(19)中民國(guó)家知識(shí)(21(22CCTCC (71)申請(qǐng)人大地址610064省市武侯區(qū)望江29(72)發(fā)明人楊志榮馮甦趙建孫群(74)專(zhuān)利機(jī)構(gòu)天嘉專(zhuān)利(普

(10)申請(qǐng)公布號(hào) (43C12N1/20(2006.01)C12P21/00(2006.01)A23K1/16(2006.01)C12R1/245(2006.01)(57)A本發(fā)明公開(kāi)了一種干酪乳桿菌細(xì)菌素及其在飼料中的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的干酪乳桿菌分牛細(xì)SephadexG100CA

權(quán)利要求書(shū)1頁(yè)說(shuō)明書(shū)6頁(yè)附圖1A權(quán)利要求1/1中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCCM其特征在于MRS培養(yǎng)一種生產(chǎn)干酪乳桿菌細(xì)菌素的方法，是發(fā)酵干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)casei)lyT-710.0g10.0g、酵母提取5g20.0gK2HPO42.0g2.0g5.0gMgSO4.7H2O0.58g、根據(jù)權(quán)利要求260.01mol/LpH5.0的Tris-HCl緩沖液進(jìn)行洗脫，流速為3min/mL180mim-460min進(jìn)行RP-HPLC分離條件為以水(含0.1％三氟乙酸)∶乙晴(含0.1％三氟乙酸)構(gòu)[10][61112]0-35min乙腈的濃度由10％逐步增加到4535-45min乙腈的濃度由45％回調(diào)為10由權(quán)利要求2至7中任一所述的方法及已知常規(guī)方法得到的該細(xì)菌素或含該細(xì)菌素權(quán)利要求2至5的方法及已知常規(guī)方法得到的細(xì)菌素或含該細(xì)菌素的干酪乳桿菌發(fā)一種干酪乳桿菌細(xì)菌素及其在飼料中的應(yīng) [0002]乳酸菌細(xì)菌素(BacteriocinsofLAB)是指乳酸菌在代謝過(guò)程中由核糖體合成的一類(lèi)具有抑菌活性的蛋白質(zhì)、多肽或前體多肽(Klaenhammer，TR.Geneticsofbacteriocinsproducedbylacticacidbacteria.FEMS.MicrobiologyReview[J].1993.12：39～85)在抑制多種病原微生物和食物菌等方面具有重要意[0004]隨著對(duì)天然微生物抗菌物的研究的逐步深入，國(guó)內(nèi)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)細(xì)菌素是一種良好 [0006]細(xì)菌素作為抗生素替代物在飼料中的應(yīng)用有著巨大的應(yīng)用空間，但目前國(guó)內(nèi)外的[0007]201089日由位于中國(guó)..大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保其保藏編號(hào)為：CCTCC 7 酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)。[0009] (Lactobacilluscasei)lyT-7[M].中國(guó)輕工業(yè).1999) 50流[0016]提物進(jìn)一步采用SephadexG-100凝層析進(jìn)行純所述層析條件為用0.01mol/LpH5.0Tris-HCl緩沖液進(jìn)行洗脫，流速為3min/mL180mim-460min的蛋白峰為細(xì)菌素活性峰將收集到的細(xì)菌素樣品進(jìn)行RP-HPLC分離，條件為以水0.10.125min的蛋白峰為細(xì)菌素活性峰。 Monty，C.，Johnson，E.NovelmethodextractamountsofbacteriocinsfromLacticEnviron.Microbiol[J].199258(10(Cheeseman，G.C.andBerridge，N.J.Animprovedmeehodofpreparingnisin，biochem603fortheisolationofpurcNisinfromcommercialproducts，MicrobiologicalPolonica[J].1976(1)71～77)等。[0018]12120minpH2.0-11.0(S.aureus)，枯草芽孢桿菌(B.subtili)，蠟狀芽孢桿菌(B.cereus)，保加利亞乳桿菌[0019]本發(fā)明的第三個(gè)目的是將干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)[0020]13095IU/mL，將其添加到飼料中，當(dāng)每1000g飼料中加入有效抑菌物質(zhì)的量在2.5mg-10.0mg的范圍內(nèi)，能明 [0023]1(Lactobacilluscasei)lyT-70.12015mLLB7mm30min30℃16-18 48h8000rp清液進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)： 經(jīng)過(guò)上述1-2步處理后發(fā)酵上清液仍有活性經(jīng)過(guò)上述第3步處理后抑菌活性消失初步判斷干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)lyT-7產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)屬于細(xì)菌素。 [0032]30℃48h8000rpm3min/mL180mim-460min(Teixeira，M.L.，Cladera-Olivera，F(xiàn).，Santos，J.，Brandelli，A.PurificationandcharacterizationofapeptidefromBacilluslicheniformisshowingdualantimicrobialandemulsifyingactivities.FoodResearchInternational[J20081010641070洗脫采用梯度洗脫的條件為在0-35min乙腈的濃度由10％逐步增加到45收集保留時(shí)間為20-25min的蛋白峰為細(xì)菌素活[0034]測(cè)試菌株為大腸桿菌(E.coli(S.typhimuriu)，金黃色葡萄球菌(S.aureus)，枯草芽孢桿菌(B.subtill)，蠟狀芽孢桿菌(B.cereus)，保加利亞(P.chrysogenum(M.racemosus(G.candidum)。 [0039](16080100水20min121℃條件下處理20min后抑菌效果略有 2 3.04.05.06.07.08.09.010.pH2.011.01h后抑菌效果有所減退。 K(1.5mg/mL)(1.5mg/mL