.*;;杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://1-◆TRIpureReagent抽提指南◆目錄號(hào)RP02◆使用手冊(cè)◆實(shí)驗(yàn)室使用，僅用于體外◆TRIpureReagent抽提指南◆目錄號(hào)RP02◆使用手冊(cè)◆實(shí)驗(yàn)室使用，僅用于體外◆TRIpureReagent抽提指南◆目錄號(hào)RP02◆使用手冊(cè)◆實(shí)驗(yàn)室使用，僅用于體外SoilPure超純土壤基因組DNA快速提取試劑盒目錄號(hào)：DN27目錄編號(hào)包裝單位DN270150次適用范圍：適用于快速提取各種土壤基因組DNA試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性：試劑盒組成保存50次溶液SUS室溫25ml溶液LYS室溫6ml溶液S1室溫15ml溶液S2室溫15ml溶液S3室溫30ml第一次使用前，請(qǐng)加2倍體積無(wú)水乙醇抑制物去除液IR室溫25ml漂洗液WB室溫15ml第一次使用前，請(qǐng)加60ml無(wú)水乙醇洗脫緩沖液EB室溫10ml蛋白酶K粉（可選）20mg/ml-2020mg吸附柱AC和收集管室溫50套本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果。儲(chǔ)存事項(xiàng):溶液LYS或者抑制物去除液IR低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用,注意不要?jiǎng)×覔u晃，以免產(chǎn)生大量氣泡為避免降低活性，方便運(yùn)輸，提供蛋白酶K為凍干粉狀，收到后，可短暫離心后，加入1毫升滅菌水溶解，因?yàn)榉磸?fù)凍融可能會(huì)降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分裝凍存，－20℃避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。產(chǎn)品介紹：普通的手提或者試劑盒提取的土壤基因組DNA由于常常殘留有PCR的強(qiáng)烈抑制物如腐殖酸、棕黃酸等雜質(zhì)造成實(shí)驗(yàn)失敗，此外，由于采用了劇烈的玻璃珠擊打來(lái)破裂菌體，常常造成DNA剪切和降解。本公司經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期研發(fā)開(kāi)發(fā)出了具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的土壤基因組DNA，通過(guò)專利配方的腐殖酸和棕黃酸去除試劑配合特殊處理的純化柱，可以最大程度的去除這些雜質(zhì)，同時(shí)加上多次柱漂洗，確保得到的DNA具有極高純度，此外獨(dú)特的抽提和裂解體系可以迅速裂解細(xì)胞（壁）和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，不需要借助玻璃珠破壁，有效保證了基因組DNA的完整性。產(chǎn)品特點(diǎn)：本公司獨(dú)有的專利配方和純化柱能有效去除腐殖酸等雜質(zhì)。不需要借助玻璃珠破壁，有效保證了基因組DNA的完整性，長(zhǎng)度可達(dá)30kb-50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。兼容性強(qiáng)，適用于各種不同的土壤包括淤泥等提取困難的土壤。多步驟去除各種雜質(zhì)和抑制物，保證了極高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9。不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。快速，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品操作一般可在60分鐘內(nèi)完成。注意事項(xiàng)所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf5415C或者類(lèi)似離心機(jī)。開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前根據(jù)需要將水浴預(yù)熱到37℃或者70溶液S3和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH大于7.5，pH過(guò)低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長(zhǎng)期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mMTris-HCl，1mMEDTA，pH8.0），但是EDTA操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）提示：第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB和溶液S3中加入指定量無(wú)水乙醇，充分混勻，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!取0.2克如果預(yù)計(jì)土壤里面含有較多難裂解的菌類(lèi)如革蘭氏陽(yáng)性菌，可先在0.5ml溶液SUS里面加入10mg的溶菌酶，吹打混勻后再加入，并加做步驟2。（可選步驟）:37℃溫育30分鐘，每10分鐘顛倒混勻幾次對(duì)于難裂解的菌類(lèi)如革蘭氏陽(yáng)性菌含量豐富的土壤，并在上一步驟加入了溶菌酶的樣品，需要加做此步驟來(lái)幫助裂解。加入20μl蛋白酶K(20mg/ml)溶液，短暫渦旋幫助混勻。可選做步驟:為提高產(chǎn)量，可以在37℃振蕩10分鐘加入120μl溶液LYS，短暫渦旋混勻，65℃溫育30分鐘，期間顛倒混勻幾次65℃溫育（可選步驟）:于－70℃冷凍，對(duì)于難裂解的菌類(lèi)如革蘭氏陽(yáng)性菌含量豐富的土壤，可加做此步驟來(lái)幫助裂解。顛倒混勻后，13,000rpm離心2分鐘,小心轉(zhuǎn)移上清至新的離心管（記錄上清體積）。加入1/3(三分之一)體積的溶液S1,顛倒幾次，渦旋5秒混勻后，冰上放置5分鐘。13,000rpm離心5分鐘,小心轉(zhuǎn)移上清至新的離心管（記錄上清體積）。加入1/3(三分之一)體積的溶液S2,顛倒幾次，短暫渦旋混勻后，冰上放置5分鐘。該步驟主要是進(jìn)一步去除humicsubstance等PCR抑制物質(zhì)以提高純度，但是會(huì)降低一些產(chǎn)量，如果對(duì)產(chǎn)量要求高或者提取的DNA不用于PCR，可以嘗試略去此步驟以提高產(chǎn)量。如果預(yù)計(jì)土壤成份復(fù)雜PCR抑制物質(zhì)多，可以適當(dāng)提高S2加入量(如加入等體積的S2)，可以提高純度，但是注意也會(huì)顯著降低產(chǎn)量。13,000rpm離心5分鐘,小心轉(zhuǎn)移上清至新的離心管（記錄上清體積）。加入1.5倍體積的溶液S3（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!）,顛倒幾次，短暫渦旋混勻。將上一步混合物700μl（包括可能有的沉淀）加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中），12,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。重復(fù)直到所有的混合物都加完。加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm離心30秒，棄廢液。加入600μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!），12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。加入600μl漂洗液WB，12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。取出吸附柱AC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好），室溫放置3-5分鐘，12,000rpm離心1分鐘。將得到