由于遺傳病的治療還沒有理想的方法，目前臨床遺傳的重點是如何診斷遺傳病，特別是產(chǎn)前診斷，以達到防止有遺傳缺陷的患兒出生。遺傳病的診斷是一項復雜的工作，需要多學科的配合。由于遺傳病的治療還沒有理想的方法，目前臨床遺傳的重點是如何診第一節(jié)遺傳病的臨床診斷普遍性原則遺傳學的診斷手段產(chǎn)前診斷、癥狀前診斷、現(xiàn)癥患者診斷第一節(jié)遺傳病的臨床診斷普遍性原則一、病史采集1.家族史2、婚姻史3.生育史一、病史采集二.體格檢查圍繞遺傳病的特征二.體格檢查三.系譜分析1.系譜的系統(tǒng)性、完整性、可靠性單基因，多基因；顯性，隱性；常染色體，性染色體。表現(xiàn)度、外顯率、隔代遺傳、發(fā)病風險。2.注意延遲現(xiàn)象3.新發(fā)的基因突變4.顯性與隱性的相對性三.系譜分析四.遺傳數(shù)據(jù)庫資源應用四.遺傳數(shù)據(jù)庫資源應用第二節(jié)細胞遺傳學檢查一.染色體檢查：核型分析

標本：外周血、絨毛、羊水、活檢組織。

分帶：Q-，G-,R-,C-,[熒光原為雜交(FISH)]

分析：數(shù)目(單體、多體)、結構（易位、缺失、倒位‥)二、性染色質(zhì)檢查數(shù)目和結構第二節(jié)細胞遺傳學檢查一.染色體檢查：核型分析

標本：外周血染色體檢查指征：①明顯生長發(fā)育異常、多發(fā)畸形、智力低下者；②多發(fā)性流產(chǎn)和不育的夫婦；③已經(jīng)生有染色體異?；純旱姆驄D；④性腺以及外生殖器發(fā)育異常者；⑤原發(fā)性閉經(jīng)；⑥35歲以上的高齡孕婦；⑦身材高大，性情粗暴的男性；⑧惡性血液病患者；⑨長期接受X線、電離輻射的人員。染色體檢查染色體檢查指征：染色體檢查生化檢查主要用于生化遺傳病的檢測。主要針對三方面：1）蛋白、酶活性；2）反應底物、代謝中間產(chǎn)物或終產(chǎn)物的濃度；3）受體的結合能力。例如疑為苯酮尿癥患者，可檢測血清苯丙氨酸或尿中苯乙酸濃度。第三節(jié)生化檢查生化檢查主要用于生化遺傳病的檢測。主要第三節(jié)生化檢查常見通過酶活性檢測的遺傳代謝缺陷病(1)白化病

酪氨酸酶

毛囊精氨酸琥珀酸尿癥

精氨酸代琥珀酸裂解酶

紅細胞胱硫醚尿癥

胱硫醚酶

肝、白細胞、成纖維細胞組氨酸血癥

組氨酸酶

指（趾）甲屑同型脫氨酸尿癥

胱硫醚合成酶

肝、白細胞、成纖維細胞酮性高甘氨酸血癥

丙酰輔酶A羧化酶

肝、白細胞、成纖維細胞楓糖尿病

支鏈酮酸脫羧酶

肝、白細胞、成纖維細胞苯丙酮尿癥

苯丙氨酸羥化酶

肝酪氨酸血癥I

對羧苯丙酮酸羥化酶

肝、腎酪氨酸血癥

II

酪氨酸氨基轉移酶

肝半乳糖血癥

半乳糖磷酸尿苷轉移酶

紅細胞黑朦性癡呆

氨基己糖酶

白細胞高血病

β葡萄糖苷酶

皮膚成纖維細胞疾病名稱

檢查的酶

材料生物化學檢查常見通過酶活性檢測的遺傳代謝缺陷病(1)白化病常見通過酶活性檢測的遺傳代謝缺陷病(2)腺苷脫氨酶缺乏癥

腺苷脫氨酶

紅細胞糖原貯積病I型

葡萄糖-6-磷酸酶

腸粘膜糖原貯積病II型

α-1,4-葡萄糖苷酶

皮膚成纖維細胞糖原貯積病III型

紅細胞脫支酶

紅細胞糖原貯積病IV型

支化酶

白細胞、皮膚成纖維細胞糖原貯積病VI型

肝磷酸化酶

白細胞氨酰脯氨酸缺乏癥

氨酰脯氨酸酶

白細胞高苯丙氨酸血癥

二氫喋啶還原酶

皮膚成纖維細胞瓜氨酸血癥

精氨酰琥珀酸合成酶

皮膚成纖維細胞進行性肌營養(yǎng)不良

肌酸磷酸激酶

血清疾病名稱

檢查的酶

材料生物化學檢查常見通過酶活性檢測的遺傳代謝缺陷病(2)腺苷脫氨酶缺乏癥部分通過血清和尿液檢測的遺傳代謝缺陷病

疾病名稱

血清檢測物

尿液檢測物精氨酸琥珀酸尿癥精氨酸代琥珀酸瓜氨酸血癥

瓜氨酸

瓜氨酸胱硫醚尿癥

胱硫酸胱氨酸尿癥

胱氨酸、賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸胱氨酸病

胱氨酸

胱氨酸、其它氨基酸同型胱氨酸尿癥

甲硫氨酸

同型胱氨酸羥脯氨酸血癥

羥脯氨酸

羥脯氨酸高甘氨酸血癥

甘氨酸及其它有機酸

甘氨酸高賴氨酸血癥

賴氨酸

賴氨酸、鳥氨酸、γ-氨基丁酸高脯氨酸血癥

脯氨酸

脯氨酸、羥脯氨酸、甘氨酸低磷酸血癥

磷酸乙醇胺楓糖尿病

纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸酮衍生物苯丙酮尿癥

苯丙氨酸

苯丙酮酸酪氨酸血癥

酪氨酸

酪氨酸、苯丙氨酸衍生物組氨酸血癥

組氨酸

組氨酸生物化學檢查部分通過血清和尿液檢測的遺傳代謝缺陷病疾病名稱第四節(jié)基因診斷第四節(jié)基因診斷基因表達調(diào)控基因表達調(diào)控基因的表達鑒定DNA水平：基因表達調(diào)控：1、DNA甲基化2、組蛋白修飾：乙?；姿峄?、其它基因的表達鑒定DNA水平：DNA甲基化導致基因沉默

——基因之“鎖”沉默啟動子區(qū)轉錄永固牌DNA甲基化導致基因沉默

——基因之“鎖”沉默啟動子區(qū)轉錄永AC轉錄PolIIACACACACACACMMM疏松開放致密封閉AC轉錄PolIIACACACACACACMMM疏松開放致Southern：1975年，英國人southern創(chuàng)建，是研究DNA圖譜的基本技術Southern：1975年，英國人southern創(chuàng)建，是基因的表達鑒定RNA水平：RT-PCR。

PCR：1985年，

KaryMullis發(fā)明了PCR表達譜芯片基因的表達鑒定Northernblot

，1977年檢測RNA的表達水平

mRNA直接跑膠，轉膜，雜交。Northernblot，1977年檢測RNA的表達水基因的表達鑒定Protein：Western基因的表達鑒定Protein：Western第0代遺傳標記:1、滴血認親2、血型分析第0代遺傳標記:第一代遺傳標記：限制性片段長度多態(tài)性(restrictionfragmentlengthpolymorphism，縮寫RFLP，DNA指紋)：DNA在限制性內(nèi)切酶酶切后形成的特定DNA片段的大小第一代遺傳標記：第二代遺傳標記：短串聯(lián)重復序列STR第二代遺傳標記：短串聯(lián)重復序列STR第三代遺傳標志：單核苷酸多態(tài)性（SNP）：第三代遺傳標志：單核苷酸多態(tài)性（SNP）：分子診斷的特點針對直接病因診斷特異性強，靈敏度高適應性強，診斷范圍廣目的基因是否處于活化狀態(tài)均可，無組織和發(fā)育特異性。在感染性疾病的基因診斷中，可檢測正在生長的病原體或潛伏病原體。分子診斷的特點針對直接病因診斷可以是任何有核細胞，包括：1、外周血白細胞、口腔粘膜細胞2、活檢標本、石臘包埋的組織塊3、沉淀細胞（唾液、痰液、尿液）4、羊水細胞、絨毛細胞、

進入母體循環(huán)的胎兒細胞(應用PCR，樣本可微量化到一個細胞)分子診斷的材料可以是任何有核細胞，包括：分子診斷的材料限制性片段長度多態(tài)性分析（RFLP）核酸雜交(Southern)

聚合酶鏈反應(PCR)

DNA測序基因芯片技術其它常用的技術

（1）PCR-RFLP（2）PCR-ASO

（3）PCR-SSCP分子診斷的基本技術限制性片段長度多態(tài)性分析（RFLP）分子診斷的基本技術Southern印跡雜交原理基因組DNADNA片段雜交結果分析酶切探針Southern流程Southern印跡雜交原理基因組DNADNA片段雜交結果分SouthernblottingBamHIBamHIα2α1α2

10kb14kbprobeSouthern診斷示例：-地中海貧血SouthernblottingBamHIBamHIα2αSouthernblottingαα/αααα/α-αα/--α-/----/--

14kb10kb正常缺1缺2缺3缺4Southern診斷結果分析Southernblottingαα/αααα/α-RFLP原理RFLP:RestrictionFragmentLengthPolymorphism

限制性片段長度多態(tài)性RFLP原理RFLP:RestrictionFragmeSouthern-RFLPMstII識別序列MstII1.2kbCCTGAGG

CCTGTGG

probe1.4kbxRFLP診斷:鐮狀細胞貧血癥0.2kbSouthern-RFLPMstII識別序列1.4kb1.2kb

βΑ/βΑβΑ/βSβS/βS

正常

鐮狀

鐮狀貧血Southern-RFLP結果分析Southern-RFLP結果分析PCR原理KaryMullispolymerasedNTPsPCR原理KaryMullispolymerasedNTP鐮狀細胞貧血(HbS)：第5～7位密碼子AAASSSMstⅡ:CCTNAGG

1.2Kb

0.2Kb1.40Kb1.20Kb0.20KbA:CCTGAGGAGS:CCTGTGGAGPCR-RFLP鐮狀細胞貧血(HbS)：第5～7位密碼子AAPCR-ASOASO:allele-specificoligonucleotide,等位特異性的寡核酸探針PCR-ASOASO:allele-specificol正常人病人正常探針突變探針正常探針：5’－AAGGCTTAGCTTAGCTTTGGACC突變探針：5’－AAGGCTTAGGTTAGCTTTGGACCASO點雜交檢測基因突變舉例PCR-ASO正常人病人正常探針突變探針正常探針：PCR-SSCP原理SSCP:SingleStrandConformationPolymorphism,單鏈構象多態(tài)性PCR-SSCP原理SSCP:SingleStrandPCR-SSCP示例PCR-SSCP示例DNA芯片DNA測序FISHDNA芯片F(xiàn)ISH原理FISH原理X染色體Y染色體13號染色體18號染色體21號染色體FISH應用示例X染色體Y染色體13號染色體18號染色體21號染色體FISH利用FISH技術檢測染色體易位利用FISH技術檢測21-三體(R)和13(G)染色體FISH應用示例利用FISH技術檢測染色體易位利用FISH技術檢測21-三體分子診斷的限制因素分子診斷方法具有無限廣闊的應用前景，隨著技術的不斷進步和診斷成本的不斷降低，臨床應用越來越廣泛。目前限制分子診斷應用的主要因素有：大部分遺傳相關性疾病的致病基因還未明確，特別是多基因疾病和具有遺傳異質(zhì)性的疾病；2.成本較高、周期較長；3.遺傳學和分子生物學知識還未得到廣泛的普及。分子診斷的限制因素分子診斷方法具有無限廣闊的應用前景，隨著技第18章遺傳病的治療本章主要內(nèi)容：一般原則，傳統(tǒng)方法，基因治療。第18章遺傳病的治療本章主要內(nèi)容：遺傳病治療的原則遺傳病致病的特殊性導致了其治療方法的困難，因此大多數(shù)遺傳病至今沒有理想的方法，應以預防為主。目前，遺傳病的臨床治療只能暫時控制病癥的發(fā)展，長遠效果不理想。遺傳病治療有常規(guī)治療和基因治療兩種。前者一般只能改善其表型，而后者為遺傳病治療帶來了新的希望。治療的原則：1.針對基因突變進行體細胞基因修飾；2.針對基因表達異常進行調(diào)控；3.蛋白質(zhì)功能改善；4.代謝產(chǎn)物控制；5.臨床針對癥狀的治療措施。遺傳病治療的原則遺傳病致病的特殊性導致了其治療方法的困難，因第一節(jié)手術治療手術修復手術去除器官移植修補、矯正、器官移植。例如，唇裂腭裂的修補；心臟手術，兩性生殖器的手術矯形；多囊腎的腎移植；糖尿病的胰島細胞的移植；地中海貧血的骨髓移植等。第一節(jié)手術治療手術修復第二節(jié)藥物治療補其所短去其所余螯合劑促排泄劑代謝抑制劑血漿置換或過濾平衡清除法第二節(jié)藥物治療補其所短第三節(jié)飲食治療禁其所忌控制飲食藥物控制吸收早發(fā)現(xiàn)，早治療。第三節(jié)飲食治療禁其所忌第四節(jié)基因治療基因治療(genetherapy)是一種用正?；?qū)氚屑毎Ｕ蛑脫Q致病基因的治療方法。第四節(jié)基因治療基因治療(genetherapy)是一種用第一個成功的基因治療:1990年美國的一個年僅4歲的小女孩（腺甘脫氨酶缺乏癥，先天性免疫功能不全

）接受了基因治療而且取得了成功。第一個成功的基因治療:策略1.基因修正（genecorrection）2.基因置換（genereplacement）3.基因增補（geneaugmentation）4.基因干預（geneinterference）基本流程1.目的基因的選擇和制備2.靶細胞的選擇3.目的基因的轉移方法4.外源基因的表達與檢測策略1.基因修正（genecorrection）基本靶細胞的選擇堅固、易增殖、易轉化、組織特異性基因轉染途徑物理法：電擊法化學法：轉染試劑病毒法：靶細胞的選擇途徑生殖細胞體細胞直接整合體外整合途徑生殖細胞其它方案RNA修復剪接控制RNA調(diào)控其它方案RNA修復1990年美國進行了第一例人類體細胞基因治療。治療實驗是把腺苷酸脫氨酶(ADA)基因引入一名ADA缺乏癥患兒體內(nèi)的白細胞，成功地替換了她體內(nèi)不能產(chǎn)生腺苷酸脫氨酶(ADA)的缺陷基因，從而開創(chuàng)了基因療法根治人類遺傳病的新紀元。

2006年11月20日報道：復旦大學遺傳學研究所基因治療研究組研制的“重組AAV-2人凝血因子IX注射液”獲得國家食品藥品監(jiān)督管理局的《藥物臨床研究批件》。

Roth等對6例血友病A患者實施基因治療：取患者的皮膚成纖維細胞體外培養(yǎng)，通過電穿孔把攜帶有刪除B區(qū)域的FⅧ基因質(zhì)粒轉染皮膚成纖維細胞，體外培養(yǎng)后，篩選能產(chǎn)生FⅧ的細胞進行克隆，然后在腹腔鏡幫助下注入患者的大網(wǎng)膜。隨訪12個月，4例患者FⅧ水平較治療前提高，并且外源性FⅧ使用減少。FⅧ水平提高最高的患者，臨床癥狀的改善持續(xù)大約10個月，隨訪期間無明顯副作用，未檢測出FⅧ抑制物。

基因治療的臨床應用1990年美國進行了第一例人類體細胞基因治療。治療實驗是把腺1.表達穩(wěn)定性較差或丟失，錯誤RNA，靶細胞壽命短。2.病毒載體的安全性，感染，癌變。3.表達效率不高。4.對病毒載體的免疫排斥。5.倫理問題盡管目前轉基因技術在基因治療中成功率很低，長期療效難以確定，安全性、可靠性及倫理等方面存在問題，但是臨床基因治療的成功范例，仍將激勵學者們進一步加強這一領域的基礎、臨床及相應策略的研究。相信未來伴隨基因轉移、DNA重組、基因克隆和表達等技術的迅猛發(fā)展，基因治療將成為人類攻克遺傳病的一種常規(guī)治療手段?；蛑委煷嬖诘膯栴}1.表達穩(wěn)定性較差或丟失，錯誤RNA，靶細胞壽命短。盡管目第19章遺傳病的預防第一節(jié)、普查地區(qū)、民族、個體等發(fā)育史生育史系譜第19章遺傳病的預防第一節(jié)、普查第二節(jié)遺傳篩查新生兒篩查攜帶者檢出第二節(jié)遺傳篩查新生兒篩查第三節(jié)遺傳咨詢婚前咨詢和體檢生育咨詢和體檢評估再發(fā)風險對策和措施第三節(jié)遺傳咨詢婚前咨詢和體檢產(chǎn)前診斷適應癥◆夫婦之一有染色體畸變，特別是平衡易位攜帶者，或者夫婦染色體正常，但出生過染色體異常的患兒的夫婦；◆35歲以上的高齡孕婦；◆夫婦之一有開放性神經(jīng)管畸形，或出生過這種畸形患兒的夫婦；◆夫婦之一有先天性代謝缺陷，或出生過這種患兒的夫婦；◆X連鎖遺傳病基因攜帶者孕婦；◆原因不明的習慣性流產(chǎn)的孕婦；◆羊水過多的孕婦；◆夫婦之一有致畸因素接觸史的孕婦；◆具有遺傳病家族史，又系近親婚配的孕婦。

產(chǎn)前診斷適應癥◆夫婦之一有染色體畸變，特別是平衡易位攜帶者，產(chǎn)前診斷主要從三個方面進行：①遺傳物質(zhì)檢查，如染色體檢查、基因診斷等；②生化檢查，如特殊蛋白質(zhì)、酶、代謝底物、中間產(chǎn)物和終產(chǎn)物等；③物理診斷，如B超、X線、胎兒鏡、電子監(jiān)護等。獲取胎兒組織的常用方法：1.羊膜穿刺法2.絨毛取樣法3.臍帶穿刺4.胎兒鏡檢查5.孕婦外周血胎兒細胞富集產(chǎn)前診斷的關鍵是如何獲得胎兒細胞產(chǎn)前診斷方法產(chǎn)前診斷主要從三個方面進行：獲取胎兒組織的常用方法：產(chǎn)前診斷羊膜穿刺示意圖羊膜穿刺羊膜穿刺示意圖羊膜穿刺絨毛取樣示意圖絨毛取樣絨毛取樣示意圖絨毛取樣本章重點內(nèi)容掌握染色體檢查的適應癥了解遺傳病臨床診斷方法了解分子診斷所用技術的原理了解產(chǎn)前診斷適應癥及診斷方法了解基因治療策略、途徑及方法本章重點內(nèi)容掌握染色體檢查的適應癥由于遺傳病的治療還沒有理想的方法，目前臨床遺傳的重點是如何診斷遺傳病，特別是產(chǎn)前診斷，以達到防止有遺傳缺陷的患兒出生。遺傳病的診斷是一項復雜的工作，需要多學科的配合。由于遺傳病的治療還沒有理想的方法，目前臨床遺傳的重點是如何診第一節(jié)遺傳病的臨床診斷普遍性原則遺傳學的診斷手段產(chǎn)前診斷、癥狀前診斷、現(xiàn)癥患者診斷第一節(jié)遺傳病的臨床診斷普遍性原則一、病史采集1.家族史2、婚姻史3.生育史一、病史采集二.體格檢查圍繞遺傳病的特征二.體格檢查三.系譜分析1.系譜的系統(tǒng)性、完整性、可靠性單基因，多基因；顯性，隱性；常染色體，性染色體。表現(xiàn)度、外顯率、隔代遺傳、發(fā)病風險。2.注意延遲現(xiàn)象3.新發(fā)的基因突變4.顯性與隱性的相對性三.系譜分析四.遺傳數(shù)據(jù)庫資源應用四.遺傳數(shù)據(jù)庫資源應用第二節(jié)細胞遺傳學檢查一.染色體檢查：核型分析

標本：外周血、絨毛、羊水、活檢組織。

分帶：Q-，G-,R-,C-,[熒光原為雜交(FISH)]

分析：數(shù)目(單體、多體)、結構（易位、缺失、倒位‥)二、性染色質(zhì)檢查數(shù)目和結構第二節(jié)細胞遺傳學檢查一.染色體檢查：核型分析

標本：外周血染色體檢查指征：①明顯生長發(fā)育異常、多發(fā)畸形、智力低下者；②多發(fā)性流產(chǎn)和不育的夫婦；③已經(jīng)生有染色體異?；純旱姆驄D；④性腺以及外生殖器發(fā)育異常者；⑤原發(fā)性閉經(jīng)；⑥35歲以上的高齡孕婦；⑦身材高大，性情粗暴的男性；⑧惡性血液病患者；⑨長期接受X線、電離輻射的人員。染色體檢查染色體檢查指征：染色體檢查生化檢查主要用于生化遺傳病的檢測。主要針對三方面：1）蛋白、酶活性；2）反應底物、代謝中間產(chǎn)物或終產(chǎn)物的濃度；3）受體的結合能力。例如疑為苯酮尿癥患者，可檢測血清苯丙氨酸或尿中苯乙酸濃度。第三節(jié)生化檢查生化檢查主要用于生化遺傳病的檢測。主要第三節(jié)生化檢查常見通過酶活性檢測的遺傳代謝缺陷病(1)白化病

酪氨酸酶

毛囊精氨酸琥珀酸尿癥

精氨酸代琥珀酸裂解酶

紅細胞胱硫醚尿癥

胱硫醚酶

肝、白細胞、成纖維細胞組氨酸血癥

組氨酸酶

指（趾）甲屑同型脫氨酸尿癥

胱硫醚合成酶

肝、白細胞、成纖維細胞酮性高甘氨酸血癥

丙酰輔酶A羧化酶

肝、白細胞、成纖維細胞楓糖尿病

支鏈酮酸脫羧酶

肝、白細胞、成纖維細胞苯丙酮尿癥

苯丙氨酸羥化酶

肝酪氨酸血癥I

對羧苯丙酮酸羥化酶

肝、腎酪氨酸血癥

II

酪氨酸氨基轉移酶

肝半乳糖血癥

半乳糖磷酸尿苷轉移酶

紅細胞黑朦性癡呆

氨基己糖酶

白細胞高血病

β葡萄糖苷酶

皮膚成纖維細胞疾病名稱

檢查的酶

材料生物化學檢查常見通過酶活性檢測的遺傳代謝缺陷病(1)白化病常見通過酶活性檢測的遺傳代謝缺陷病(2)腺苷脫氨酶缺乏癥

腺苷脫氨酶

紅細胞糖原貯積病I型

葡萄糖-6-磷酸酶

腸粘膜糖原貯積病II型

α-1,4-葡萄糖苷酶

皮膚成纖維細胞糖原貯積病III型

紅細胞脫支酶

紅細胞糖原貯積病IV型

支化酶

白細胞、皮膚成纖維細胞糖原貯積病VI型

肝磷酸化酶

白細胞氨酰脯氨酸缺乏癥

氨酰脯氨酸酶

白細胞高苯丙氨酸血癥

二氫喋啶還原酶

皮膚成纖維細胞瓜氨酸血癥

精氨酰琥珀酸合成酶

皮膚成纖維細胞進行性肌營養(yǎng)不良

肌酸磷酸激酶

血清疾病名稱

檢查的酶

材料生物化學檢查常見通過酶活性檢測的遺傳代謝缺陷病(2)腺苷脫氨酶缺乏癥部分通過血清和尿液檢測的遺傳代謝缺陷病

疾病名稱

血清檢測物

尿液檢測物精氨酸琥珀酸尿癥精氨酸代琥珀酸瓜氨酸血癥

瓜氨酸

瓜氨酸胱硫醚尿癥

胱硫酸胱氨酸尿癥

胱氨酸、賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸胱氨酸病

胱氨酸

胱氨酸、其它氨基酸同型胱氨酸尿癥

甲硫氨酸

同型胱氨酸羥脯氨酸血癥

羥脯氨酸

羥脯氨酸高甘氨酸血癥

甘氨酸及其它有機酸

甘氨酸高賴氨酸血癥

賴氨酸

賴氨酸、鳥氨酸、γ-氨基丁酸高脯氨酸血癥

脯氨酸

脯氨酸、羥脯氨酸、甘氨酸低磷酸血癥

磷酸乙醇胺楓糖尿病

纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸酮衍生物苯丙酮尿癥

苯丙氨酸

苯丙酮酸酪氨酸血癥

酪氨酸

酪氨酸、苯丙氨酸衍生物組氨酸血癥

組氨酸

組氨酸生物化學檢查部分通過血清和尿液檢測的遺傳代謝缺陷病疾病名稱第四節(jié)基因診斷第四節(jié)基因診斷基因表達調(diào)控基因表達調(diào)控基因的表達鑒定DNA水平：基因表達調(diào)控：1、DNA甲基化2、組蛋白修飾：乙?；?，磷酸化3、其它基因的表達鑒定DNA水平：DNA甲基化導致基因沉默

——基因之“鎖”沉默啟動子區(qū)轉錄永固牌DNA甲基化導致基因沉默

——基因之“鎖”沉默啟動子區(qū)轉錄永AC轉錄PolIIACACACACACACMMM疏松開放致密封閉AC轉錄PolIIACACACACACACMMM疏松開放致Southern：1975年，英國人southern創(chuàng)建，是研究DNA圖譜的基本技術Southern：1975年，英國人southern創(chuàng)建，是基因的表達鑒定RNA水平：RT-PCR。

PCR：1985年，

KaryMullis發(fā)明了PCR表達譜芯片基因的表達鑒定Northernblot

，1977年檢測RNA的表達水平

mRNA直接跑膠，轉膜，雜交。Northernblot，1977年檢測RNA的表達水基因的表達鑒定Protein：Western基因的表達鑒定Protein：Western第0代遺傳標記:1、滴血認親2、血型分析第0代遺傳標記:第一代遺傳標記：限制性片段長度多態(tài)性(restrictionfragmentlengthpolymorphism，縮寫RFLP，DNA指紋)：DNA在限制性內(nèi)切酶酶切后形成的特定DNA片段的大小第一代遺傳標記：第二代遺傳標記：短串聯(lián)重復序列STR第二代遺傳標記：短串聯(lián)重復序列STR第三代遺傳標志：單核苷酸多態(tài)性（SNP）：第三代遺傳標志：單核苷酸多態(tài)性（SNP）：分子診斷的特點針對直接病因診斷特異性強，靈敏度高適應性強，診斷范圍廣目的基因是否處于活化狀態(tài)均可，無組織和發(fā)育特異性。在感染性疾病的基因診斷中，可檢測正在生長的病原體或潛伏病原體。分子診斷的特點針對直接病因診斷可以是任何有核細胞，包括：1、外周血白細胞、口腔粘膜細胞2、活檢標本、石臘包埋的組織塊3、沉淀細胞（唾液、痰液、尿液）4、羊水細胞、絨毛細胞、

進入母體循環(huán)的胎兒細胞(應用PCR，樣本可微量化到一個細胞)分子診斷的材料可以是任何有核細胞，包括：分子診斷的材料限制性片段長度多態(tài)性分析（RFLP）核酸雜交(Southern)

聚合酶鏈反應(PCR)

DNA測序基因芯片技術其它常用的技術

（1）PCR-RFLP（2）PCR-ASO

（3）PCR-SSCP分子診斷的基本技術限制性片段長度多態(tài)性分析（RFLP）分子診斷的基本技術Southern印跡雜交原理基因組DNADNA片段雜交結果分析酶切探針Southern流程Southern印跡雜交原理基因組DNADNA片段雜交結果分SouthernblottingBamHIBamHIα2α1α2

10kb14kbprobeSouthern診斷示例：-地中海貧血SouthernblottingBamHIBamHIα2αSouthernblottingαα/αααα/α-αα/--α-/----/--

14kb10kb正常缺1缺2缺3缺4Southern診斷結果分析Southernblottingαα/αααα/α-RFLP原理RFLP:RestrictionFragmentLengthPolymorphism

限制性片段長度多態(tài)性RFLP原理RFLP:RestrictionFragmeSouthern-RFLPMstII識別序列MstII1.2kbCCTGAGG

CCTGTGG

probe1.4kbxRFLP診斷:鐮狀細胞貧血癥0.2kbSouthern-RFLPMstII識別序列1.4kb1.2kb

βΑ/βΑβΑ/βSβS/βS

正常

鐮狀

鐮狀貧血Southern-RFLP結果分析Southern-RFLP結果分析PCR原理KaryMullispolymerasedNTPsPCR原理KaryMullispolymerasedNTP鐮狀細胞貧血(HbS)：第5～7位密碼子AAASSSMstⅡ:CCTNAGG

1.2Kb

0.2Kb1.40Kb1.20Kb0.20KbA:CCTGAGGAGS:CCTGTGGAGPCR-RFLP鐮狀細胞貧血(HbS)：第5～7位密碼子AAPCR-ASOASO:allele-specificoligonucleotide,等位特異性的寡核酸探針PCR-ASOASO:allele-specificol正常人病人正常探針突變探針正常探針：5’－AAGGCTTAGCTTAGCTTTGGACC突變探針：5’－AAGGCTTAGGTTAGCTTTGGACCASO點雜交檢測基因突變舉例PCR-ASO正常人病人正常探針突變探針正常探針：PCR-SSCP原理SSCP:SingleStrandConformationPolymorphism,單鏈構象多態(tài)性PCR-SSCP原理SSCP:SingleStrandPCR-SSCP示例PCR-SSCP示例DNA芯片DNA測序FISHDNA芯片F(xiàn)ISH原理FISH原理X染色體Y染色體13號染色體18號染色體21號染色體FISH應用示例X染色體Y染色體13號染色體18號染色體21號染色體FISH利用FISH技術檢測染色體易位利用FISH技術檢測21-三體(R)和13(G)染色體FISH應用示例利用FISH技術檢測染色體易位利用FISH技術檢測21-三體分子診斷的限制因素分子診斷方法具有無限廣闊的應用前景，隨著技術的不斷進步和診斷成本的不斷降低，臨床應用越來越廣泛。目前限制分子診斷應用的主要因素有：大部分遺傳相關性疾病的致病基因還未明確，特別是多基因疾病和具有遺傳異質(zhì)性的疾??；2.成本較高、周期較長；3.遺傳學和分子生物學知識還未得到廣泛的普及。分子診斷的限制因素分子診斷方法具有無限廣闊的應用前景，隨著技第18章遺傳病的治療本章主要內(nèi)容：一般原則，傳統(tǒng)方法，基因治療。第18章遺傳病的治療本章主要內(nèi)容：遺傳病治療的原則遺傳病致病的特殊性導致了其治療方法的困難，因此大多數(shù)遺傳病至今沒有理想的方法，應以預防為主。目前，遺傳病的臨床治療只能暫時控制病癥的發(fā)展，長遠效果不理想。遺傳病治療有常規(guī)治療和基因治療兩種。前者一般只能改善其表型，而后者為遺傳病治療帶來了新的希望。治療的原則：1.針對基因突變進行體細胞基因修飾；2.針對基因表達異常進行調(diào)控；3.蛋白質(zhì)功能改善；4.代謝產(chǎn)物控制；5.臨床針對癥狀的治療措施。遺傳病治療的原則遺傳病致病的特殊性導致了其治療方法的困難，因第一節(jié)手術治療手術修復手術去除器官移植修補、矯正、器官移植。例如，唇裂腭裂的修補；心臟手術，兩性生殖器的手術矯形；多囊腎的腎移植；糖尿病的胰島細胞的移植；地中海貧血的骨髓移植等。第一節(jié)手術治療手術修復第二節(jié)藥物治療補其所短去其所余螯合劑促排泄劑代謝抑制劑血漿置換或過濾平衡清除法第二節(jié)藥物治療補其所短第三節(jié)飲食治療禁其所忌控制飲食藥物控制吸收早發(fā)現(xiàn)，早治療。第三節(jié)飲食治療禁其所忌第四節(jié)基因治療基因治療(genetherapy)是一種用正常基因?qū)氚屑毎?，校正或置換致病基因的治療方法。第四節(jié)基因治療基因治療(genetherapy)是一種用第一個成功的基因治療:1990年美國的一個年僅4歲的小女孩（腺甘脫氨酶缺乏癥，先天性免疫功能不全

）接受了基因治療而且取得了成功。第一個成功的基因治療:策略1.基因修