實(shí)驗(yàn)三、

小鼠骨髓染色體標(biāo)本的

制備及觀察基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)樓A412生科院辦公室電話(huà)：一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康某醪秸莆眨ㄐ∈螅┕撬杓?xì)胞染色體標(biāo)本的制備原理和方法鞏固顯微鏡的操作技術(shù)了解小鼠的染色體形態(tài)特征二、實(shí)驗(yàn)原理染色體是組成細(xì)胞核的基本物質(zhì)，是基因的載體。染色體異常也稱(chēng)染色體發(fā)育不全。目前已確認(rèn)染色體病綜合征100余種，智力低下和生長(zhǎng)發(fā)育遲滯是染色體病的共同特征。21三體綜合征；18三體綜合征、貓叫綜合征二、實(shí)驗(yàn)原理染色體標(biāo)本的觀察廣泛應(yīng)用于一些疾病的臨床診斷中。例如白血病、惡性血液病等的診斷。染色體是染色質(zhì)在細(xì)胞分裂期的存在形式。細(xì)胞分裂的中期，染色體在赤道板上排列清晰，是染色體觀察的最佳時(shí)期。

骨髓細(xì)胞數(shù)量多且分裂旺盛，可直接進(jìn)行染色體標(biāo)本的制備。取材方便，操作簡(jiǎn)單和無(wú)需無(wú)菌培養(yǎng)，是研究小型哺乳動(dòng)物等染色體的常用方法。人骨髓染色體抽取

怎樣才能制備一個(gè)好的染色體標(biāo)本？獲得大量處于有絲分裂中期的細(xì)胞。使細(xì)胞膜破裂，且染色體能夠完整并較分散的釋放出來(lái)。秋水仙素處理：秋水仙素溶液可抑制紡錘體的形成，使正在分裂的骨髓細(xì)胞停止在細(xì)胞分裂中期，積累大量中期分裂相細(xì)胞。低滲作用:使細(xì)胞充分膨脹，減少染色體間的相互纏繞和重疊。預(yù)固定：終止低滲作用，使細(xì)胞離心時(shí)不易破裂，固定維持細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。高距離滴片：使細(xì)胞膜易于破裂，獲得中期染色體標(biāo)本，在顯微鏡下觀察染色體的結(jié)構(gòu)和數(shù)量。1.秋水仙素處理：選擇體重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，與處死前4h，對(duì)其進(jìn)行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。四、實(shí)驗(yàn)步驟

注意：剪去少量骨質(zhì)，避免骨髓細(xì)胞丟失；擦凈血跡和肌肉細(xì)胞以免影響觀察；用0.075mol/LKCl收集足量細(xì)胞，反復(fù)沖洗直到股骨發(fā)白。2.取材：頸椎脫臼法處死

取兩后肢股骨紗布擦凈肌肉剪去股骨兩頭，暴露骨髓腔低滲液(5ml)沖洗至離心管內(nèi)收集骨髓細(xì)胞3.低滲：用吸管吹打骨髓細(xì)胞使其分散，加入預(yù)溫37℃的低滲液至8ml,將離心管至37℃水浴鍋中，保溫至少30min后取出，使細(xì)胞充分吸水膨脹。

低滲不足，則細(xì)胞膨脹不夠，滴片時(shí)細(xì)胞不破裂。

低滲過(guò)度，則細(xì)胞提前破裂，染色體觀察不全?？諝獯荡蚍ǎ河梦芟鹉z頭內(nèi)的空氣混勻液體。6.滴片：冰片傾斜30°,細(xì)胞懸液距離玻片30cm高，在不重疊位置滴1～2滴，用口吹散細(xì)胞，過(guò)火焰干燥。

注意：載玻片預(yù)冷、高度、吹散、不可使載玻片燙手。7.染色：在玻片上滴幾滴Giemsa染液并鋪勻，8～10min，倒去染液，晾干。（染色盤(pán)中進(jìn)行）8.小鼠染色體觀察：低倍鏡、高倍鏡下尋找染色體分散的中期分裂相.小鼠骨髓染色體10×10小鼠骨髓染色體10×40五、注意事項(xiàng)1．掌握好秋水仙素的濃度和處理時(shí)間；2．離心前需要配平；3.小鼠骨髓要沖洗干凈，以收集足夠的骨髓細(xì)胞；3．低滲處理是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵，注意低滲時(shí)間；4．固定液要現(xiàn)配現(xiàn)用，固定要充分；5．載玻片要潔凈并預(yù)冷，滴片要有一定的高度；6.細(xì)胞懸液不能太稀，要呈乳白色；7.烤片時(shí)溫度不能太高。8.沖洗染液時(shí)水流要緩慢，