分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)展[]生物學(xué)技術(shù)是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的重要診療手段。本文概述醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中常用的分臨床腫瘤診斷應(yīng)用分析[關(guān)鍵詞]分子生物學(xué)技術(shù)；醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)；應(yīng)用；研究DNA應(yīng)用進(jìn)展進(jìn)行綜述，試分析應(yīng)注意的問(wèn)題及預(yù)測(cè)發(fā)展趨勢(shì)。醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中常用的分子生物學(xué)技術(shù)概述PCR、NASBATAS等。此SELEX技術(shù)、循環(huán)核酸分析技術(shù)都極大治療中意義重大。分子生物學(xué)技術(shù)在臨床中的具體應(yīng)用病原微生物檢驗(yàn)PCR和生物芯片技術(shù)用于病原微生物檢驗(yàn)術(shù)與傳統(tǒng)的培養(yǎng)鑒定PCR通過(guò)向反應(yīng)管中加入特異性引物可同時(shí)鑒定出單種或多種病原體腫瘤及遺傳病診斷研究證實(shí)腫瘤及遺傳病幾乎都存在著一定的基因缺陷，只要基因P53抑癌基因的突變，通過(guò)分子蛋白質(zhì)組學(xué)、生物傳感器和流式細(xì)胞術(shù)診斷腫瘤特異因調(diào)控和微陣列技術(shù)。免疫系統(tǒng)疾病診斷免疫系統(tǒng)疾病診斷關(guān)鍵是確定基因水平上的調(diào)控表達(dá)。如在能自動(dòng)檢測(cè)人免疫缺陷病毒1型和2型抗體，為人類防治病毒性疾病提供了有力的武器。分子生物學(xué)技術(shù)在檢驗(yàn)應(yīng)用的新進(jìn)展1998SARS肆虐時(shí)，科學(xué)家就研制出專PCR多發(fā)的地中海貧血G6DP缺乏癥的產(chǎn)前和病例診斷；近年來(lái)，遺傳標(biāo)記技術(shù)的進(jìn)步，結(jié)合現(xiàn)有存在問(wèn)題及發(fā)展趨勢(shì)[2]，限但臨床中仍要根據(jù)實(shí)際需要選用經(jīng)濟(jì)合理的檢驗(yàn)項(xiàng)目患者負(fù)擔(dān)。其次，疾病診斷過(guò)度依賴檢驗(yàn)結(jié)果問(wèn)題，應(yīng)將臨床資料管理不足問(wèn)題，雖然分子生物技術(shù)在臨床推廣應(yīng)用中存在著許多尚待解決的問(wèn)題參考文獻(xiàn)YuregirOO,SahinFI,YilmazZ,etal.Fluorescentinsituhybrid-izationstudiesinmultiplemyeloma[J].Hematology,2009,14(2):90-94.[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,3(6):161.PCR在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用關(guān)鍵詞：醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)應(yīng)用PCR現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)王耿新劉德亮王志群陳獻(xiàn)業(yè)ft東省青島市腫瘤醫(yī)院青島鏈反應(yīng)（PolymeraseChainReaction,PCR）DNA擴(kuò)增技術(shù)。自1985年美國(guó)PE-Cetus公司的K.BMullis等人首創(chuàng)了PCR技術(shù)之后，它以相當(dāng)驚人的速度被廣泛地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)及分子生物學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域?，F(xiàn)今，PCR技術(shù)已成為一種對(duì)標(biāo)本中特定的DNA片段進(jìn)行分析研究和檢測(cè)鑒定的重要方法。近20年來(lái)PCR病診斷、免疫學(xué)研究、癌基因探索及治療等方面都作出了相應(yīng)的貢獻(xiàn)。PCR[1-2]PCR技術(shù)的基本原理是模仿DNADNA片段。它主要是由三個(gè)基本步驟組成的循環(huán)反應(yīng)。首先是變性，用加熱的方法使雙鏈DNA解鏈成鏈（引物）存在的條件下，用DNA進(jìn)行催化，按堿基配對(duì)的原則合成互補(bǔ)鏈。引物從3'端進(jìn)行延伸，合成的方向?yàn)?'端（一條人工合成的引物）至3'端，從而合成與模板DNA→→引物延伸的過(guò)程，經(jīng)過(guò)約30個(gè)周期的循環(huán)（2-3分鐘），1-2小時(shí)就能將所需基因擴(kuò)增幾DNAY=（1+XnYXn為循環(huán)次數(shù)。PCR技術(shù)具有敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、快速省時(shí)等特點(diǎn)。其靈敏度可達(dá)到Pg級(jí)，甚至達(dá)到fg級(jí)[3]水平，而被擴(kuò)增的基因片段能與原基因片段保持不變。PCR技術(shù)操作簡(jiǎn)便、快速而易掌握，并且對(duì)標(biāo)本要求不高。用過(guò)去的方法完成一項(xiàng)試驗(yàn)少則幾周，DNAPCR完成整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程，用極微量的粗制標(biāo)本就可獲取目的產(chǎn)物。常用的幾種PCR及主要用途[4-5]PCRmRNA定量及轉(zhuǎn)錄水平的研究。PCR（AC-PCR）：用于病毒感染的檢測(cè)。PCR（AsymmetricPCR）：用于制備探針或測(cè)序。彩色PCR（CCA-PCR）用于檢測(cè)某些多型別病毒的混合感染。PCR（InSituRT-PCR）：RNA病毒感染。PCR（RT-PCR）：cDNARNAcDNA探針。PCR（invertedPCR）：用于擴(kuò)增已知基因片段兩側(cè)的未知序列。PCR（membrane-boundPCR）：PCRDNA。PCR（IndirectInSituPCR）：DNAPCRPCR強(qiáng)。PCR技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的地位現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，人類疾病多數(shù)是直接或間接與基因有關(guān)[6]，如腫瘤、糖尿病和心血出現(xiàn)使我們進(jìn)入了基因診斷的新時(shí)代并成就了現(xiàn)代意義基因診斷的崛起PCR的PCR技術(shù)診斷感染性疾病每年達(dá)幾千萬(wàn)人次，其費(fèi)用PCR1995年[7]。而國(guó)際1998年又發(fā)布了關(guān)于分子擴(kuò)增在臨床診斷中應(yīng)用的質(zhì)量評(píng)估基礎(chǔ)的文件PCR[8]。由此可見(jiàn)，兩個(gè)權(quán)威性文件也都肯定了PCR診斷技術(shù)。PCR技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用PCR技術(shù)在腫瘤方面的應(yīng)用PCR技術(shù)的腫瘤病毒病因、腫瘤相關(guān)基因、腫瘤相關(guān)抑癌基因等研究方面已取得可喜成果。[14]Kaposi肉瘤等與人巨細(xì)胞病毒（CMVBurkittEB病毒有關(guān)；原發(fā)性肝癌與乙型肝炎病毒（HBV）有關(guān)；泌尿道腫瘤和食道腫瘤等與人乳頭瘤病毒（HPV）有關(guān)。人類腫瘤病毒病因中較HPV161831339PCRHPV1618無(wú)感染，對(duì)子宮頸癌的早期診斷及預(yù)防有著顯著的意義。rasH-rasK-rasN-rasP21ras家族癌基H-rasK-ras1261N-ras13號(hào)密PCRras基因與腫瘤的關(guān)系?，F(xiàn)已查明ras[124910]的腫瘤有幾十種。如：各種急性慢性白R(shí)b[11]是人類最早（1986年）發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，其后又相繼發(fā)P53WT1NF1DCCMCCAPCP16P21等抑癌基因。在13Rb基因的缺失與癌變有關(guān)。在許多常見(jiàn)腫瘤，如骨肉瘤、肺癌、膀胱癌、乳腺癌等惡性腫瘤中，常發(fā)現(xiàn)該基因失活[11]。P53[12-14]PCR不但能有效地檢測(cè)別、分型、分期、治療及預(yù)后評(píng)估等。近年，剛興起的熒光定量逆轉(zhuǎn)錄（RT）-PCR[10]在腫瘤診斷、治療和微轉(zhuǎn)移以及微小RT-PCRmRNART-PCR還可用于腫瘤耐藥基因（MDR1）[10]表達(dá)水平檢測(cè)，為臨床篩選化療藥物及治療方法提供依據(jù)。PCR技術(shù)在遺傳病方面的應(yīng)用PCR[10]β-/插入、動(dòng)態(tài)突變、部分高發(fā)的點(diǎn)突變及表XPCR在遺傳病診斷及遺傳PCR產(chǎn)物直接測(cè)序已成為檢測(cè)遺傳病PCR[10]，尤其是在細(xì)菌不PCR擴(kuò)增時(shí)，具有較高的特異性和敏感性。PCR技術(shù)在感染性疾病方面的應(yīng)用PCR[1015]10-100個(gè)基因拷貝，而目前，105～107PCR技術(shù)的運(yùn)用解“PCR方法來(lái)確定。另外，病原體感染后的發(fā)病時(shí)間和病情輕重均與病原體數(shù)量有關(guān)。如艾滋病（AIDS）由人免疫缺陷病毒（HIV）HIVAIDS潛伏期的長(zhǎng)短和臨床PCR來(lái)定量說(shuō)明。PCRHBVHBVPCRHBVHBeAgHBVDNADNAPCRHBV的載量，來(lái)觀察拉咪呋啶及多種聯(lián)合用藥治療慢性乙型肝炎的療效具有指導(dǎo)意義。PCR學(xué)、病毒培養(yǎng)及探針雜交等方法都很難做到。PCR技術(shù)的運(yùn)用使上述問(wèn)題PCR技術(shù)在技術(shù)性病監(jiān)控和性病病原體的檢測(cè)方面也正在擴(kuò)大，并列為監(jiān)控手段和作為檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。PCR技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)應(yīng)用中的問(wèn)題假陽(yáng)性PCR在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)應(yīng)用中所面臨的問(wèn)題之一是擴(kuò)增產(chǎn)物污染帶來(lái)的假陽(yáng)性，而實(shí)驗(yàn)室PCR反應(yīng)體系擴(kuò)增出來(lái)而產(chǎn)生假陽(yáng)性。解決的根本措施就是在封閉狀態(tài)下PCRPCR擴(kuò)增PCR、分子雜交和光化學(xué)融為一體，實(shí)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行全過(guò)程的封閉，并進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)和自動(dòng)分析結(jié)果，進(jìn)一步原因。假陰性PCRPCRPCRPCR儀本身的質(zhì)量問(wèn)題能使擴(kuò)增效率下降或造成非特異性擴(kuò)增而出現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性DNAPCR48h48hPCR反應(yīng)的關(guān)鍵PCR循環(huán)條件等，在這些環(huán)Mg2+PCR擴(kuò)增效率Mg2+PCRPCR擴(kuò)增PCR擴(kuò)增效率，PCRPCR擴(kuò)增也不會(huì)成功。PCR技術(shù)的應(yīng)用前景PCR技術(shù)誕生以來(lái)，隨著其深入不斷的發(fā)展與完善，許多與其相關(guān)的新類型及改良的新方法在不斷的涌現(xiàn)，這些派生出的新類型和新方法解決了以往傳統(tǒng)PCRPCR可對(duì)基因分析直接檢測(cè)用于臨床進(jìn)行診斷，但大部分基因突變還是難以直接檢測(cè)。近年來(lái)，分子診斷技術(shù)最大突破就是集擴(kuò)增、檢測(cè)和靶定量于一體的實(shí)時(shí)熒光PCRPCRPCR技術(shù)將有極大的發(fā)展空間和廣泛的應(yīng)用前景，它將對(duì)PCR的應(yīng)用將更加廣泛和深入。相信在不久的將來(lái)，隨著PCR為全人類健康做出更大的貢獻(xiàn)。參考文獻(xiàn)楊道理,王寶成主編. 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