生物指示劑均專(zhuān)人上鎖，按需發(fā)放使用。內(nèi)毒素指示劑于15c?30c保存。濕熱滅菌用生物指示劑與干熱滅菌用生物指示劑于2c?8c條件下避光保存。使用：干熱滅菌指示劑、內(nèi)毒素指示劑：熱滅菌驗(yàn)證時(shí)，干熱滅菌指示劑試驗(yàn)按照驗(yàn)證方案執(zhí)行。濕熱滅菌指示劑：濕熱滅菌驗(yàn)證時(shí)，濕熱滅菌指示劑試驗(yàn)按照驗(yàn)證方案執(zhí)行。生物指示劑試驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)在較短的時(shí)間（＜4小時(shí)）內(nèi)按說(shuō)明書(shū)上規(guī)定的條件、方法檢查，同時(shí)取1支未滅菌的生物指示劑于相同條件、方法檢查作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果判斷：通過(guò)滅菌的指示劑呈陰性結(jié)果，未滅菌（陽(yáng)性對(duì)照）的指示劑呈陽(yáng)性結(jié)果，判斷所用滅菌條件有效。使用及檢查生物指示劑的同時(shí)填寫(xiě)《生物指示劑使用記錄》及《生物指示劑試驗(yàn)