第三章藥物的雜質(zhì)檢查基本要求第二節(jié)一般雜質(zhì)的檢查方法第三節(jié)特殊雜質(zhì)的檢查方法返回主目錄第一節(jié)概述練習(xí)與思考第三章藥物的雜質(zhì)檢查基本要求第二節(jié)一般雜質(zhì)的檢查方法1基本要求一、掌握一般雜質(zhì)檢查的原理、方法和計算。二、熟悉特殊雜質(zhì)檢查的方法和原理。三、了解熱分析在藥物分析中的應(yīng)用。返回基本要求一、掌握一般雜質(zhì)檢查的原理、方法和計算。返回2一、藥物的純度要求1．藥物純度的概念：藥物的純度是指藥物的純潔程度。2.藥物純度的要求是不斷提高：

例如：度冷丁1948年收入BP，1970年經(jīng)GC分離鑒定出兩種無效異構(gòu)體（Ⅱ）和（Ⅲ），有時高達(dá)20%～30%。再如：ASA中除了SA外，還存在乙酰水酸酐、乙酰水楊酰水楊酸等SA的衍生物，具有致敏作用。第一節(jié)概述一、藥物的純度要求第一節(jié)概述3

3．藥物純度的評價：

應(yīng)把藥物的性狀、理化常數(shù)、雜質(zhì)檢查、含量測定等作為一個有聯(lián)系的整體來評價藥物的純度。3．藥物純度的評價：4二、雜質(zhì)的來源與種類了解藥物中的雜質(zhì)的來源和種類，可制定出檢查的項目和方法雜質(zhì)的概念藥物中存在的無治療作用，影響藥物的療效和穩(wěn)定性，甚至對人體健康有害的物質(zhì)，稱為藥物的雜質(zhì)。二、雜質(zhì)的來源與種類雜質(zhì)的概念藥物中存在的無治療作用，5（一）雜質(zhì)的來源有兩個方面：一是在生產(chǎn)過程中引入；二是在貯藏過程中引入。1.生產(chǎn)過程中引入的雜質(zhì)主要指藥物在合成過程中，未反應(yīng)的原料、中間體和副產(chǎn)物例如：藥用NaCl的Br-、I-、SO42-、K+、Ca2+、Mg2+、Fe3+ASA中的SA；地西泮中的去甲安定；嗎啡中的罌粟堿（一）雜質(zhì)的來源1.生產(chǎn)過程中引入的雜質(zhì)例如6再如制劑中生成的雜質(zhì)：ASA片、栓劑中SA的檢查；鹽酸普魯卡因注射液中對氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇的檢查。

生產(chǎn)過程中殘留有機溶劑、酸性或堿性雜質(zhì)的檢查。

藥物中無效、低效異構(gòu)體或晶型的檢查例如：無味氯霉素存在A、B晶型，其中B為有效，A為低效。苯甲咪唑有A，B，C三種晶型；20%；40%～60%；90%

再如制劑中生成的雜質(zhì)：ASA片、栓劑中SA的檢查；鹽酸普魯7

2.貯藏過程引入的雜質(zhì)主要指外界條件的變化或微生物的作用可能發(fā)生的水解、氧化、異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)化、聚合等變化，而產(chǎn)生的有關(guān)雜質(zhì)。如：ASA水解生成SA和醋酸；阿托品水解生成莨菪醇和莨菪酸；麻醉乙醚氧化為醛和有毒的過氧化物。2.貯藏過程引入的雜質(zhì)8（二）雜質(zhì)的種類與分類

按雜質(zhì)的來源分為一般雜質(zhì)和特殊雜質(zhì)；按性質(zhì)可分為信號雜質(zhì)和有害雜質(zhì)。一般雜質(zhì)是指在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)。特殊雜質(zhì)是指在個別藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)。信號雜質(zhì)一般無害，但其含量的多少可以反映出藥物的純度水平，氯化物、硫酸鹽等就屬于信號雜質(zhì)。有害雜質(zhì)，如重金屬、砷鹽、氰化物等，對人體有害，在藥品標(biāo)準(zhǔn)中必須嚴(yán)格控制。

（二）雜質(zhì)的種類與分類9三、雜質(zhì)的限量檢查

1．雜質(zhì)限量的概念藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，叫做雜質(zhì)限量。通常用百分之幾或百萬分之幾（ppm）來表示。三、雜質(zhì)的限量檢查1．雜質(zhì)限量的概念10

2．雜質(zhì)限量的計算雜質(zhì)限量的計算公式：雜質(zhì)限量=雜質(zhì)的最大允許量÷供試品的量×100%=標(biāo)準(zhǔn)液濃度×體積÷供試品的量×100%

L（%）=C×V/S×100%例1．對乙?；又械穆然锏臋z查：已知：S=2.0g×25/100；C=10μg/ml；V=5.0ml

求：L=？

解：L=C×V/S×100%=10×5.0/2.0×106×25/100×100%=0.01%

2．雜質(zhì)限量的計算11例2．葡萄糖中重金屬的檢查：已知：S=4.0g；C=10μg/ml；L=5×10-6

求：V=？

解：V=L×S/C=5×10-6×4.0/10×10-6=2.0(ml)例3．葡萄糖中砷鹽的檢查：已知：V=2.0ml；C=1μg/ml；L=0.0004%

求：S=？

解：S=C×V/L=1×10-6×2.0/4×10-6=0.5(g)例2．葡萄糖中重金屬的檢查：12

例4．磷酸可待因中嗎啡的檢查：已知：V=5.0ml；C=0.02mg/ml；S=0.1g

求：L=？

解：L=C×V/S=5.0×0.02/0.1×1000×100%=0.1%

注意點①單位一致②稀釋倍數(shù)③表示方法（%，mmp）返回返回13第二節(jié)一般雜質(zhì)的檢查方法一、氯化物的檢查1．原理：是利用氯化物在硝酸性溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀的白色渾濁液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液在相同條件下生成的氯化銀混濁液比較，以判斷供試品中氯化物是否超過限量。Cl-+Ag+AgCl第二節(jié)一般雜質(zhì)的檢查方法一、氯化物的檢查14

2．條件：

[Cl-]0.05mg～0.08mg/50ml,即相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5ml～8ml。

酸度稀硝酸10ml/50ml。

溫度30～40℃

2．條件：15

3．干擾的排除

（1）供試品液混濁：可用含硝酸的蒸餾水洗凈氯紙中氯化物后過濾來消除混濁對氯化物檢查的干擾。

3．干擾的排除16

（2）供試品有色：可采用內(nèi)消色法，按中國藥典附錄規(guī)定的方法處理。供試品+AgNO3放置10min澄清溶液+標(biāo)準(zhǔn)NaCl+水對照溶液供試品+AgNO3+水供試品溶液暗處放置5min后比較（2）供試品有色：供試品+AgNO3放置10m17。二、硫酸鹽檢查法

1．原理

是利用SO42-在鹽酸酸性溶液中與氯化鋇試液作用，生成硫酸鋇的白色渾濁液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液在相同條件下生成的硫酸鋇渾濁液比較，以判斷供試品中硫酸鹽是否超過限量。

。二、硫酸鹽檢查法18

2．條件：[SO42-]0.1mg～0.5mg/50ml,即相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液1～5ml。

酸度稀鹽酸2ml/50ml。3．干擾的排除供試品有色：可采用內(nèi)消色法。2．條件：19

三、鐵鹽檢查法（一）硫氰酸鹽法1．原理

Fe3++6SCN-{Fe(SCN)6-]3-

紅色2．條件：[Fe3+]0.01mg～0.05mg/50ml,即相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液1～5ml。酸度稀鹽酸4ml/50ml。

HClHCl20

3．干擾的排除（1）當(dāng)有Fe2+存在時，加氧化劑過硫酸銨氧化Fe2+成Fe3+。（2）當(dāng)供試液管與對照溶液管色調(diào)不一致，或所呈硫氰酸鐵的顏色較淺不便比較時，可分別移入分液漏斗中，加正丁醇或異戊醇提取，分別取提取液比色。3．干擾的排除21(二）巰基醋酸法

1.原理巰基醋酸還原Fe3+為Fe2+，在氨堿性試液中與Fe2

+

作用生成紅色配位離子。2Fe3++2HSCH2COOH2Fe2++SCH2COOH+2H+

SCH2COOHFe2++2HSCH2COOHFe(SCH2COOH)2+H+Fe(SCH2COOH)2[Fe(SCH2COOH)2]2-+2H2O

2OH-(二）巰基醋酸法2OH-222.說明

在加巰基醋酸溶液前，先加枸櫞酸溶液，使其與鐵離形成配位離子，以免在氨堿性溶液中產(chǎn)生氫氧化鐵沉淀。（此法靈敏度比較高，但試劑較貴）2.說明23四、重金屬檢查法重金屬是指在實驗室條件下與S2-作用顯色的金屬雜質(zhì)，如銀、鉛、汞、銅、鎘、錫、銻、鉍等，由于藥品生產(chǎn)過程中遇到鉛的機會比較多，鉛在體內(nèi)友易積蓄中毒，故檢查時以鉛作為代表。

四、重金屬檢查法重金屬是指在實驗室條件下與S2-作24中國藥典重金屬的檢查法一共收載了四種方法

第一法為硫代乙酰胺法；第二法是將供試品在500~600℃在500熾灼破壞后，再按第一法檢查；第三法是檢查能溶入堿溶液，而不溶于酸溶液的藥物，在堿性條件下用硫化鈉作顯色劑；第四法為微孔濾膜法，比較供試溶液和對照溶液鉛斑的顏色，來判斷供試品種的重金屬是否超過限量。重點討論第一法。中國藥典重金屬的檢查法一共收載了第一法為硫代乙酰胺法；25

1．原理

CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S合格＜H2S+Pb2+PbS+2H+

2．條件：[Pb2+]10μg～20μg/27ml,相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液1～2ml。

酸度pH3.0～3.5.合格＜

pH3.51．原理pH3.5263．干擾的排除

(1)供試品有色：可采用外消色法消除干擾。(2)供試品有微量Fe3+:在弱酸性溶液中氧化硫化氫析出硫，產(chǎn)生混濁影響比色，可加Vc或鹽酸羥胺使Fe3+氧化成Fe2+離子再檢查。

3．干擾的排除(1)供試品有色：可采用外消色法消除干擾27五、砷鹽檢查法

《中國藥典》采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC）檢查藥物中的微量的砷鹽。（一）古蔡法Gutzeit)(BP也采用此法）

1.原理As3++3Zn+3H+3Zn++AsH3

AsO33-+3Zn+9H+3Zn++3H2O+AsH3

AsO43-+4Zn+11H+4Zn++4H2O+AsH3AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3(棕色)2As(HgBr)3+AsH33AsH(HgBr)2(黃色)

As(HgBr)3+AsH33HBr+As2Hg3(棕黑色)五、砷鹽檢查法《中國藥典》采用古蔡法和二乙基二硫代氨282.裝置與試劑作用

(1)驗砷儀砷化氫發(fā)生瓶;中空磨口塞;導(dǎo)氣管(2)試劑的作用合格＜①KI-SnCl2的作用：交替還原作用；首先將AsO43-還原成AsO33-，生成的碘再被還原成碘離子。2.裝置與試劑作用29

AsO43-+2I-+2H+

AsO33-+I2+H2O

AsO43-+Sn2++2H+AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+2I-+Sn4+

4I-+Zn2+[ZnI4]2-AsO43-+2I-+2H30

②Zn粒與氯化亞錫作用，在其面上形成Zn-Sn齊，起去極化作用。③Pb(AC)2棉的作用是消除供試品可能含有的少量的硫化物。S2-+2H+H2SH2S+HgBr22HBr+HgS（汞斑）H2S+Pb(AC)2PbS+2HAC

②Zn粒與氯化亞錫作用，在其面上形成Zn-Sn齊，起31

3.干擾的排除（1）供試品為S2-,SO32-,S2O32-等:因在酸中生成H2S,SO2,與HgBr作用生成HgS或Hg，干擾砷斑檢查。用硝酸氧化成硫酸鹽可消除。（2）供試品為Fe3+能消耗KI，SnCl2

應(yīng)測定條件，先可加足量KI。3.干擾的排除32

（3）含銻藥物

銻鹽被還原為SbH3與HgBr2試紙作用，產(chǎn)生灰色銻斑，干擾砷斑的檢查，可改用Betterdorff法。（3）含銻藥物33（二）Ag-DDC法(二乙基二硫代氨基甲酸銀，USP采用此法)

1.原理：是利用砷化氫與Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中的銀還原為紅色膠態(tài)銀，以Ag-DDC溶液為空白，于510nm的波長處，測定吸收度，供試品溶液的吸收度不得大于標(biāo)準(zhǔn)砷溶液的吸收度。2.試劑的作用：同古蔡法。（二）Ag-DDC法(二乙基二硫代氨基甲酸銀，USP采用此法34六、溶液顏色檢查法溶液顏色檢查法是控制藥物中有色雜質(zhì)量的方法。中國藥典（2000年版）收載有三種方法：K2Cr2O7黃、綠1.標(biāo)準(zhǔn)比色液進(jìn)行比較的方法標(biāo)準(zhǔn)比色液CoCl2橙黃,橙紅2.分光光度法CuSO4棕紅3.色差計法通過測定供試品與標(biāo)準(zhǔn)比色液或水之間的色差值六、溶液顏色檢查法溶液顏色檢查法是控制藥物中有色雜35七、易炭化物檢查法是檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機雜質(zhì)。這類雜質(zhì)多數(shù)結(jié)構(gòu)未知，常采用與標(biāo)準(zhǔn)比色液比色的方法進(jìn)行檢查。(標(biāo)準(zhǔn)比色液為CoCl2,K2Cr2O7,CuSO4)

七、易炭化物檢查法是檢查藥物中遇硫酸36

是檢查藥物中的微量不溶性雜質(zhì)。常采用與濁度標(biāo)準(zhǔn)液比濁的方法進(jìn)行檢查。濁度標(biāo)準(zhǔn)液制備原理：(CH2)6N4+6H2O6HCHO+4NH3HCHO+H2N-NH2H2C=N-NH2+H2O

甲醛腙白色混濁

不同級號濁度標(biāo)準(zhǔn)液級號0.51234濁度標(biāo)準(zhǔn)原液（ml）2.55.010.030.050.0水（ml）97.595.090.070.050.0八、溶液澄清度檢查法是檢查藥物中的微量不溶性雜質(zhì)。常采用與濁37九、熾灼殘渣檢查法(residueonignition)BP稱硫酸灰分（sulphatedash)是檢查有機藥物中混入的各種無機雜質(zhì)。常采用重量方法進(jìn)行檢查。

殘渣及坩堝重—坩堝重

殘渣%=×100%

供試品重九、熾灼殘渣檢查法(residueonignition)38十、干燥失重檢查法主要檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性的物質(zhì)。常采用重量方法進(jìn)行檢查。常用的方法有四種：（一）常壓恒溫干燥法

（二）干燥劑干燥法

（三）

減壓干燥法十、干燥失重檢查法主要檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性的39熱重分析法（四）熱分析法（thermoanalysis)

差示熱分析差示掃描量熱法1.熱重分析法（thermogravimetricanalysis,TGA)

在程序升溫下，測量物質(zhì)的質(zhì)量與溫度的關(guān)系，研究物質(zhì)在加熱同時失重的情況下，所發(fā)生的質(zhì)的變化，常用于藥物穩(wěn)定性的研究；貴重和易氧化藥物的干燥失重測定。(長春堿)

402.差示熱分析（differentialthermlanalysis,DTA)

是在程序升溫下，測量被測物質(zhì)和參比物之間的溫差與溫度關(guān)系的一種技術(shù)。參比物是一種惰性物質(zhì)，在加熱過程中不發(fā)生相變和化學(xué)變化。因此溫差(△T)只與被測物質(zhì)的量質(zhì)變化有關(guān)?！鱐=0被測物未發(fā)生吸熱或放熱反應(yīng);△T=-為吸熱峰;△T=+為放熱峰.2.差示熱分析（differentialtherml41測藥的溶點

DTA在藥物分析中應(yīng)用尖峰為物理變化藥物定性分析寬峰為化學(xué)變化估測藥物的純度測藥的溶點423.差示掃描量熱法(differentialscanningcalorimetry,DSC)是在程序升溫下，測量維持樣品和參比物的溫度相同，系統(tǒng)所需供給樣品隨溫差變化的能量的一種技術(shù)。DSC與DTA的不同之

處是記錄方式不同，是記錄系統(tǒng)供給的能量，吸熱供給能量；放熱減少供給的能量。在藥物分析中應(yīng)用與DTA相同。DSC-TG常聯(lián)合用。3.差示掃描量熱法(differentialsc43十一、有機溶劑殘留量測定法[ChP(1995)]主要檢查藥物在生產(chǎn)過程中引入的有害的有機溶劑(如苯、氯仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、環(huán)氧乙烷、二氧六環(huán)等）。常采用氣相色譜法方法進(jìn)行檢查。常用的方法有二種：①直接進(jìn)樣法和②頂空進(jìn)樣法（試用于揮發(fā)性大的樣品測定）。色譜系統(tǒng)性試驗的要求：(1)N＞1000;(2)用內(nèi)標(biāo)法測定時，要求R＞1.5;(3)外標(biāo)法測定時，待測物的峰面積的RSD＜10%。十一、有機溶劑殘留量測定法[ChP(1995)]44殘留有機溶劑測定的方法和限量有機溶劑柱溫（℃）內(nèi)標(biāo)物測定方法限量（%）二氧六環(huán)170吡啶1法0.038吡啶170二氧六環(huán)1法0.02苯170甲苯1法或2法0.0002甲苯170苯1法或2法0.089氯方140二氯甲烷1法或2法0.006二氯甲烷1401法或2法0.06環(huán)氧乙烷802法0.001返回殘留有機溶劑測定的方法和限量有機溶劑45第三節(jié)特殊雜質(zhì)的檢查方法

一、利用藥物和雜質(zhì)在物理性質(zhì)上的差異（一）臭味及揮發(fā)性質(zhì)的差異例如：黃凡士林中異性有機物檢查：本品2.0g,直火加熱無辛味。濃過氧化氫中不揮發(fā)性雜質(zhì)檢查：10ml水浴蒸干殘渣＜15mg（二）顏色差異例如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的檢查：取本品2.0g，加NaOH試液10ml，加水25ml，與黃色3號比色液比，

不得更深。第三節(jié)特殊雜質(zhì)的檢查方法一、利用藥物和雜質(zhì)在物理性46（三）溶解行為的差異例如：吡哌酸中堿中不溶物吡哌酸甲酯（I）和（II）檢查（四）旋光性質(zhì)的差異例如：硫酸阿托品中莨菪堿的檢查：本品溶液(50mg/ml)α＜-0.4

（三）溶解行為的差異47

（五）對光吸收性質(zhì)的差異1.紫外分光光度法：例如:地蒽酚中二羥基蒽醌的檢查再如：苯丙醇中苯丙酮的檢查：可利用供試液的吸收度比來控制雜質(zhì);純品苯丙醇A247nm/A258nm=0.59;99.5%時A247nm/A258nm=0.79;

因此規(guī)定供試品A247nm/A258nm＜0.79;即所含苯丙酮＜0.5%.（五）對光吸收性質(zhì)的差異再如：苯丙醇中苯丙酮的檢482.原子吸收分光光度法：是通過測定藥物中所含待測元素原子蒸氣，吸收發(fā)自光源的該元素特定波長的程度，以求出藥物中待測元素的含量。限量檢查時：對照品液=供試品+限量-----a

供試品液=------------------

b

符合規(guī)定時b＜(a-b);b＞(a-b)不合格。2.原子吸收分光光度法：493。紅外分光光度法：

主要用于藥物中無效或低效晶型檢查，如甲苯咪唑中A晶型檢查3。紅外分光光度法：50

A晶型C晶型在640cm-1有強吸收吸收很弱在662cm-1吸收很弱有強吸收662cm-1640cm-1662cm-1640cm-1供試品+10%A晶型D2D1

供試品D2D1＜10%

R=D1/D2＞R’=D’1/D’2

51

4.熒光分析法

3,4-二去氫利血平利血平中氧化產(chǎn)物檢查：利血平(無熒光)(I)(黃綠色熒光)3,4,5,6-四去氫利血平(II)(藍(lán)色熒光)4.熒光分析法52(六)吸附或分配性的差異

1.薄層色譜法(TLC)(1)雜質(zhì)對照品法例如:鹽酸左旋咪唑中檢查硅膠G2,3-二氫-6-苯基咪唑[2,1-b]噻唑鹽苯:甲醇:冰醋酸

樣品

對照品?！ぁぁぁぁ?六)吸附或分配性的差異(1)雜質(zhì)對照品法?！?3

(2)高低濃度對比品法例如:鹽酸異丙嗪中有關(guān)物質(zhì)的檢查硅膠G有多個雜質(zhì)而且結(jié)構(gòu)不清樣品10mg/ml;對照品(1)0.15mg/ml己烷:丙酮:乙胺(2)0.05mg/ml

樣品液對(1)(2)

供試液雜質(zhì)斑點不多于3個;雜質(zhì)斑點與對照(2)的主斑點比較,不得更深;如有一點超過,應(yīng)不深于對照液(2)的主斑點.......

....

...(2)高低濃度對比品法........542.紙層析法(PC)

常用于極性大的藥物的分離、分析，如地高辛中的有關(guān)雜質(zhì)的檢查。2.紙層析法(PC)553.高效液相色譜法(HPLC)（1）峰面積歸一化法：L%=∑Ai/(∑Ai+A主）×100%例如：利巴韋林中有關(guān)雜質(zhì)的檢查：對照品液(5μg/ml)進(jìn)樣10μl,調(diào)靈敏度，使主峰達(dá)滿量程的20%～25%樣品液(0.4mg/ml)進(jìn)樣10μl,雜質(zhì)∑Ai＜(∑Ai+A主）的1.0%3.高效液相色譜法(HPLC)56（2）不加校正因子主成分對照法

對照品液為供試品的稀釋液進(jìn)樣測得A主

供試品液進(jìn)樣測得∑Ai

其∑Ai＜A主即為合格.

例如:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑:對照品液(0.01mg/ml)進(jìn)樣20μl,調(diào)靈敏度，使主峰達(dá)10%～30%樣品液(0.14mg/ml)進(jìn)樣20μl,雜質(zhì)∑Ai＜A主的1.0%.藥物分析第三章-課件57（3）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中雜質(zhì)的含量

對照品+內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣求校正因子（f)=(As/Cs)/(AR/CR)

供試品+內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣求AX.AS,則雜質(zhì)濃度CX=f×AX/(AS/CS)（3）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中雜質(zhì)的含量58

4.氣相色譜法(GC)

主要用于藥物中揮發(fā)性的雜質(zhì)檢查，其檢查方法與HPLC法相同。4.氣相色譜法(GC)59二、利用藥物和雜質(zhì)在化學(xué)性上的差異（一）酸堿性的差異

1.規(guī)定消耗滴定液體積例如己酸羥孕酮中正己酐、對甲苯磺酸檢查：(NaOH0.02mol/L)取本品0.20g+中性乙醇+溴麝香草酚藍(lán)微藍(lán)色＜0.50ml2.pH法例如乙琥胺中2-甲基-2-乙基丁二酸檢查：0.01g/mlpH3.0～4.5.3.指示劑法

例如苯巴比妥中苯基丙二酰脲檢查：其水溶液不得使甲基橙顯紅色。二、利用藥物和雜質(zhì)在化學(xué)性上的差異（一）酸堿性的差異60（二）氧化還原性的差異例如：NaCl中I-和Br-檢查EOCl/2Cl-=+1.3595V＞EOBr/2Br-=+1.065V

＞EOI/2I-=+0.5345V,因此+NaNO2+H2SO4+淀粉顯藍(lán)色

再例如：鹽酸嗎啡中阿樸嗎啡的檢查：后者可被碘氧化生成水溶性綠色化合物。因此ChP規(guī)定：本品50mg+4mlH2O+1dI2+5ml乙醚乙醚層不得顯紅色；水層不得顯綠色。再例如：鹽酸嗎啡中阿樸嗎啡的檢查：后者可被碘氧化生成水溶性61（三）雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生沉淀例一、間苯二酚中鄰苯二酚檢查：后者+Pb(Ac)2

白色∴ChP規(guī)定：本品0.5g+10mlH2O+2d稀醋酸+0.5mlPb(Ac)2

不得發(fā)生混濁，即為合格。例二、硝酸毛果蕓香堿中其他生物的檢查：后者+氨水+K2Cr2O7∴ChP規(guī)定：本品0.2g+20mlH2O兩份；I份+數(shù)滴氨試液；另1份+數(shù)滴K2Cr2O7試液，均不得發(fā)生混濁。（三）雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生沉淀62（四）雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色例一、鹽酸普萘洛爾中游離α-萘酚檢查：利用后者可與重氮鹽發(fā)生重氮化-偶合反應(yīng)，生成偶氮染料?！郈hP規(guī)定：供試品20mg+乙醇與10%NaOH液各2ml+重氮苯磺酸試液1ml,放置3min；如顯色，與0.3mlα-萘酚對照液（20μg/ml)比較不得更深。例二、碘他拉酸中氨基化合物的檢查：利用重氮化-偶合反應(yīng)∴ChP規(guī)定：供試品2.5mg/ml經(jīng)重氮化-偶合反應(yīng)后，在波長485nm測得A＜0.25（四）雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色63（五）雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生氣體ChP附錄中收載氰化物的兩種檢查方法：第一法：改進(jìn)普魯士藍(lán)法原理：CN-+酒石酸HCN[Fe(CN)6]4-Fe4[Fe(CN)6]第二法：氣體擴散-三硝基苯酚鋰法原理：HCN擴散進(jìn)入三硝基苯酚鋰試液，生成異紅紫酸鹽，在500nm波長處測定吸收度?！鱂e2+Fe3+（五）雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生氣體ChP附錄中64（六）藥物經(jīng)有機破壞后檢查雜質(zhì)

某些環(huán)狀有機藥物在生產(chǎn)中可能引入磷、硫、鹵素及硒等雜質(zhì)，這些雜質(zhì)與有機分子中的碳原子以共價鍵結(jié)合，需進(jìn)行有機破壞后檢查，各國藥典所采用的方法為氧瓶燃燒法。(下章討論)1。硒檢查法：有機破壞轉(zhuǎn)化為SeO3+H2OH2SeO4H2SeO4+2NH2OHH2SeO3+3H2OH2SeO3+二氨基萘4，5-苯并本硒二唑（378nm有吸收）（六）藥物經(jīng)有機破壞后檢查雜質(zhì)65

2。氟檢查法

有機氟藥物F-+茜素氟藍(lán)+硝酸亞鈰紫色配位化合物（610nm）

[O]pH4.3返回2。氟檢查法[O]pH4.3返回66第三章藥物的雜質(zhì)檢查基本要求第二節(jié)一般雜質(zhì)的檢查方法第三節(jié)特殊雜質(zhì)的檢查方法返回主目錄第一節(jié)概述練習(xí)與思考第三章藥物的雜質(zhì)檢查基本要求第二節(jié)一般雜質(zhì)的檢查方法67基本要求一、掌握一般雜質(zhì)檢查的原理、方法和計算。二、熟悉特殊雜質(zhì)檢查的方法和原理。三、了解熱分析在藥物分析中的應(yīng)用。返回基本要求一、掌握一般雜質(zhì)檢查的原理、方法和計算。返回68一、藥物的純度要求1．藥物純度的概念：藥物的純度是指藥物的純潔程度。2.藥物純度的要求是不斷提高：

例如：度冷丁1948年收入BP，1970年經(jīng)GC分離鑒定出兩種無效異構(gòu)體（Ⅱ）和（Ⅲ），有時高達(dá)20%～30%。再如：ASA中除了SA外，還存在乙酰水酸酐、乙酰水楊酰水楊酸等SA的衍生物，具有致敏作用。第一節(jié)概述一、藥物的純度要求第一節(jié)概述69

3．藥物純度的評價：

應(yīng)把藥物的性狀、理化常數(shù)、雜質(zhì)檢查、含量測定等作為一個有聯(lián)系的整體來評價藥物的純度。3．藥物純度的評價：70二、雜質(zhì)的來源與種類了解藥物中的雜質(zhì)的來源和種類，可制定出檢查的項目和方法雜質(zhì)的概念藥物中存在的無治療作用，影響藥物的療效和穩(wěn)定性，甚至對人體健康有害的物質(zhì)，稱為藥物的雜質(zhì)。二、雜質(zhì)的來源與種類雜質(zhì)的概念藥物中存在的無治療作用，71（一）雜質(zhì)的來源有兩個方面：一是在生產(chǎn)過程中引入；二是在貯藏過程中引入。1.生產(chǎn)過程中引入的雜質(zhì)主要指藥物在合成過程中，未反應(yīng)的原料、中間體和副產(chǎn)物例如：藥用NaCl的Br-、I-、SO42-、K+、Ca2+、Mg2+、Fe3+ASA中的SA；地西泮中的去甲安定；嗎啡中的罌粟堿（一）雜質(zhì)的來源1.生產(chǎn)過程中引入的雜質(zhì)例如72再如制劑中生成的雜質(zhì)：ASA片、栓劑中SA的檢查；鹽酸普魯卡因注射液中對氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇的檢查。

生產(chǎn)過程中殘留有機溶劑、酸性或堿性雜質(zhì)的檢查。

藥物中無效、低效異構(gòu)體或晶型的檢查例如：無味氯霉素存在A、B晶型，其中B為有效，A為低效。苯甲咪唑有A，B，C三種晶型；20%；40%～60%；90%

再如制劑中生成的雜質(zhì)：ASA片、栓劑中SA的檢查；鹽酸普魯73

2.貯藏過程引入的雜質(zhì)主要指外界條件的變化或微生物的作用可能發(fā)生的水解、氧化、異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)化、聚合等變化，而產(chǎn)生的有關(guān)雜質(zhì)。如：ASA水解生成SA和醋酸；阿托品水解生成莨菪醇和莨菪酸；麻醉乙醚氧化為醛和有毒的過氧化物。2.貯藏過程引入的雜質(zhì)74（二）雜質(zhì)的種類與分類

按雜質(zhì)的來源分為一般雜質(zhì)和特殊雜質(zhì)；按性質(zhì)可分為信號雜質(zhì)和有害雜質(zhì)。一般雜質(zhì)是指在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)。特殊雜質(zhì)是指在個別藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)。信號雜質(zhì)一般無害，但其含量的多少可以反映出藥物的純度水平，氯化物、硫酸鹽等就屬于信號雜質(zhì)。有害雜質(zhì)，如重金屬、砷鹽、氰化物等，對人體有害，在藥品標(biāo)準(zhǔn)中必須嚴(yán)格控制。

（二）雜質(zhì)的種類與分類75三、雜質(zhì)的限量檢查

1．雜質(zhì)限量的概念藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，叫做雜質(zhì)限量。通常用百分之幾或百萬分之幾（ppm）來表示。三、雜質(zhì)的限量檢查1．雜質(zhì)限量的概念76

2．雜質(zhì)限量的計算雜質(zhì)限量的計算公式：雜質(zhì)限量=雜質(zhì)的最大允許量÷供試品的量×100%=標(biāo)準(zhǔn)液濃度×體積÷供試品的量×100%

L（%）=C×V/S×100%例1．對乙酰基酚中的氯化物的檢查：已知：S=2.0g×25/100；C=10μg/ml；V=5.0ml

求：L=？

解：L=C×V/S×100%=10×5.0/2.0×106×25/100×100%=0.01%

2．雜質(zhì)限量的計算77例2．葡萄糖中重金屬的檢查：已知：S=4.0g；C=10μg/ml；L=5×10-6

求：V=？

解：V=L×S/C=5×10-6×4.0/10×10-6=2.0(ml)例3．葡萄糖中砷鹽的檢查：已知：V=2.0ml；C=1μg/ml；L=0.0004%

求：S=？

解：S=C×V/L=1×10-6×2.0/4×10-6=0.5(g)例2．葡萄糖中重金屬的檢查：78

例4．磷酸可待因中嗎啡的檢查：已知：V=5.0ml；C=0.02mg/ml；S=0.1g

求：L=？

解：L=C×V/S=5.0×0.02/0.1×1000×100%=0.1%

注意點①單位一致②稀釋倍數(shù)③表示方法（%，mmp）返回返回79第二節(jié)一般雜質(zhì)的檢查方法一、氯化物的檢查1．原理：是利用氯化物在硝酸性溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀的白色渾濁液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液在相同條件下生成的氯化銀混濁液比較，以判斷供試品中氯化物是否超過限量。Cl-+Ag+AgCl第二節(jié)一般雜質(zhì)的檢查方法一、氯化物的檢查80

2．條件：

[Cl-]0.05mg～0.08mg/50ml,即相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5ml～8ml。

酸度稀硝酸10ml/50ml。

溫度30～40℃

2．條件：81

3．干擾的排除

（1）供試品液混濁：可用含硝酸的蒸餾水洗凈氯紙中氯化物后過濾來消除混濁對氯化物檢查的干擾。

3．干擾的排除82

（2）供試品有色：可采用內(nèi)消色法，按中國藥典附錄規(guī)定的方法處理。供試品+AgNO3放置10min澄清溶液+標(biāo)準(zhǔn)NaCl+水對照溶液供試品+AgNO3+水供試品溶液暗處放置5min后比較（2）供試品有色：供試品+AgNO3放置10m83。二、硫酸鹽檢查法

1．原理

是利用SO42-在鹽酸酸性溶液中與氯化鋇試液作用，生成硫酸鋇的白色渾濁液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液在相同條件下生成的硫酸鋇渾濁液比較，以判斷供試品中硫酸鹽是否超過限量。

。二、硫酸鹽檢查法84

2．條件：[SO42-]0.1mg～0.5mg/50ml,即相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液1～5ml。

酸度稀鹽酸2ml/50ml。3．干擾的排除供試品有色：可采用內(nèi)消色法。2．條件：85

三、鐵鹽檢查法（一）硫氰酸鹽法1．原理

Fe3++6SCN-{Fe(SCN)6-]3-

紅色2．條件：[Fe3+]0.01mg～0.05mg/50ml,即相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液1～5ml。酸度稀鹽酸4ml/50ml。

HClHCl86

3．干擾的排除（1）當(dāng)有Fe2+存在時，加氧化劑過硫酸銨氧化Fe2+成Fe3+。（2）當(dāng)供試液管與對照溶液管色調(diào)不一致，或所呈硫氰酸鐵的顏色較淺不便比較時，可分別移入分液漏斗中，加正丁醇或異戊醇提取，分別取提取液比色。3．干擾的排除87(二）巰基醋酸法

1.原理巰基醋酸還原Fe3+為Fe2+，在氨堿性試液中與Fe2

+

作用生成紅色配位離子。2Fe3++2HSCH2COOH2Fe2++SCH2COOH+2H+

SCH2COOHFe2++2HSCH2COOHFe(SCH2COOH)2+H+Fe(SCH2COOH)2[Fe(SCH2COOH)2]2-+2H2O

2OH-(二）巰基醋酸法2OH-882.說明

在加巰基醋酸溶液前，先加枸櫞酸溶液，使其與鐵離形成配位離子，以免在氨堿性溶液中產(chǎn)生氫氧化鐵沉淀。（此法靈敏度比較高，但試劑較貴）2.說明89四、重金屬檢查法重金屬是指在實驗室條件下與S2-作用顯色的金屬雜質(zhì)，如銀、鉛、汞、銅、鎘、錫、銻、鉍等，由于藥品生產(chǎn)過程中遇到鉛的機會比較多，鉛在體內(nèi)友易積蓄中毒，故檢查時以鉛作為代表。

四、重金屬檢查法重金屬是指在實驗室條件下與S2-作90中國藥典重金屬的檢查法一共收載了四種方法

第一法為硫代乙酰胺法；第二法是將供試品在500~600℃在500熾灼破壞后，再按第一法檢查；第三法是檢查能溶入堿溶液，而不溶于酸溶液的藥物，在堿性條件下用硫化鈉作顯色劑；第四法為微孔濾膜法，比較供試溶液和對照溶液鉛斑的顏色，來判斷供試品種的重金屬是否超過限量。重點討論第一法。中國藥典重金屬的檢查法一共收載了第一法為硫代乙酰胺法；91

1．原理

CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S合格＜H2S+Pb2+PbS+2H+

2．條件：[Pb2+]10μg～20μg/27ml,相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液1～2ml。

酸度pH3.0～3.5.合格＜

pH3.51．原理pH3.5923．干擾的排除

(1)供試品有色：可采用外消色法消除干擾。(2)供試品有微量Fe3+:在弱酸性溶液中氧化硫化氫析出硫，產(chǎn)生混濁影響比色，可加Vc或鹽酸羥胺使Fe3+氧化成Fe2+離子再檢查。

3．干擾的排除(1)供試品有色：可采用外消色法消除干擾93五、砷鹽檢查法

《中國藥典》采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC）檢查藥物中的微量的砷鹽。（一）古蔡法Gutzeit)(BP也采用此法）

1.原理As3++3Zn+3H+3Zn++AsH3

AsO33-+3Zn+9H+3Zn++3H2O+AsH3

AsO43-+4Zn+11H+4Zn++4H2O+AsH3AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3(棕色)2As(HgBr)3+AsH33AsH(HgBr)2(黃色)

As(HgBr)3+AsH33HBr+As2Hg3(棕黑色)五、砷鹽檢查法《中國藥典》采用古蔡法和二乙基二硫代氨942.裝置與試劑作用

(1)驗砷儀砷化氫發(fā)生瓶;中空磨口塞;導(dǎo)氣管(2)試劑的作用合格＜①KI-SnCl2的作用：交替還原作用；首先將AsO43-還原成AsO33-，生成的碘再被還原成碘離子。2.裝置與試劑作用95

AsO43-+2I-+2H+

AsO33-+I2+H2O

AsO43-+Sn2++2H+AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+2I-+Sn4+

4I-+Zn2+[ZnI4]2-AsO43-+2I-+2H96

②Zn粒與氯化亞錫作用，在其面上形成Zn-Sn齊，起去極化作用。③Pb(AC)2棉的作用是消除供試品可能含有的少量的硫化物。S2-+2H+H2SH2S+HgBr22HBr+HgS（汞斑）H2S+Pb(AC)2PbS+2HAC

②Zn粒與氯化亞錫作用，在其面上形成Zn-Sn齊，起97

3.干擾的排除（1）供試品為S2-,SO32-,S2O32-等:因在酸中生成H2S,SO2,與HgBr作用生成HgS或Hg，干擾砷斑檢查。用硝酸氧化成硫酸鹽可消除。（2）供試品為Fe3+能消耗KI，SnCl2

應(yīng)測定條件，先可加足量KI。3.干擾的排除98

（3）含銻藥物

銻鹽被還原為SbH3與HgBr2試紙作用，產(chǎn)生灰色銻斑，干擾砷斑的檢查，可改用Betterdorff法。（3）含銻藥物99（二）Ag-DDC法(二乙基二硫代氨基甲酸銀，USP采用此法)

1.原理：是利用砷化氫與Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中的銀還原為紅色膠態(tài)銀，以Ag-DDC溶液為空白，于510nm的波長處，測定吸收度，供試品溶液的吸收度不得大于標(biāo)準(zhǔn)砷溶液的吸收度。2.試劑的作用：同古蔡法。（二）Ag-DDC法(二乙基二硫代氨基甲酸銀，USP采用此法100六、溶液顏色檢查法溶液顏色檢查法是控制藥物中有色雜質(zhì)量的方法。中國藥典（2000年版）收載有三種方法：K2Cr2O7黃、綠1.標(biāo)準(zhǔn)比色液進(jìn)行比較的方法標(biāo)準(zhǔn)比色液CoCl2橙黃,橙紅2.分光光度法CuSO4棕紅3.色差計法通過測定供試品與標(biāo)準(zhǔn)比色液或水之間的色差值六、溶液顏色檢查法溶液顏色檢查法是控制藥物中有色雜101七、易炭化物檢查法是檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機雜質(zhì)。這類雜質(zhì)多數(shù)結(jié)構(gòu)未知，常采用與標(biāo)準(zhǔn)比色液比色的方法進(jìn)行檢查。(標(biāo)準(zhǔn)比色液為CoCl2,K2Cr2O7,CuSO4)

七、易炭化物檢查法是檢查藥物中遇硫酸102

是檢查藥物中的微量不溶性雜質(zhì)。常采用與濁度標(biāo)準(zhǔn)液比濁的方法進(jìn)行檢查。濁度標(biāo)準(zhǔn)液制備原理：(CH2)6N4+6H2O6HCHO+4NH3HCHO+H2N-NH2H2C=N-NH2+H2O

甲醛腙白色混濁

不同級號濁度標(biāo)準(zhǔn)液級號0.51234濁度標(biāo)準(zhǔn)原液（ml）2.55.010.030.050.0水（ml）97.595.090.070.050.0八、溶液澄清度檢查法是檢查藥物中的微量不溶性雜質(zhì)。常采用與濁103九、熾灼殘渣檢查法(residueonignition)BP稱硫酸灰分（sulphatedash)是檢查有機藥物中混入的各種無機雜質(zhì)。常采用重量方法進(jìn)行檢查。

殘渣及坩堝重—坩堝重

殘渣%=×100%

供試品重九、熾灼殘渣檢查法(residueonignition)104十、干燥失重檢查法主要檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性的物質(zhì)。常采用重量方法進(jìn)行檢查。常用的方法有四種：（一）常壓恒溫干燥法

（二）干燥劑干燥法

（三）

減壓干燥法十、干燥失重檢查法主要檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性的105熱重分析法（四）熱分析法（thermoanalysis)

差示熱分析差示掃描量熱法1.熱重分析法（thermogravimetricanalysis,TGA)

在程序升溫下，測量物質(zhì)的質(zhì)量與溫度的關(guān)系，研究物質(zhì)在加熱同時失重的情況下，所發(fā)生的質(zhì)的變化，常用于藥物穩(wěn)定性的研究；貴重和易氧化藥物的干燥失重測定。(長春堿)

1062.差示熱分析（differentialthermlanalysis,DTA)

是在程序升溫下，測量被測物質(zhì)和參比物之間的溫差與溫度關(guān)系的一種技術(shù)。參比物是一種惰性物質(zhì)，在加熱過程中不發(fā)生相變和化學(xué)變化。因此溫差(△T)只與被測物質(zhì)的量質(zhì)變化有關(guān)。△T=0被測物未發(fā)生吸熱或放熱反應(yīng);△T=-為吸熱峰;△T=+為放熱峰.2.差示熱分析（differentialtherml107測藥的溶點

DTA在藥物分析中應(yīng)用尖峰為物理變化藥物定性分析寬峰為化學(xué)變化估測藥物的純度測藥的溶點1083.差示掃描量熱法(differentialscanningcalorimetry,DSC)是在程序升溫下，測量維持樣品和參比物的溫度相同，系統(tǒng)所需供給樣品隨溫差變化的能量的一種技術(shù)。DSC與DTA的不同之

處是記錄方式不同，是記錄系統(tǒng)供給的能量，吸熱供給能量；放熱減少供給的能量。在藥物分析中應(yīng)用與DTA相同。DSC-TG常聯(lián)合用。3.差示掃描量熱法(differentialsc109十一、有機溶劑殘留量測定法[ChP(1995)]主要檢查藥物在生產(chǎn)過程中引入的有害的有機溶劑(如苯、氯仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、環(huán)氧乙烷、二氧六環(huán)等）。常采用氣相色譜法方法進(jìn)行檢查。常用的方法有二種：①直接進(jìn)樣法和②頂空進(jìn)樣法（試用于揮發(fā)性大的樣品測定）。色譜系統(tǒng)性試驗的要求：(1)N＞1000;(2)用內(nèi)標(biāo)法測定時，要求R＞1.5;(3)外標(biāo)法測定時，待測物的峰面積的RSD＜10%。十一、有機溶劑殘留量測定法[ChP(1995)]110殘留有機溶劑測定的方法和限量有機溶劑柱溫（℃）內(nèi)標(biāo)物測定方法限量（%）二氧六環(huán)170吡啶1法0.038吡啶170二氧六環(huán)1法0.02苯170