保健食品安全性毒理學

檢驗及評價保健食品安全性毒理學

檢驗及評價第一部分中國保健食品簡介第一部分中國保健食品簡介保健食品定義

保健食品（FunctionalFood）系指具有調(diào)節(jié)人體生理功能、適宜特定人群食用、不以治療為目的的一類食品。

保健食品定義保健食品（FunctionalFood特點

具有特定的保健功能；無毒副作用，食用安全；有別于食品和藥品；增強體質、預防疾病為主；適用于特定人群。特點具有特定的保健功能；特定功能

由國家管理部門指定允許申報的功能目前有27種

27種以外的功能，生產(chǎn)企業(yè)在獲得足夠的技術資料后（包括評價方案，試驗數(shù)據(jù)及結果）向有關管理部門提出受理申請，接受評審。特定功能由國家管理部門指定特定人群正常成人以外，包括嬰幼兒、孕婦、乳母、青少年、中老年、特殊工種的工作者以及常見病病人對于營養(yǎng)保健有特殊的需要

膳食結構的不同營養(yǎng)素需求的不同特定人群正常成人以外，包括嬰幼兒、孕婦、乳母、青少年、保健食品的發(fā)展歷程第一代保健食品：在《保健食品的管理方法》頒布以前市場上已有的保健食品。第二代保健食品：經(jīng)動物和人體實驗證實具有某種生理調(diào)節(jié)功能的食品。第三代保健食品：不僅需要經(jīng)人體及動物實驗證實具有某種功能，而且需要研究提供該功能因子、含量及其作用機理。保健食品的發(fā)展歷程第一代保健食品：在《保健食品的管理方法》頒發(fā)展趨勢根據(jù)新的疾病譜和健康問題，開發(fā)新的保健功能根據(jù)新的養(yǎng)生保健概念，開發(fā)新的保健功能根據(jù)現(xiàn)代營養(yǎng)科學理論，開發(fā)新的膳食有效成分根據(jù)中醫(yī)藥理論，開發(fā)中藥類有效成分根據(jù)生命科學理論，開發(fā)新的人體所需營養(yǎng)素發(fā)展趨勢根據(jù)新的疾病譜和健康問題，開發(fā)新的保健功保健食品開發(fā)中的注意點中草藥新資源野生動植物及其產(chǎn)品核酸類真菌類益生菌類酶制劑、氨基酸螯合物、金屬硫蛋白以及直接以微生物發(fā)酵的保健食品開發(fā)中的注意點中草藥中草藥類

中草藥作為原料應注意：1.不能采用有明顯毒副作用的中藥材、獲國家藥政管理部門批準的中成藥、受國家中藥保護的中藥成方2.用量應控制在臨床用量的50%以下中草藥類中草藥作為原料應注意：新資源類

新資源作為原料時必須具備的有關資料：名稱及國內(nèi)外研究利用情況；名稱、配方及生產(chǎn)工藝；產(chǎn)品成分（包括營養(yǎng)物質、有生物效應物質及有毒有害物質等）的分析報告；安全性毒理學評價報告或有關文獻資料；個別地區(qū)有食用習慣的應提供有關食用歷史的證明資料；質量標準。新資源類新資源作為原料時必須具備的有關資料：野生動植物及其產(chǎn)品類

以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關限制：受保護的野生動物。禁止使用自然的、人工馴養(yǎng)繁殖或人工栽培的國家一級和自然的二級保護野生動植物及其產(chǎn)品。人工馴養(yǎng)繁殖或人工栽培的國家二級保護野生動植物及其產(chǎn)品，國家保護的有益的或者有重要經(jīng)濟、科學研究價值的陸生野生動物及其產(chǎn)品應提供省級以上農(nóng)業(yè)（漁業(yè)）、林業(yè)行政主管部門的批準文件。野生動植物及其產(chǎn)品類以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關限制：以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關限制：中華人民共和國林業(yè)植物新品種保護名錄中植物及其產(chǎn)品，如果該種植物已獲“品種權”，應提供該種植物品種權所有人許可使用的證明；如該種植物尚未取得品種權，應提供國務院林業(yè)主管部門出具的該種品種尚未取得品種權的證明。進口保健食品中使用《瀕危野生動植物種國際貿(mào)易公約》名錄中動植物及其產(chǎn)品的，應提供國務院農(nóng)業(yè)（漁業(yè)）、林業(yè)行政主管部門批準文件、進出口許可證及海關的證明文件。野生動植物及其產(chǎn)品類以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關限制：野生動植物及其產(chǎn)品類核酸類核酸類保健食品申報時需提供的特殊資料：具體成份名稱、來源、含量；與所申報功能直接相關的科學文獻依據(jù)；企業(yè)標準中標出核酸各成份的含量、純度和相應的定性、定量檢測方法以及質量標準；詳細生產(chǎn)工藝（包括加工助劑名稱、用量）；核酸原料純度的檢測報告。核酸類核酸類保健食品申報時需提供的特殊資料：核酸類核酸類保健食品申報時的注意事項：不得以單一的DNA或RNA作為原料申報。單一原料純度應大于80％。功能申報范圍暫限定為免疫調(diào)節(jié)功能。如申報其他功能，需向衛(wèi)生部提交申請并納入審批范圍后，方可申報。核酸成份的每日推薦食用量為0.6g-1.2g。不得以“核酸”命名。說明書及標簽中的“不適宜人群”除按保健食品相關規(guī)定標注外，應明確標注出“痛風患者”。核酸類核酸類保健食品申報時的注意事項：真菌類真菌類保健食品的部分規(guī)定：生產(chǎn)企業(yè)應建立有關的檔案資料。生產(chǎn)企業(yè)應具備相應的生產(chǎn)條件。對生產(chǎn)菌種及工藝變更的相應規(guī)定。冠名規(guī)定。發(fā)酵過程中，除培養(yǎng)基外，不得加入具有功效成分的動植物及其它物質。不能使用經(jīng)過基因修飾的菌種。真菌類真菌類保健食品的部分規(guī)定：益生菌類益生菌類保健食品的部分規(guī)定：生產(chǎn)用菌種應滿足一定的條件。生產(chǎn)企業(yè)應具備的一定條件。菌種及生產(chǎn)工藝不得變更，否則產(chǎn)品必須重新申報。不提倡以液態(tài)形式生產(chǎn)活菌產(chǎn)品。在保存期內(nèi)活菌數(shù)目不得少于106cfu/mL(g)。益生菌類益生菌類保健食品的部分規(guī)定：益生菌類益生菌類保健食品的部分規(guī)定：如需在特殊條件下保存，應在標簽和說明書中標示所用菌種在其發(fā)酵過程中，除培養(yǎng)基外，不得加入具有功效成分的動植物及其物質不能使用經(jīng)過基因修飾的菌種益生菌類益生菌類保健食品的部分規(guī)定：其他類別對酶制劑、氨基酸螯合物、金屬硫蛋白以及直接以微生物發(fā)酵為原料限制的部分規(guī)定：未列入《食品添加劑使用衛(wèi)生標準》或衛(wèi)生部公告名單中的食品添加劑新品種的酶制劑不得用于保健食品的生產(chǎn)。不再審批以金屬硫蛋白為原料生產(chǎn)的保健食品。其他類別對酶制劑、氨基酸螯合物、金屬硫蛋白以及直接以微生物發(fā)其他類別使用微生物發(fā)酵直接生產(chǎn)保健食品的，需提供的特殊資料：菌種來源及菌種檢定報告菌種的毒力試驗報告及安全性評價報告國內(nèi)外該菌種使用于食品生產(chǎn)的文獻資料發(fā)酵終產(chǎn)物的質量標準（包括純度、雜質成分及含量）其他類別使用微生物發(fā)酵直接生產(chǎn)保健食品的，需提供的特殊資料：其他類別使用氨基酸螯合物生產(chǎn)保健食品的，需提供的特殊資料：提供明確的化學結構式、理化性質，配體與金屬離子之比、游離元素和總元素之比。提供定性、定量的檢測方法及驗證報告。急性毒性試驗加做停食16小時后空腹一次灌胃試驗和30天喂養(yǎng)試驗的組織病理報告。國內(nèi)外使用于食品生產(chǎn)的文獻資料。其他類別使用氨基酸螯合物生產(chǎn)保健食品的，需提供的特殊資料：安全，無毒、副作用功能，保健功效理化、微生物特性：有害成分物質和污染物毒理學特性：劑量反應（效應）關系保健食品質量控制生物活性物質功效成分通過檢驗和評價，加以控制安全，無毒、副作用功能，保健功效理化、微生物特性：保健食品質第二部分保健食品安全性毒理學

檢驗及評價第二部分保健食品安全性毒理學

檢驗及評價主要內(nèi)容

檢驗評價依據(jù)審評基本要求選擇毒理學試驗的基本原則實驗動物的選擇樣品的預處理原則毒理學試驗項目要點介紹毒理學安全性評價時應考慮的問題審評結論的判定主要內(nèi)容檢驗評價依據(jù)毒性及功能檢驗評價依據(jù)1996年3月衛(wèi)生部《保健食品的管理方法》

保健食品的標準、功能評價、審批程序和監(jiān)督管理辦法1996年7月GB15193《食品安全性毒理學評價程序和方法》

衛(wèi)生部《保健食品功能學評價程序和檢驗方法》

僅包含了12項功能檢驗及評價方法2001年7月衛(wèi)生部《保健食品功能學評價程序和檢驗方法》

可受理和評價的功能調(diào)整到31項2003年2月衛(wèi)生部《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》

將功能學、毒理學、功效成分及衛(wèi)生指標檢驗評價方法三者合一毒性及功能檢驗評價依據(jù)1996年3月衛(wèi)生部《保健食品的管理方審評的基本要求1.配方原（輔）料、用量、理化性質2.劑量食用方法及用量3.工藝規(guī)格化產(chǎn)品符合配方、工藝、質量標準4.批號注意批號是否一致,益生菌、奶制品等保質期短的除外審評的基本要求1.配方1.毒理學評價的四個階段第一階段：急性毒性試驗經(jīng)口急性毒性試驗：LD50，聯(lián)合急性毒性，一次最大耐受量試驗第二階段：遺傳毒性試驗，30天喂養(yǎng)試驗，傳統(tǒng)致畸試驗遺傳毒性試驗：原核細胞和真核細胞，體內(nèi)試驗和體外試驗相結合Ames或基因突變試驗；微核試驗或染色體畸變試驗；精子畸變試驗等第三階段：亞慢性毒性試驗

90天喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗、代謝試驗第四階段：慢性毒性試驗（包括致癌試驗）選擇毒理學試驗的基本原則1.毒理學評價的四個階段選擇毒理學試驗的基本原則2.一般無需進行毒性試驗的原料或成分 屬于普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質：采用傳統(tǒng)的工藝及食用方式水提取物，常規(guī)服用量，無不安全性報道來源、工藝和質量符合國家要求的營養(yǎng)強化劑或營養(yǎng)素補充劑選擇毒理學試驗的基本原則2.一般無需進行毒性試驗的原料或成分選擇毒理學試驗的基本原則3.需進行一階段和三項致突變毒性試驗的原料或成分屬于普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質且用水提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的：（1）服用量與常規(guī)用量相同急性毒性、三項致突變試驗（2）服用量大于常規(guī)用量還需加做30天喂養(yǎng)試驗，必要時進行傳統(tǒng)致畸試驗和第三階段毒性試驗選擇毒理學試驗的基本原則3.需進行一階段和三項致突變毒性試驗的原料或成分選擇毒理學4.需進行一、二階段毒性試驗的原料或成分文獻顯示無危害，人群長期食用；具有國際性毒理學評價結果的已知的化學物質，產(chǎn)品質量規(guī)格與國外產(chǎn)品一致；國外廣泛食用且能提供安全性評價資料；衛(wèi)生部規(guī)定允許使用的動植物及其提取物或微生物。選擇毒理學試驗的基本原則4.需進行一、二階段毒性試驗的原料或成分選擇毒理學試驗的基本5.需進行一至三階段毒性試驗的情況：一、二階段試驗結果與國外產(chǎn)品不一致的國外少數(shù)國家或地區(qū)食用的原料或成分水提取物，大于常規(guī)服用量用水提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的，大于常規(guī)用量選擇毒理學試驗的基本原則5.需進行一至三階段毒性試驗的情況：選擇毒理學試驗的基本原則6.需進行一至四階段毒性試驗的原料和成分

國內(nèi)外均無食用先例7.敏感指標及敏感試驗的保健食品

不同食用人群和（或）不同功能的保健食品選擇毒理學試驗的基本原則6.需進行一至四階段毒性試驗的原料和成分選擇毒理學試驗的基本8.保健食品新原料保健食品新原料（以下簡稱新原料）是指不在國家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食品、衛(wèi)生部公布或批準可以食用以及生產(chǎn)普通食品的范圍內(nèi)，擬用于保健食品的原料。國家食品藥品監(jiān)督管理局和國家有關部門規(guī)定的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作為新原料。選擇毒理學試驗的基本原則8.保健食品新原料選擇毒理學試驗的基本原則

在已批準的保健食品中使用過，或衛(wèi)生部已批準為新資源食品的原料，符合以下情況的仍按新原料進行管理：未列入國家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食品的物品名單；尚未列入衛(wèi)生部公布或批準的食品新資源或新資源食品名單內(nèi)；衛(wèi)生部已批準為食品新資源或新資源食品，但保健食品注冊申請人與食品新資源或新資源食品生產(chǎn)批件中載明的申報單位不一致。選擇毒理學試驗的基本原則在已批準的保健食品中使用過，或衛(wèi)生部已批準為新資源食新原料安全性毒理學試驗項目的選擇①無食用史需做四階段試驗②局部地區(qū)有食用史需做三階段試驗

其中，100倍<攝入量<300倍需做第四階段試驗③有食用史需做二階段試驗

經(jīng)評價后下一階段試驗④廣泛食用的原料二階段試驗（食用史包括地區(qū)、年代、人群、食用量、頻率等情況）選擇毒理學試驗的基本原則新原料安全性毒理學試驗項目的選擇選擇毒理學試驗的基本原則新原料安全性毒理學試驗項目的選擇⑤已知化學物:

⑤-1可只做二階段實驗的包括已有權威機構進行系統(tǒng)的毒理學安全性評價有資料證明所用原料與其一致

⑤-2如試驗結果與權威機構進行的評價不一致，需進入下階段的試驗⑥有新原料的保健食品:根據(jù)試驗結果綜合分析。選擇毒理學試驗的基本原則新原料安全性毒理學試驗項目的選擇選擇毒理學試驗的基本原則對受試保健食品的要求

單一已知化學成分，應提供物理和化學性質多種原料的配方產(chǎn)品，應提供配方配方產(chǎn)品，必要時還應提供各組分，功效成分的物理和化學性質及其檢測報告提供原料來源、生產(chǎn)工藝、人的可能攝入量。使用說明書等有關資料受試物應符合既定配方和生產(chǎn)工藝的規(guī)格化產(chǎn)品對受試保健食品的要求單一已知化學成分，應提供物理和化學性質實驗動物的選擇及給樣量1.根據(jù)各項實驗的具體要求，合理選擇實驗動物

常用大鼠和小鼠，品系不限，推薦使用近交系。2.動物應符合《實驗動物管理條例》

清潔級或清潔級以上動物合格證號及動物實驗室合格證號3.灌胃量

大鼠：10ml/kg?BW（若以水為溶劑，推薦20ml/kg?BW）小鼠：20ml/kg?BW實驗動物的選擇及給樣量1.根據(jù)各項實驗的具體要求，合理選擇實樣品的預處理原則1.介質的選擇

應選擇適合于受試動物的溶劑、乳化劑、助懸劑，要求無毒、與受試物不發(fā)生反應、穩(wěn)定性好。常用的介質有：蒸餾水、食用植物油、淀粉、明膠及羧甲基纖維素等。2.液體類

受試物濃縮倍數(shù)應符合試驗要求。濃縮方法不應破壞其有效成份，常用的有60℃～70℃減壓或常壓蒸發(fā)、冷凍干燥。按工藝要求。樣品的預處理原則1.介質的選擇樣品的預處理原則3.袋泡茶類

處理方法與產(chǎn)品推薦飲用方法相同推薦用：80℃--90℃常壓用水浸泡30min

水量為受試物的10倍，提取2次，2次提取液合并濃縮至所需濃度標明該濃縮液與受試物的比例樣品的預處理原則3.袋泡茶類樣品的預處理原則4.含乙醇類（1）不需濃縮的受試物乙醇濃度<15％直接進行試驗乙醇濃度>15％乙醇濃度應調(diào)至15％（2）需濃縮的受試物乙醇濃度<15％濃縮后調(diào)至原乙醇濃度乙醇濃度>15％濃縮后調(diào)至15％乙醇濃度在進行乙醇濃度調(diào)整時必須用原酒基樣品的預處理原則4.含乙醇類樣品的預處理原則5.膨脹系數(shù)較高的受試物選擇可溶性介質給受試物的方法：灌胃其最高濃度最大灌胃量時達不到人體推薦量的100倍，按實際達到的倍數(shù)標明受試物的膨脹系數(shù)樣品的預處理原則5.膨脹系數(shù)較高的受試物樣品的預處理原則6.益生菌等微生物類保健食品在進行Ames試驗或體外細胞試驗時需將受試物滅活。需濃縮的應采用低溫干燥法或由企業(yè)提供所需濃度的受試物（附方法、技術參數(shù)）。7.以食品為載體的受試物

（1）有營養(yǎng)價值：按設計量進行飼料的營養(yǎng)成份調(diào)整，提供詳細的說明。（2）大豆蛋白、乳清蛋白如質量、工藝等符合食品標準和安全要求，允許去除。如僅以該原料生產(chǎn)的，可申請免做毒理學試驗。樣品的預處理原則6.益生菌等微生物類保健食品毒理學試驗項目要點介紹

急性經(jīng)口毒性試驗鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗骨髓細胞微核試驗哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗小鼠精子畸形試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗

30天喂養(yǎng)試驗毒理學試驗項目要點介紹急性經(jīng)口毒性試驗急性經(jīng)口毒性試驗目的：測定LD50，毒性分級。了解毒性強度、性質和可能的靶器官，為進一步的毒性試驗提供劑量和觀察指標的選擇依據(jù)。原理：急性毒性：經(jīng)口一次性、24h內(nèi)多次給予，短時間內(nèi)的毒性反應。致死劑量通常用半數(shù)致死劑量LD50表示。急性聯(lián)合毒性：兩種或兩種以上的受試物，可能發(fā)生拮抗、相加或協(xié)同的聯(lián)合方式，可以根據(jù)一定的公式計算和判定標準來確定這三種不同的作用。急性經(jīng)口毒性試驗目的：測定LD50，毒性分級。了解毒性強度、急性經(jīng)口毒性試驗時間周期：一般為3周

3-5天，大、小鼠適應期

7-14天，染毒及實驗觀察期 發(fā)生動物死亡時，應進行大體解剖觀察和評價指標：毒性反應癥狀：各器官系統(tǒng)的反常表現(xiàn)（中樞、自主神經(jīng)、呼吸、心血管、胃腸、生殖泌尿系統(tǒng)、皮毛、粘膜等）及體重變化死亡情況：死亡的時間、數(shù)量、性別、表現(xiàn)等。大體尸檢結果：如果發(fā)生死亡動物急性經(jīng)口毒性試驗時間周期：一般為3周急性毒性（LD50）劑量分級表級別大鼠口服LD50，mg/kg相當于人的致死量mg/kgg/人極毒<1稍嘗0.05劇毒1-50500-40000.5中等毒51-5004000-300005低毒501-500030000-25000050實際無毒5001500000500無毒>15000>5000002500急性毒性（LD50）劑量分級表級別大鼠口服LD50，急性經(jīng)口毒性試驗試驗結果的判定：1.LD50＜人可能攝入量的100倍，放棄；反之繼續(xù)下一步試驗。2.LD50≥10g/kgbw或按最大耐受量染毒而未出現(xiàn)動物死亡的，可繼續(xù)下一步試驗。急性經(jīng)口毒性試驗試驗結果的判定：鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗目的：檢測受試物的誘變性，預測其遺傳危害和潛在致癌作用的可能性。時間周期：一般為2周

第一周，鼠傷寒沙門氏菌種、試劑、培養(yǎng)基準備 第二周，染毒，培養(yǎng)48h，讀平板，菌落計數(shù)劑量設計：決定受試物最高劑量的因素是對細菌的毒性及其溶解度。最低劑量為0.2ug/皿；最高劑量為5mg/皿，或最大溶解劑量，最大飽和劑量以及最小毒性劑量?？稍O五個劑量組，組間距不超過5倍。同時設：陽性對照組，溶劑對照組和未處理對照組。鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗目的：檢測受試物的誘變性，預測鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗觀察及評價指標：各受試物組及三個對照組的四種菌株（TA97a，TA98，TA100和TA102）分別在加和不加S9情況下的菌落計數(shù)。結果評價（摻入法）：受試物組回變菌落數(shù)增加一倍以上（即回變菌落數(shù)≥2×未處理對照組數(shù)），并有劑量反應關系或有可重復的陽性反應，即可判試驗陽性。鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗觀察及評價指標：骨髓細胞微核試驗目的：檢測整體動物體內(nèi)骨髓嗜多染紅細胞微核發(fā)生率，以評價受試物致突變的可能性。原理：微核是在細胞有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進入子細胞形成細胞核時，仍然留在細胞質中的色單體或染色體的無著絲點斷片。末期之后，單獨形成一個或幾個規(guī)則的次核，被包含在細胞胞質內(nèi)，因比主核小，故稱為微核。骨髓細胞微核試驗目的：骨髓細胞微核試驗時間周期：一般為2周

3-5天適應期 小鼠經(jīng)口染毒，30h給受試物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，鏡檢劑量設計：至少設置3個劑量，最高劑量組為動物出現(xiàn)嚴重中毒表現(xiàn)和/或個別動物出現(xiàn)死亡的劑量。低劑量組應不出現(xiàn)毒性反應。一般取LD50的1/2、1/4、1/8作為三個劑量。當受試物的LD50≥10g/kg.bw時，最高劑量通常采用10g/kg.bw。同時設陽性對照組和溶劑對照組。骨髓細胞微核試驗時間周期：一般為2周骨髓細胞微核試驗觀察及評價指標：每只動物計數(shù)1000個嗜多染紅細胞，記錄含有微核的細胞數(shù)，并計算微核千分率。觀察嗜多染紅細胞與成熟紅細胞的比例。結果評價：受試物組與對照組微核率相比，增高呈劑量反應關系并有統(tǒng)計學意義，試驗結果為陽性。骨髓細胞微核試驗觀察及評價指標：哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗目的：檢測受試物對整體動物骨髓細胞染色體畸變的致突變性，以評價其致突變的可能性。原理：當受試物作用于細胞周期G1期和S期時，可誘發(fā)染色體型畸變，而作用于G2期時則誘發(fā)染色體單體型畸變。給動物腹腔注射秋水仙素，抑制細胞分裂時紡錘體的形成，增加中期分裂相細胞的比例，并使染色體絲縮短、分散，輪廓清晰。在顯微鏡下便可觀察染色體數(shù)目和形態(tài)。哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗目的：檢測受試物對整體動物骨髓哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗時間周期：一般為3周

3-5天適應期 小鼠或大鼠經(jīng)口染毒2-4次，每次間隔24h，在末次染毒18-24h進行取材（取材前2-4h，腹腔注射秋水仙素）。 取股骨，收集骨髓，制片，染色，鏡檢劑量設計：同骨髓細胞微核試驗哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗時間周期：一般為3周哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗觀察及評價指標：每只動物分析100個中期相細胞，每個劑量組不少于1000個。記錄染色體數(shù)目及結構的改變。結果評價：受試物組與對照組染色體畸變率相比，增高呈劑量反應關系并有統(tǒng)計學意義，試驗結果為陽性。哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗觀察及評價指標：小鼠精子畸形試驗目的：檢測整體動物體內(nèi)精子畸形發(fā)生率，以評價受試物對體內(nèi)生殖細胞的致突變作用。原理：小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遺傳性，許多常染色體及X、Y性染色體基因決定精子形態(tài)。精子的畸形主要是指形態(tài)的異常，已知精子的畸形是決定精子形成的基因發(fā)生突變的結果。因此形態(tài)的改變提示有關基因及其蛋白產(chǎn)物的改變。小鼠精子畸形試驗目的：小鼠精子畸形試驗時間周期：一般為7周

3-5天適應期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒5天，于首次給樣后的35天處死動物 取兩側附睪，收集精子，滴片，染色，鏡檢劑量設計：同骨髓細胞微核試驗小鼠精子畸形試驗時間周期：一般為7周小鼠精子畸形試驗觀察及評價指標：每只動物檢查1000個精子，記錄精子畸形數(shù)目及類型。結果評價：受試物組與對照組精子畸變率相比，增高呈劑量反應關系并有統(tǒng)計學意義，試驗結果為陽性。小鼠精子畸形試驗觀察及評價指標：小鼠睪丸染色體畸變試驗目的：檢測整體動物睪丸染色體畸變發(fā)生率，以評價受試物對整體哺乳動物睪丸生殖細胞的致突變性。原理：不同周期的雄性生殖細胞對化學物質的敏感性不同，多數(shù)情況下化學誘變劑誘發(fā)染色體畸變必須經(jīng)過DNA復制期，故在前細線期處理。第12～14d采樣，以觀察作用于前細線期引起的精母細胞染色體畸變效應。小鼠睪丸染色體畸變試驗目的：檢測整體動物睪丸染色體畸變發(fā)生率小鼠睪丸染色體畸變試驗時間周期：一般為7周

3-5天適應期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒5天，與首次給樣后的12-14天處死動物取材，（取材前6h，腹腔注射秋水仙素）。取兩側睪丸，收集生殖細胞，滴片，染色，鏡檢劑量設計：同骨髓細胞微核試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗時間周期：一般為7周小鼠睪丸染色體畸變試驗觀察及評價指標：每只動物分析100個中期相細胞，記錄染色體數(shù)目及結構的改變（包括斷片、易位、畸變細胞率、常染色體單價體、性染色體單價體等）。結果評價：受試物組與對照組的斷片、易位、畸變細胞率、常染色體單價體、性染色體單價體等差異有統(tǒng)計學意義，試驗結果為陽性。小鼠睪丸染色體畸變試驗觀察及評價指標：遺傳毒性試驗組合試驗結果的判定：如三項致突變試驗（Ames試驗，微核或骨髓細胞染色體畸變試驗，精子畸形或睪丸染色體畸變試驗）中，體外或體內(nèi)有一項或以上陽性，一般應放棄該受試物用于保健食品。如三項試驗均為陰性，則可繼續(xù)進行下一步的毒性試驗。遺傳毒性試驗組合試驗結果的判定：30天喂養(yǎng)試驗目的：急性毒性試驗的基礎上，此試驗可進一步了解毒性作用，特別是觀察對生長發(fā)育的影響，并可初步估計最大觀察到的無作用劑量，估計亞慢性攝入的危害性。原理：以不同劑量受試物每日經(jīng)口給予各組實驗動物，連續(xù)30天。染毒期間每日密切觀察動物的毒性反應，染毒結束后進行大體解剖、血生化及病理檢查，以此觀察重復喂食不同劑量的受試物對動物引起的有害作用。30天喂養(yǎng)試驗目的：急性毒性試驗的基礎上，此試驗可進一步了解30天喂養(yǎng)試驗時間周期：在獲得了急性毒性數(shù)據(jù)后，一般為2月

3-5天，大鼠適應期

30天，染毒及實驗觀察期 再進行大體解剖、血液、生化、器官病理檢查。30天喂養(yǎng)試驗時間周期：在獲得了急性毒性數(shù)據(jù)后，一般為2月30天喂養(yǎng)試驗劑量設計：至少設三個劑量組和一個對照組。高劑量應能引起動物明顯毒效應但不造成動物死亡。低劑量應不出現(xiàn)任何毒作用，同時在這二劑量之間設幾個中間劑量組。

對于能獲得LD50的受試物：最高劑量為10％～25％的LD50，最低劑量組至少為人可能攝入量的3倍。

對于不能獲得LD50的受試物：最高劑量為人可能攝入量的100倍，或按最大灌胃劑量或在飼料中的最大摻入量。30天喂養(yǎng)試驗劑量設計：至少設三個劑量組和一個對照組。高劑量30天喂養(yǎng)試驗觀察及評價指標：一般情況觀察：每日的表現(xiàn)、行為、中毒和死亡情況。每周1次體重及2次食物攝入量，計算食物利用率。血液學指標：喂養(yǎng)結束后測定血紅蛋白、紅和白細胞總數(shù)及分類，必要時測定血小板或網(wǎng)織紅細胞數(shù)等指標。生化學指標：喂養(yǎng)結束后測定谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、總蛋白、膽固醇和甘油三酯。病理檢查：大體解剖、臟器稱重、組織病理學檢查。30天喂養(yǎng)試驗觀察及評價指標：30天喂養(yǎng)試驗試驗結果的判定：對于只要求進行一、二階段試驗者，最大未觀察到有害作用劑量≥人可能攝入量的100倍，綜合其它試驗結果可初步做出安全性評價。最小觀察到有害作用劑量≤人可能攝入量的100倍，或觀察到毒性反應的最小劑量組其受試物在飼料中比例≤10％，放棄。在中低劑量組中個別指標與對照組相比有差異，應綜合分析，決定取舍或進行下一步毒理試驗。30天喂養(yǎng)試驗試驗結果的判定：其它試驗結果判斷

傳統(tǒng)致畸試驗：需大于或等于人攝入量的100倍。在50倍至100倍之間需進行安全性評價，小于50倍需放棄。

90天喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗：1.僅在國外少數(shù)國家或國內(nèi)局部地區(qū)有食用歷史的原料或成分，需大于或等于人攝入量的100倍。2.國內(nèi)外均無食用歷史的原料或成分時，需大于或等于人攝入量的300倍。在100倍至300倍之間需進行慢性毒性試驗，小于100倍需放棄。其它試驗結果判斷傳統(tǒng)致畸試驗：其它試驗結果判斷

慢性毒性試驗：以LD50或30天喂養(yǎng)試驗的最大未觀察到有害作用劑量設計受試物各劑量組，未見有毒性作用。

致癌試驗陽性判定依據(jù)：腫瘤只發(fā)生在實驗組動物，對照組中無腫瘤發(fā)生。實驗組和對照組均發(fā)生腫瘤，但實驗組發(fā)生率高。實驗組和對照組腫瘤發(fā)生率無明顯差異，但實驗組發(fā)生時間較早。符合以上三項中的情況之一，并經(jīng)統(tǒng)計學處理有統(tǒng)計學意義，可認為致癌試驗陽性。其它試驗結果判斷慢性毒性試驗：安全性評價的科學性和藝術性安全性評價的藝術性：1.動物實驗結果外推到人必須考慮動物與人的種屬差異；2.安全性標準與社會經(jīng)濟基礎、技術能力的相符性；3.安全性標準與社會和公眾利益之間的平衡性。結論：在對化學物質進行科學地安全性評價之后，應結合試驗的局限性，社會經(jīng)濟狀況，人們的生活習慣等因素，對評價結果作出一個合理的分析，為衛(wèi)生標準的制定提供具有實際指導意義的依據(jù)。安全性評價的科學性和藝術性安全性評價的藝術性：應綜合考慮的問題1.試驗指標的統(tǒng)計學意義和生物學意義在分析試驗組與對照組指標統(tǒng)計學的顯著性時，應根據(jù)其有無劑量反應關系及與本實驗室的歷史性對照值范圍比較的原則,來綜合考慮指標差異有無生物學意義。2.生理作用與毒性作用對實驗中某些指標的異常改變，在結果分析時要注意區(qū)分是生理學表現(xiàn)還是受試物的毒性作用。應綜合考慮的問題1.試驗指標的統(tǒng)計學意義和生物學意義應綜合考慮的問題3.時間-毒性效應關系對由受試物引起的毒性效應進行分析評價時，要考慮在同一劑量水平下毒性效應隨時間的變化情況。4.特殊人群和敏感人群對孕婦、乳母或兒童食用的保健食品，應特別注意其胚胎毒性或生殖發(fā)育毒性、神經(jīng)毒性和免疫毒性。應綜合考慮的問題3.時間-毒性效應關系應綜合考慮的問題5.人的可能攝入量較大的保健食品應考慮給予受試物量過大時，可能影響營養(yǎng)素攝入量及其生物利用率，從而導致某些毒理學表現(xiàn)，而非受試物本身的毒性作用所致。6.含乙醇的保健食品對實驗中出現(xiàn)的某些指標的異常改變，在結果分析評價時應注意區(qū)分是乙醇本身還是其它成分的作用。應綜合考慮的問題5.人的可能攝入量較大的保健食品應綜合考慮的問題7.動物年齡對試驗結果的影響

對實驗中出現(xiàn)的某些指標的異常改變，要考慮是否因動物年齡選擇不當所致。8.安全系數(shù)

鑒于動物、人的種屬和個體之間的生物學差異，安全系數(shù)通常為100。應綜合考慮的問題7.動物年齡對試驗結果的影響應綜合考慮的問題9.人體資料

在評價保健食品的安全性時，應盡可能收集人群食用受試物后反應的資料。10.綜合評價

在對保健食品進行最后評價時，必須綜合考慮受試物的原料來源、理化性質、毒性大小、代謝特點、蓄積性、接觸的人群范圍、食品中的使用范圍、人的可能攝入量及保健功能等因素，確保其對人體健康的安全性。應綜合考慮的問題9.人體資料應綜合考慮的問題11.保健食品安全性的重新評價：很早的毒性評價可能因為當時科學水平和技術條件的限制，現(xiàn)已不適用需重新評價。12.若受試物摻入飼料的最大加入量（10％）或液體受試物經(jīng)濃縮后仍達不到最大觀察到有害作用劑量為人的可能攝入量的規(guī)定倍數(shù)時，如何綜合其它的毒性試驗結果進行安全性評價。應綜合考慮的問題11.保健食品安全性的重新評價：很早的毒性評審評結論的判定1.認可毒理學試驗：試驗設計合理，操作規(guī)范，試驗結果能夠證明受試物的安全性。2.屬以下幾種情況之一，補充資料后建議批準：（1）檢驗報告格式不規(guī)范，需要重新出具檢驗報告毒理學試驗報告。（2）數(shù)據(jù)偏離歷史對照較大，需檢驗機構做出解釋。（3）未提供某些試驗數(shù)據(jù)，需要補充提供。審評結論的判定1.認可毒理學試驗：試驗設計合理，操作規(guī)范，試審評結論的判定3.重做試驗，大會再審，屬以下幾種情況之一：（1）由于實驗操作不規(guī)范，根據(jù)提供的檢驗報告無法評價產(chǎn)品的安全性，需要做除30天/90天喂養(yǎng)試驗以外的毒理學試驗；（2）已有數(shù)據(jù)提示可能存在安全性問題，但難以下結論，需要重復試驗。審評結論的判定3.重做試驗，大會再審，屬以下幾種情況之一：（1）毒理學評價的結果表明產(chǎn)品在推薦劑量下對人體具有一定的毒性，存在安全性問題。（2）產(chǎn)品的原料、配方存在明顯的安全性問題，如配方含有“可用于保健食品的原料”名單以外的原料，且未進行新資源食品安全性毒理學評價。（3）選擇安全性毒理學試驗不符合程序規(guī)定，未完成相應階段的毒理學試驗。4.對產(chǎn)品的安全性不予認可的情況如下（一）：（1）毒理學評價的結果表明產(chǎn)品在推薦劑量下對人體具有一定的毒（4）毒理、功能、興奮劑與衛(wèi)生學、穩(wěn)定性試驗樣品的批號不一致。（5）未按規(guī)定提供安全性毒理學評價資料的。（6）30天/90天喂養(yǎng)試驗劑量設計不合理或某些指標異常，結果不可信。4.對產(chǎn)品的安全性不予認可的情況如下(二)：（4）毒理、功能、興奮劑與衛(wèi)生學、穩(wěn)定性試驗樣品的批號不一致第三部分保健食品安全性毒理學

評價中存在的問題第三部分保健食品安全性毒理學

評價中存在的問題存在的問題

鑒于制訂此程序的歷史背景與目前情況有所不同，因此，對保健食品的安全性評價時，出現(xiàn)了選擇毒理試驗的項目、劑量、樣品前處理等問題，現(xiàn)就上述問題一并提出供討論。存在的問題鑒于制訂此程序的歷史背景與目前情況有所不同存在的問題

充分了解受試物1.要求提供規(guī)格化產(chǎn)品，至少是中試產(chǎn)品。符合既定的配方，生產(chǎn)工藝和質量標準。2.仔細閱讀配方以了解受試物的物理、化學性質（包括化學結構、純度、穩(wěn)定性等）。3.了解生產(chǎn)工藝。4.按產(chǎn)品說明書的最大人體推薦量進行劑量設計。存在的問題充分了解受試物存在的問題

動物年齡主要指30天和90天喂養(yǎng)試驗，“程序”中規(guī)定用離乳大鼠，而保健食品應視具體情況而異。最典型的是人參、鹿茸、減肥產(chǎn)品，并非受試物本身有毒影響了動物的生長發(fā)育，而是因為這類產(chǎn)品的服用對象是成人，所用的動物是離乳大鼠。存在的問題動物年齡存在的問題實驗項目的選擇配方中含有僅限局部地區(qū)人群食用而又不在“51號”名單上的原料，只對產(chǎn)品進行了兩階段毒理試驗，而未對原料本身按要求進行毒理學評價，有的進行了評價但給予動物受試物的方式與實際食用方式不一樣，如袋泡茶摻在飼料中給予動物。含“51號”文附錄二名單上原料的產(chǎn)品只做了LD50和三項致空變試驗。存在的問題實驗項目的選擇存在的問題實驗項目的選擇藥食同源產(chǎn)品經(jīng)有機溶劑提取未做毒理試驗，或只做LD50和微核試驗。從食品中提取某一成分的粗提物只做了LD50和三項致突變試驗，如大豆異黃酮。配方中僅有單一成分，如人參、西洋參、蜂王漿不必進行全部二階段毒理試驗。存在的問題實驗項目的選擇存在的問題樣品前處理（一）液體類（二）酒類（三）固體類（四）菌類（五）以某些食品為載體的保健食品：如富含微量元素的雞蛋、南瓜粉等存在的問題樣品前處理存在的問題LD50中存在的問題

1.經(jīng)口LD50還用對照組。

2.不寫禁食時間。

3.做到了21.5g/KgBW,結論是﹥10g/KgBW。

4.將受試物摻入飼料吃24小時。存在的問題LD50中存在的問題存在的問題Ames實驗

1.以油為載體的產(chǎn)品直接倒入平皿

2.工藝是低溫提取或低溫冷凍干燥的產(chǎn)品用8磅15分鐘高壓滅菌。

3.有溶劑對照而無自發(fā)回變對照。

4.菌落回變數(shù)隨劑量的增加而增多已超過正常值而不是二倍而出具了合格的報告存在的問題Ames實驗存在的問題Ames實驗

5.有抑菌作用的產(chǎn)品不進行預試驗找出抑菌劑量而出具了5mg/皿菌落回變數(shù)正常的報告。

6.產(chǎn)品中明顯含有組氨酸，而不進行除組氨酸的前處理。

7.應該用XAD-2樹脂對樣品進行前處理

8.沒有理解5mg/皿含義：系指有效成份，如某些產(chǎn)品含有80%的糖，沒進行樣品前處理或向送樣方提出要求，直接用產(chǎn)品做5mg/皿，實際上是1mg/皿。存在的問題Ames實驗存在的問題

微核、精子畸形以及睪丸染色體畸變試驗

1.微核試驗：幾份報告中都有陽性對照的數(shù)據(jù)，而這幾份原始記錄中皆無陽性對照。

2.精子畸形試驗：陽性對照組精子畸形率﹤3.4%，即判斷陰性對照組與陽性對照組相比差異有顯著性P﹤0.05。（正常畸形率為0.8-3.4%）。

3.睪丸染色體畸變試驗：陽性對照持續(xù)應用一年以上。存在的問題微核、精子畸形以及睪丸染色體畸變試驗存在的問題30天或90天喂養(yǎng)實驗1.雌性鼠的體重比雄性鼠還重或一樣重

148.33±8.38172.28±10.93194.82±10.92215.46±14.68231.50±15.15189.83±14.66239.52±17.56288.33±16.92324.14±19.80357.24±22.7267891014.03±2.0330.68±3.2247.61±5.3579.52±6.70118.53±7.1214.44±2.0730.62±4.5649.02±6.1986.86±8.98137.72±11.6912345雄（n=30)雌（n=30)雄（n=30)雌（n=30)體重(g)周齡（周）體重(g)周齡（周）存在的問題30天或90天喂養(yǎng)實驗148.33±8.381存在的問題30天或90天喂養(yǎng)實驗2.食物利用率雌雄分不開，或為將雌、雄性大鼠食物利用率拉開差距，雌性和雄性大鼠的進食量基本一致。3.大鼠的進食量越來越高，雌性大鼠700多克、4.雄性大鼠600多克，而體重與食物利用率和以前的差不多。5.劑量設計：相當于推薦量（以g/KgBW計）的6.56、26和105倍，這是先設計再做試驗，還是先做試驗再設計？6.受試物摻入飼料的量高達18%，袋泡茶摻入飼料給予動物。

存在的問題30天或90天喂養(yǎng)實驗存在的問題30天或90天喂養(yǎng)實驗7.動物攝入飼料的量在30天喂養(yǎng)試驗以體重的10%計，90天喂養(yǎng)試驗以體重的8%計，這是經(jīng)過大量資料統(tǒng)計得出，但將受試物以10-20%的濃度飲水給予動物，又不計飲水量，與報告的劑量設計是否基本一致？有的按每100gBw給10ml含有受試物的水，飲畢再給飲用水？8.有的試驗動物體重增長緩慢，解釋是受試物不好吃。9.生化指標：不做TG、AST；TC高達2.8mmol/L；BUN12.9mmol/L。存在的問題30天或90天喂養(yǎng)實驗存在的問題30天或90天喂養(yǎng)實驗10.以大鼠為試驗動物測尿酸，大鼠的代謝與人不完全一樣，可將尿酸轉化為尿囊素排出。11.病理報告：心肝脾無毒性損傷，兩個產(chǎn)品，兩份報告來自同一檢測單位；A4紙寫了一大篇，詳細描述了病理組織結構，沒有一點異常，四個產(chǎn)品、四份報告來源同一檢驗單位；寫一小段也比較詳細的描述了病理組織結構，亦無任何異常三個產(chǎn)品、三份報告亦來源于同一檢驗單位。存在的問題30天或90天喂養(yǎng)實驗存在的問題

傳統(tǒng)致畸試驗其劑量設計比30天喂養(yǎng)還高，程序已明確以亞急性試驗的最大無作用劑量為高劑量，目的是：找強致畸物，即具有致畸作用，但無母體毒性出現(xiàn)，這種受試物致畸作用往往較強存在的問題傳統(tǒng)致畸試驗存在的問題

其他典型問題推薦量較大的產(chǎn)品，同一檢測單位，30天喂養(yǎng)試驗進行了樣品前處理達到足夠倍數(shù)，但LD50、三項致突變試驗未進行樣品前處理，相當于人推薦量的倍數(shù)很低；樣品進行了前處理但折合到樣品的量不一致；樣品進行了前處理，但報告中寫取一定量的樣品用回旋蒸發(fā)儀濃縮至所需濃度，劑量設計寫的是25、50、100ml/KgBw；有的報告要從字里行間為依據(jù)替檢測單位計算出劑量設計是否正確；Ames試驗的劑量以每皿%之多少計。存在的問題其他典型問題謝謝謝謝保健食品安全性毒理學檢驗及評價99p課件保健食品安全性毒理學檢驗及評價99p課件保健食品安全性毒理學檢驗及評價99p課件保健食品安全性毒理學檢驗及評價99p課件保健食品安全性毒理學檢驗及評價99p課件保健食品安全性毒理學檢驗及評價99p課件保健食品安全性毒理學

檢驗及評價保健食品安全性毒理學

檢驗及評價第一部分中國保健食品簡介第一部分中國保健食品簡介保健食品定義

保健食品（FunctionalFood）系指具有調(diào)節(jié)人體生理功能、適宜特定人群食用、不以治療為目的的一類食品。

保健食品定義保健食品（FunctionalFood特點

具有特定的保健功能；無毒副作用，食用安全；有別于食品和藥品；增強體質、預防疾病為主；適用于特定人群。特點具有特定的保健功能；特定功能

由國家管理部門指定允許申報的功能目前有27種

27種以外的功能，生產(chǎn)企業(yè)在獲得足夠的技術資料后（包括評價方案，試驗數(shù)據(jù)及結果）向有關管理部門提出受理申請，接受評審。特定功能由國家管理部門指定特定人群正常成人以外，包括嬰幼兒、孕婦、乳母、青少年、中老年、特殊工種的工作者以及常見病病人對于營養(yǎng)保健有特殊的需要

膳食結構的不同營養(yǎng)素需求的不同特定人群正常成人以外，包括嬰幼兒、孕婦、乳母、青少年、保健食品的發(fā)展歷程第一代保健食品：在《保健食品的管理方法》頒布以前市場上已有的保健食品。第二代保健食品：經(jīng)動物和人體實驗證實具有某種生理調(diào)節(jié)功能的食品。第三代保健食品：不僅需要經(jīng)人體及動物實驗證實具有某種功能，而且需要研究提供該功能因子、含量及其作用機理。保健食品的發(fā)展歷程第一代保健食品：在《保健食品的管理方法》頒發(fā)展趨勢根據(jù)新的疾病譜和健康問題，開發(fā)新的保健功能根據(jù)新的養(yǎng)生保健概念，開發(fā)新的保健功能根據(jù)現(xiàn)代營養(yǎng)科學理論，開發(fā)新的膳食有效成分根據(jù)中醫(yī)藥理論，開發(fā)中藥類有效成分根據(jù)生命科學理論，開發(fā)新的人體所需營養(yǎng)素發(fā)展趨勢根據(jù)新的疾病譜和健康問題，開發(fā)新的保健功保健食品開發(fā)中的注意點中草藥新資源野生動植物及其產(chǎn)品核酸類真菌類益生菌類酶制劑、氨基酸螯合物、金屬硫蛋白以及直接以微生物發(fā)酵的保健食品開發(fā)中的注意點中草藥中草藥類

中草藥作為原料應注意：1.不能采用有明顯毒副作用的中藥材、獲國家藥政管理部門批準的中成藥、受國家中藥保護的中藥成方2.用量應控制在臨床用量的50%以下中草藥類中草藥作為原料應注意：新資源類

新資源作為原料時必須具備的有關資料：名稱及國內(nèi)外研究利用情況；名稱、配方及生產(chǎn)工藝；產(chǎn)品成分（包括營養(yǎng)物質、有生物效應物質及有毒有害物質等）的分析報告；安全性毒理學評價報告或有關文獻資料；個別地區(qū)有食用習慣的應提供有關食用歷史的證明資料；質量標準。新資源類新資源作為原料時必須具備的有關資料：野生動植物及其產(chǎn)品類

以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關限制：受保護的野生動物。禁止使用自然的、人工馴養(yǎng)繁殖或人工栽培的國家一級和自然的二級保護野生動植物及其產(chǎn)品。人工馴養(yǎng)繁殖或人工栽培的國家二級保護野生動植物及其產(chǎn)品，國家保護的有益的或者有重要經(jīng)濟、科學研究價值的陸生野生動物及其產(chǎn)品應提供省級以上農(nóng)業(yè)（漁業(yè)）、林業(yè)行政主管部門的批準文件。野生動植物及其產(chǎn)品類以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關限制：以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關限制：中華人民共和國林業(yè)植物新品種保護名錄中植物及其產(chǎn)品，如果該種植物已獲“品種權”，應提供該種植物品種權所有人許可使用的證明；如該種植物尚未取得品種權，應提供國務院林業(yè)主管部門出具的該種品種尚未取得品種權的證明。進口保健食品中使用《瀕危野生動植物種國際貿(mào)易公約》名錄中動植物及其產(chǎn)品的，應提供國務院農(nóng)業(yè)（漁業(yè)）、林業(yè)行政主管部門批準文件、進出口許可證及海關的證明文件。野生動植物及其產(chǎn)品類以野生動植物及其產(chǎn)品為原料的有關限制：野生動植物及其產(chǎn)品類核酸類核酸類保健食品申報時需提供的特殊資料：具體成份名稱、來源、含量；與所申報功能直接相關的科學文獻依據(jù)；企業(yè)標準中標出核酸各成份的含量、純度和相應的定性、定量檢測方法以及質量標準；詳細生產(chǎn)工藝（包括加工助劑名稱、用量）；核酸原料純度的檢測報告。核酸類核酸類保健食品申報時需提供的特殊資料：核酸類核酸類保健食品申報時的注意事項：不得以單一的DNA或RNA作為原料申報。單一原料純度應大于80％。功能申報范圍暫限定為免疫調(diào)節(jié)功能。如申報其他功能，需向衛(wèi)生部提交申請并納入審批范圍后，方可申報。核酸成份的每日推薦食用量為0.6g-1.2g。不得以“核酸”命名。說明書及標簽中的“不適宜人群”除按保健食品相關規(guī)定標注外，應明確標注出“痛風患者”。核酸類核酸類保健食品申報時的注意事項：真菌類真菌類保健食品的部分規(guī)定：生產(chǎn)企業(yè)應建立有關的檔案資料。生產(chǎn)企業(yè)應具備相應的生產(chǎn)條件。對生產(chǎn)菌種及工藝變更的相應規(guī)定。冠名規(guī)定。發(fā)酵過程中，除培養(yǎng)基外，不得加入具有功效成分的動植物及其它物質。不能使用經(jīng)過基因修飾的菌種。真菌類真菌類保健食品的部分規(guī)定：益生菌類益生菌類保健食品的部分規(guī)定：生產(chǎn)用菌種應滿足一定的條件。生產(chǎn)企業(yè)應具備的一定條件。菌種及生產(chǎn)工藝不得變更，否則產(chǎn)品必須重新申報。不提倡以液態(tài)形式生產(chǎn)活菌產(chǎn)品。在保存期內(nèi)活菌數(shù)目不得少于106cfu/mL(g)。益生菌類益生菌類保健食品的部分規(guī)定：益生菌類益生菌類保健食品的部分規(guī)定：如需在特殊條件下保存，應在標簽和說明書中標示所用菌種在其發(fā)酵過程中，除培養(yǎng)基外，不得加入具有功效成分的動植物及其物質不能使用經(jīng)過基因修飾的菌種益生菌類益生菌類保健食品的部分規(guī)定：其他類別對酶制劑、氨基酸螯合物、金屬硫蛋白以及直接以微生物發(fā)酵為原料限制的部分規(guī)定：未列入《食品添加劑使用衛(wèi)生標準》或衛(wèi)生部公告名單中的食品添加劑新品種的酶制劑不得用于保健食品的生產(chǎn)。不再審批以金屬硫蛋白為原料生產(chǎn)的保健食品。其他類別對酶制劑、氨基酸螯合物、金屬硫蛋白以及直接以微生物發(fā)其他類別使用微生物發(fā)酵直接生產(chǎn)保健食品的，需提供的特殊資料：菌種來源及菌種檢定報告菌種的毒力試驗報告及安全性評價報告國內(nèi)外該菌種使用于食品生產(chǎn)的文獻資料發(fā)酵終產(chǎn)物的質量標準（包括純度、雜質成分及含量）其他類別使用微生物發(fā)酵直接生產(chǎn)保健食品的，需提供的特殊資料：其他類別使用氨基酸螯合物生產(chǎn)保健食品的，需提供的特殊資料：提供明確的化學結構式、理化性質，配體與金屬離子之比、游離元素和總元素之比。提供定性、定量的檢測方法及驗證報告。急性毒性試驗加做停食16小時后空腹一次灌胃試驗和30天喂養(yǎng)試驗的組織病理報告。國內(nèi)外使用于食品生產(chǎn)的文獻資料。其他類別使用氨基酸螯合物生產(chǎn)保健食品的，需提供的特殊資料：安全，無毒、副作用功能，保健功效理化、微生物特性：有害成分物質和污染物毒理學特性：劑量反應（效應）關系保健食品質量控制生物活性物質功效成分通過檢驗和評價，加以控制安全，無毒、副作用功能，保健功效理化、微生物特性：保健食品質第二部分保健食品安全性毒理學

檢驗及評價第二部分保健食品安全性毒理學

檢驗及評價主要內(nèi)容

檢驗評價依據(jù)審評基本要求選擇毒理學試驗的基本原則實驗動物的選擇樣品的預處理原則毒理學試驗項目要點介紹毒理學安全性評價時應考慮的問題審評結論的判定主要內(nèi)容檢驗評價依據(jù)毒性及功能檢驗評價依據(jù)1996年3月衛(wèi)生部《保健食品的管理方法》

保健食品的標準、功能評價、審批程序和監(jiān)督管理辦法1996年7月GB15193《食品安全性毒理學評價程序和方法》

衛(wèi)生部《保健食品功能學評價程序和檢驗方法》

僅包含了12項功能檢驗及評價方法2001年7月衛(wèi)生部《保健食品功能學評價程序和檢驗方法》

可受理和評價的功能調(diào)整到31項2003年2月衛(wèi)生部《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》

將功能學、毒理學、功效成分及衛(wèi)生指標檢驗評價方法三者合一毒性及功能檢驗評價依據(jù)1996年3月衛(wèi)生部《保健食品的管理方審評的基本要求1.配方原（輔）料、用量、理化性質2.劑量食用方法及用量3.工藝規(guī)格化產(chǎn)品符合配方、工藝、質量標準4.批號注意批號是否一致,益生菌、奶制品等保質期短的除外審評的基本要求1.配方1.毒理學評價的四個階段第一階段：急性毒性試驗經(jīng)口急性毒性試驗：LD50，聯(lián)合急性毒性，一次最大耐受量試驗第二階段：遺傳毒性試驗，30天喂養(yǎng)試驗，傳統(tǒng)致畸試驗遺傳毒性試驗：原核細胞和真核細胞，體內(nèi)試驗和體外試驗相結合Ames或基因突變試驗；微核試驗或染色體畸變試驗；精子畸變試驗等第三階段：亞慢性毒性試驗

90天喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗、代謝試驗第四階段：慢性毒性試驗（包括致癌試驗）選擇毒理學試驗的基本原則1.毒理學評價的四個階段選擇毒理學試驗的基本原則2.一般無需進行毒性試驗的原料或成分 屬于普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質：采用傳統(tǒng)的工藝及食用方式水提取物，常規(guī)服用量，無不安全性報道來源、工藝和質量符合國家要求的營養(yǎng)強化劑或營養(yǎng)素補充劑選擇毒理學試驗的基本原則2.一般無需進行毒性試驗的原料或成分選擇毒理學試驗的基本原則3.需進行一階段和三項致突變毒性試驗的原料或成分屬于普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質且用水提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的：（1）服用量與常規(guī)用量相同急性毒性、三項致突變試驗（2）服用量大于常規(guī)用量還需加做30天喂養(yǎng)試驗，必要時進行傳統(tǒng)致畸試驗和第三階段毒性試驗選擇毒理學試驗的基本原則3.需進行一階段和三項致突變毒性試驗的原料或成分選擇毒理學4.需進行一、二階段毒性試驗的原料或成分文獻顯示無危害，人群長期食用；具有國際性毒理學評價結果的已知的化學物質，產(chǎn)品質量規(guī)格與國外產(chǎn)品一致；國外廣泛食用且能提供安全性評價資料；衛(wèi)生部規(guī)定允許使用的動植物及其提取物或微生物。選擇毒理學試驗的基本原則4.需進行一、二階段毒性試驗的原料或成分選擇毒理學試驗的基本5.需進行一至三階段毒性試驗的情況：一、二階段試驗結果與國外產(chǎn)品不一致的國外少數(shù)國家或地區(qū)食用的原料或成分水提取物，大于常規(guī)服用量用水提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的，大于常規(guī)用量選擇毒理學試驗的基本原則5.需進行一至三階段毒性試驗的情況：選擇毒理學試驗的基本原則6.需進行一至四階段毒性試驗的原料和成分

國內(nèi)外均無食用先例7.敏感指標及敏感試驗的保健食品

不同食用人群和（或）不同功能的保健食品選擇毒理學試驗的基本原則6.需進行一至四階段毒性試驗的原料和成分選擇毒理學試驗的基本8.保健食品新原料保健食品新原料（以下簡稱新原料）是指不在國家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食品、衛(wèi)生部公布或批準可以食用以及生產(chǎn)普通食品的范圍內(nèi)，擬用于保健食品的原料。國家食品藥品監(jiān)督管理局和國家有關部門規(guī)定的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作為新原料。選擇毒理學試驗的基本原則8.保健食品新原料選擇毒理學試驗的基本原則

在已批準的保健食品中使用過，或衛(wèi)生部已批準為新資源食品的原料，符合以下情況的仍按新原料進行管理：未列入國家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食品的物品名單；尚未列入衛(wèi)生部公布或批準的食品新資源或新資源食品名單內(nèi)；衛(wèi)生部已批準為食品新資源或新資源食品，但保健食品注冊申請人與食品新資源或新資源食品生產(chǎn)批件中載明的申報單位不一致。選擇毒理學試驗的基本原則在已批準的保健食品中使用過，或衛(wèi)生部已批準為新資源食新原料安全性毒理學試驗項目的選擇①無食用史需做四階段試驗②局部地區(qū)有食用史需做三階段試驗

其中，100倍<攝入量<300倍需做第四階段試驗③有食用史需做二階段試驗

經(jīng)評價后下一階段試驗④廣泛食用的原料二階段試驗（食用史包括地區(qū)、年代、人群、食用量、頻率等情況）選擇毒理學試驗的基本原則新原料安全性毒理學試驗項目的選擇選擇毒理學試驗的基本原則新原料安全性毒理學試驗項目的選擇⑤已知化學物:

⑤-1可只做二階段實驗的包括已有權威機構進行系統(tǒng)的毒理學安全性評價有資料證明所用原料與其一致

⑤-2如試驗結果與權威機構進行的評價不一致，需進入下階段的試驗⑥有新原料的保健食品:根據(jù)試驗結果綜合分析。選擇毒理學試驗的基本原則新原料安全性毒理學試驗項目的選擇選擇毒理學試驗的基本原則對受試保健食品的要求

單一已知化學成分，應提供物理和化學性質多種原料的配方產(chǎn)品，應提供配方配方產(chǎn)品，必要時還應提供各組分，功效成分的物理和化學性質及其檢測報告提供原料來源、生產(chǎn)工藝、人的可能攝入量。使用說明書等有關資料受試物應符合既定配方和生產(chǎn)工藝的規(guī)格化產(chǎn)品對受試保健食品的要求單一已知化學成分，應提供物理和化學性質實驗動物的選擇及給樣量1.根據(jù)各項實驗的具體要求，合理選擇實驗動物

常用大鼠和小鼠，品系不限，推薦使用近交系。2.動物應符合《實驗動物管理條例》

清潔級或清潔級以上動物合格證號及動物實驗室合格證號3.灌胃量

大鼠：10ml/kg?BW（若以水為溶劑，推薦20ml/kg?BW）小鼠：20ml/kg?BW實驗動物的選擇及給樣量1.根據(jù)各項實驗的具體要求，合理選擇實樣品的預處理原則1.介質的選擇

應選擇適合于受試動物的溶劑、乳化劑、助懸劑，要求無毒、與受試物不發(fā)生反應、穩(wěn)定性好。常用的介質有：蒸餾水、食用植物油、淀粉、明膠及羧甲基纖維素等。2.液體類

受試物濃縮倍數(shù)應符合試驗要求。濃縮方法不應破壞其有效成份，常用的有60℃～70℃減壓或常壓蒸發(fā)、冷凍干燥。按工藝要求。樣品的預處理原則1.介質的選擇樣品的預處理原則3.袋泡茶類

處理方法與產(chǎn)品推薦飲用方法相同推薦用：80℃--90℃常壓用水浸泡30min

水量為受試物的10倍，提取2次，2次提取液合并濃縮至所需濃度標明該濃縮液與受試物的比例樣品的預處理原則3.袋泡茶類樣品的預處理原則4.含乙醇類（1）不需濃縮的受試物乙醇濃度<15％直接進行試驗乙醇濃度>15％乙醇濃度應調(diào)至15％（2）需濃縮的受試物乙醇濃度<15％濃縮后調(diào)至原乙醇濃度乙醇濃度>15％濃縮后調(diào)至15％乙醇濃度在進行乙醇濃度調(diào)整時必須用原酒基樣品的預處理原則4.含乙醇類樣品的預處理原則5.膨脹系數(shù)較高的受試物選擇可溶性介質給受試物的方法：灌胃其最高濃度最大灌胃量時達不到人體推薦量的100倍，按實際達到的倍數(shù)標明受試物的膨脹系數(shù)樣品的預處理原則5.膨脹系數(shù)較高的受試物樣品的預處理原則6.益生菌等微生物類保健食品在進行Ames試驗或體外細胞試驗時需將受試物滅活。需濃縮的應采用低溫干燥法或由企業(yè)提供所需濃度的受試物（附方法、技術參數(shù)）。7.以食品為載體的受試物

（1）有營養(yǎng)價值：按設計量進行飼料的營養(yǎng)成份調(diào)整，提供詳細的說明。（2）大豆蛋白、乳清蛋白如質量、工藝等符合食品標準和安全要求，允許去除。如僅以該原料生產(chǎn)的，可申請免做毒理學試驗。樣品的預處理原則6.益生菌等微生物類保健食品毒理學試驗項目要點介紹

急性經(jīng)口毒性試驗鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗骨髓細胞微核試驗哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗小鼠精子畸形試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗

30天喂養(yǎng)試驗毒理學試驗項目要點介紹急性經(jīng)口毒性試驗急性經(jīng)口毒性試驗目的：測定LD50，毒性分級。了解毒性強度、性質和可能的靶器官，為進一步的毒性試驗提供劑量和觀察指標的選擇依據(jù)。原理：急性毒性：經(jīng)口一次性、24h內(nèi)多次給予，短時間內(nèi)的毒性反應。致死劑量通常用半數(shù)致死劑量LD50表示。急性聯(lián)合毒性：兩種或兩種以上的受試物，可能發(fā)生拮抗、相加或協(xié)同的聯(lián)合方式，可以根據(jù)一定的公式計算和判定標準來確定這三種不同的作用。急性經(jīng)口毒性試驗目的：測定LD50，毒性分級。了解毒性強度、急性經(jīng)口毒性試驗時間周期：一般為3周

3-5天，大、小鼠適應期

7-14天，染毒及實驗觀察期 發(fā)生動物死亡時，應進行大體解剖觀察和評價指標：毒性反應癥狀：各器官系統(tǒng)的反常表現(xiàn)（中樞、自主神經(jīng)、呼吸、心血管、胃腸、生殖泌尿系統(tǒng)、皮毛、粘膜等）及體重變化死亡情況：死亡的時間、數(shù)量、性別、表現(xiàn)等。大體尸檢結果：如果發(fā)生死亡動物急性經(jīng)口毒性試驗時間周期：一般為3周急性毒性（LD50）劑量分級表級別大鼠口服LD50，mg/kg相當于人的致死量mg/kgg/人極毒<1稍嘗0.05劇毒1-50500-40000.5中等毒51-5004000-300005低毒501-500030000-25000050實際無毒5001500000500無毒>15000>5000002500急性毒性（LD50）劑量分級表級別大鼠口服LD50，急性經(jīng)口毒性試驗試驗結果的判定：1.LD50＜人可能攝入量的100倍，放棄；反之繼續(xù)下一步試驗。2.LD50≥10g/kgbw或按最大耐受量染毒而未出現(xiàn)動物死亡的，可繼續(xù)下一步試驗。急性經(jīng)口毒性試驗試驗結果的判定：鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗目的：檢測受試物的誘變性，預測其遺傳危害和潛在致癌作用的可能性。時間周期：一般為2周

第一周，鼠傷寒沙門氏菌種、試劑、培養(yǎng)基準備 第二周，染毒，培養(yǎng)48h，讀平板，菌落計數(shù)劑量設計：決定受試物最高劑量的因素是對細菌的毒性及其溶解度。最低劑量為0.2ug/皿；最高劑量為5mg/皿，或最大溶解劑量，最大飽和劑量以及最小毒性劑量?？稍O五個劑量組，組間距不超過5倍。同時設：陽性對照組，溶劑對照組和未處理對照組。鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗目的：檢測受試物的誘變性，預測鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗觀察及評價指標：各受試物組及三個對照組的四種菌株（TA97a，TA98，TA100和TA102）分別在加和不加S9情況下的菌落計數(shù)。結果評價（摻入法）：受試物組回變菌落數(shù)增加一倍以上（即回變菌落數(shù)≥2×未處理對照組數(shù)），并有劑量反應關系或有可重復的陽性反應，即可判試驗陽性。鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗觀察及評價指標：骨髓細胞微核試驗目的：檢測整體動物體內(nèi)骨髓嗜多染紅細胞微核發(fā)生率，以評價受試物致突變的可能性。原理：微核是在細胞有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進入子細胞形成細胞核時，仍然留在細胞質中的色單體或染色體的無著絲點斷片。末期之后，單獨形成一個或幾個規(guī)則的次核，被包含在細胞胞質內(nèi)，因比主核小，故稱為微核。骨髓細胞微核試驗目的：骨髓細胞微核試驗時間周期：一般為2周

3-5天適應期 小鼠經(jīng)口染毒，30h給受試物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，鏡檢劑量設計：至少設置3個劑量，最高劑量組為動物出現(xiàn)嚴重中毒表現(xiàn)和/或個別動物出現(xiàn)死亡的劑量。低劑量組應不出現(xiàn)毒性反應。一般取LD50的1/2、1/4、1/8作為三個劑量。當受試物的LD50≥10g/kg.bw時，最高劑量通常采用10g/kg.bw。同時設陽性對照組和溶劑對照組。骨髓細胞微核試驗時間周期：一般為2周骨髓細胞微核試驗觀察及評價指標：每只動物計數(shù)1000個嗜多染紅細胞，記錄含有微核的細胞數(shù)，并計算微核千分率。觀察嗜多染紅細胞與成熟紅細胞的比例。結果評價：受試物組與對照組微核率相比，增高呈劑量反應關系并有統(tǒng)計學意義，試驗結果為陽性。骨髓細胞微核試驗觀察及評價指標：哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗目的：檢測受試物對整體動物骨髓細胞染色體畸變的致突變性，以評價其致突變的可能性。原理：當受試物作用于細胞周期G1期和S期時，可誘發(fā)染色體型畸變，而作用于G2期時則誘發(fā)染色體單體型畸變。給動物腹腔注射秋水仙素，抑制細胞分裂時紡錘體的形成，增加中期分裂相細胞的比例，并使染色體絲縮短、分散，輪廓清晰。在顯微鏡下便可觀察染色體數(shù)目和形態(tài)。哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗目的：檢測受試物對整體動物骨髓哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗時間周期：一般為3周

3-5天適應期 小鼠或大鼠經(jīng)口染毒2-4次，每次間隔24h，在末次染毒18-24h進行取材（取材前2-4h，腹腔注射秋水仙素）。 取股骨，收集骨髓，制片，染色，鏡檢劑量設計：同骨髓細胞微核試驗哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗時間周期：一般為3周哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗觀察及評價指標：每只動物分析100個中期相細胞，每個劑量組不少于1000個。記錄染色體數(shù)目及結構的改變。結果評價：受試物組與對照組染色體畸變率相比，增高呈劑量反應關系并有統(tǒng)計學意義，試驗結果為陽性。哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗觀察及評價指標：小鼠精子畸形試驗目的：檢測整體動物體內(nèi)精子畸形發(fā)生率，以評價受試物對體內(nèi)生殖細胞的致突變作用。原理：小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遺傳性，許多常染色體及X、Y性染色體基因決定精子形態(tài)。精子的畸形主要是指形態(tài)的異常，已知精子的畸形是決定精子形成的基因發(fā)生突變的結果。因此形態(tài)的改變提示有關基因及其蛋白產(chǎn)物的改變。小鼠精子畸形試驗目的：小鼠精子畸形試驗時間周期：一般為7周

3-5天適應期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒5天，于首