小鼠骨髓細胞微核試驗受試物:環(huán)磷酰胺受試動物:小鼠實驗目的

學習和掌握小鼠骨髓細胞微核試驗的原理和方法

細胞分裂分為四個期：1、G1期（DNA合成前期）：細胞生長，為DNA復制做準備。2、S期（DNA合成期）：體細胞的DNA含量由2C增加到4C3、G2期(DNA合成后期)：該期主要為M期作準備，包括復制因子的失活和有絲分裂促進因子的分化,有關(guān)細胞骨架系統(tǒng)重新組裝的蛋白質(zhì)合成4、M期(有絲分裂期)：前期，早中期，中期，后期（微核形成期），末期

微核（micronucleus）

是染色體或染色單體的無著絲點片斷或紡錘體受損而丟失的整個染色體，于細胞分裂后期留在細胞質(zhì)中，末期后，單獨形成一個或幾個規(guī)則的次核，包含在子細胞的胞質(zhì)內(nèi)，比主核小，故叫微核。

原理：1有絲分裂毒物的作用使個別染色體或帶著絲點的染色體環(huán)和斷片在細胞分裂后期被滯留在細胞質(zhì)中2斷片或無著絲點染色體在細胞分裂后期不能定向移動，從而遺留在細胞質(zhì)中

結(jié)論：

微核試驗能檢測化學或其他物質(zhì)因素誘導產(chǎn)生的染色體完整性改變和染色體分離改變這兩種遺傳學終點微核可出現(xiàn)于多種細胞中，但在有核細胞中難以與正常核的分葉及核突出物區(qū)分，故常計數(shù)PCE細胞中的微核，因為在此階段，主核排出，易于觀察微核，這些細胞保持其嗜堿性約24小時，然后成為正染紅細胞（NCE）,并進入外周血。注：在主核排除時，微核仍保留在細胞中三：骨髓液的制備和涂片1處理：方法：取胸骨，去掉血污和肌肉，剪去每節(jié)骨骺，用彎止血鉗將骨髓擠于預先滴有小牛血清的清潔載玻片上，混合均勻后推片2固定：將推好涼干的骨髓片放進染色缸，甲醇固定15分鐘，取出晾干3染色：用新鮮配制的Giemsa應(yīng)用液（Giemsa儲備液一份加pH6.8的磷酸鹽緩沖液9份）染色10－15分鐘，細流水沖掉玻片染色液，晾干結(jié)果與分析：

1結(jié)果：試驗只計數(shù)PCE中的微核，微核率以千分率表示。每組的雌雄動物分開計數(shù)微核PCE均值。2分析：正常的PCE/NCE比值為1（0.6-1.2），如果＜0.1，則表示PCE形成受到嚴重抑制；如果＜0.05，則表示受試物劑量過大，結(jié)果不可靠。微核嗜多染細胞注意事項：1、剪胸骨時通過剪斷兩邊的肋骨來把整塊胸骨取下來，以防不小心把胸骨剪斷2、擠出骨髓處的肌肉要剔除干凈3、滴到玻片上的小牛血清不要太多，涂時要涂勻，以便推片4、染色前可以先看一下整體涂片情況，細胞分散度是否良好5、關(guān)鍵步驟是制作良好的骨髓涂片以及優(yōu)良的染色流程圖

處死小鼠，取胸骨

推片

固定（甲醇固定15分鐘）

染色（吉姆薩染色15分鐘）

觀察并記數(shù)