檢驗(yàn)技術(shù)操作程序

zrf支原體培養(yǎng)操作程序

操作程序?qū)m頸、尿道分泌物接種培養(yǎng)基37℃24-48小時培養(yǎng)陰性（黃色）陽性（紅色）報(bào)告結(jié)果報(bào)告結(jié)果實(shí)驗(yàn)原理

10%～20%的非淋菌性尿道炎由解脲支原體引起。解脲支原體含有多種酶，尿素酶活性是其特有的性質(zhì)。培養(yǎng)與鑒定是確定支原體最可靠的方法。在含指示劑系統(tǒng)的肉湯培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)可顯示支原體的代謝活性。人型支原體經(jīng)一系列的反應(yīng)可使精氨酸代謝產(chǎn)生氨，pH值升高，指示劑由黃色變?yōu)榉奂t色。解脲支原體產(chǎn)生尿素酶，后者可將尿素分解成氨，也可以使指示劑由黃色變?yōu)榉奂t色。若有生殖支原體生長，則分解葡萄糖，產(chǎn)生丙酮酸和乳酸，pH值下降，液體顏色由紅變黃，且無明顯混濁。該方法簡便、有效、價格低廉且有特異性。目前已廣泛用于支原體感染的臨床檢測采取標(biāo)本

男性需用無菌細(xì)小棉拭緩慢插入尿道2-4cm處，輕輕捻轉(zhuǎn)取柱狀上皮細(xì)胞標(biāo)本。女性需用陰道窺器擴(kuò)張后先用棉拭拭去宮頸口的分泌物，再用另一棉拭插入宮頸1-2cm處捻轉(zhuǎn)10-30秒，取柱狀上皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作

然后放入培養(yǎng)基中，充分振洗后將棉拭子棄去，旋緊瓶蓋，置37℃孵箱中培養(yǎng)24-48小時。

男性除用尿道拭子外，可取前列腺液、精液或中段尿；女性除用宮頸拭子外，可采用羊水、但不推薦尿液。加樣量均為0.2ml，培養(yǎng)方法同上。結(jié)果判斷

解脲、人型支原體培養(yǎng)24小時后觀察，培養(yǎng)基變紅為陽性，若培養(yǎng)至72小時，培養(yǎng)基仍未變紅，可判為陰性。生殖道支原體培養(yǎng)4～7天觀察，培養(yǎng)基由紅色變成黃色陽性，反之為陰性。注意事項(xiàng)

1、接種標(biāo)本時，三種培養(yǎng)基不能混合使用（即不能用接種了解脲支原體的棉拭子去接種人型支原體或生殖道支原體，反之亦然）。

2、支原體生長時，培養(yǎng)基一般無明顯混濁，如有小顆粒沉淀或粘于管壁，亦屬正常。

3、如為Mh-Uu培養(yǎng)基，24小時變紅者可能為Uu支原體感染，48小時以后變紅者可能為Mh支原體感染。

4、陽性結(jié)果的支原體標(biāo)本可保存在冰箱中。支原體藥敏試驗(yàn)

藥敏抗生素全部采用臨床常規(guī)治療用抗生素，藥敏分別為：

四環(huán)素（TET）螺旋霉素（ACE）紅霉素（ERY）

羅紅霉素（ROX）強(qiáng)力霉素（DOX）可樂必妥（CRA）

泰利必妥（OFL）美滿霉素（MIN）交沙霉素（JOS）

阿奇霉素（AZI）克拉霉素（CLA）司帕沙星（SPA）標(biāo)本采集

男性需用無菌細(xì)小棉拭緩慢插入尿道2-4cm處，輕輕捻轉(zhuǎn)取柱狀上皮細(xì)胞標(biāo)本；女性需用陰道窺器擴(kuò)張后，先用棉拭拭去宮頸口的分泌物，再用另一棉拭插入宮頸1-2cm處捻轉(zhuǎn)10-30秒，取柱狀上皮細(xì)胞。

男性除以上方法取標(biāo)本外，還可取前列腺液、精液或中段尿沉渣（中段尿10ml2000T/min離心10分鐘）做標(biāo)本；女性除以上方法取標(biāo)本外，可取半水做標(biāo)本，但不推薦用尿液做標(biāo)本；加樣量均為0.2ml

試驗(yàn)操作

1、接種前先使培養(yǎng)基在室溫中預(yù)溫,并在管上作好標(biāo)記。

2、擰開培養(yǎng)基瓶蓋，用無菌吸嘴吸取100ul左右培養(yǎng)液加入藥敏反應(yīng)板高濃度（H）的1號孔（即空白對照孔），再將標(biāo)本棉拭在瓶壁和培養(yǎng)基接觸面上涂擠，丟棄棉簽（也可直接將50ul陽性培養(yǎng)液加入培養(yǎng)基中）,蓋上瓶蓋,搖勻。

3、其余各孔內(nèi)均加入100ul左右接種過標(biāo)本的培養(yǎng)液,然后每孔均加入1滴液體石蠟油覆蓋液面,以免培養(yǎng)液蒸發(fā),最后蓋上藥敏反應(yīng)板板蓋。

4、將藥敏反應(yīng)板置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時,觀察結(jié)果。結(jié)果判斷

第一排（高濃度）第一孔為空白對照孔，不變紅為陰性（—），則試驗(yàn)成立。

第二排第二孔為支原體培養(yǎng)孔，變紅為陽性（+），說明有支原體生長。

第二排藥敏板條（低濃度）第一孔為解脲支原體孔，變紅為解脲支原體陽性，且濃度≥104。

第二排藥敏板條第二孔為人型支原體孔，變紅為人型支原體陽性，且濃度≥104，兩孔均變紅為混合感染，濃度均≥104。

第一排藥敏反應(yīng)板3-14孔為高濃度藥敏孔。

第二排藥敏反應(yīng)板3-14孔為低濃度藥敏孔。

高低濃度藥敏孔均不變色（淺色）表示對相應(yīng)的抗生素敏感；低濃度藥敏孔變紅而高濃度藥敏孔不變紅（淺紅），表示對相應(yīng)抗生素中度敏感；高低濃度藥敏孔為變紅，表示對相應(yīng)的抗生素耐藥。

1234567891011121314

空白混合孔

H

L

UUTETERYDOXOFLJOSCLA

MHACEROXCRAMINAZISPA注意事項(xiàng)

1、用陽性培養(yǎng)液接種需早期在顏色稍轉(zhuǎn)紅時接種為佳，因支原體在堿性環(huán)境下易死亡。

2、若混合孔變紅，尿素孔、人型孔均不變色，說明標(biāo)本中支原體濃度<104，屬正常范圍，可報(bào)陰性。

3、解脲支原體24小時報(bào)結(jié)果，人型支原體48小時報(bào)結(jié)果。

沙眼衣原體C-C板操作程序

操作程序

宮頸、尿道分泌物提取液處理標(biāo)本檢測15分鐘后觀察結(jié)果陰性（單線）陽性（雙線）報(bào)告結(jié)果報(bào)告結(jié)果實(shí)驗(yàn)原理

本試驗(yàn)是將衣原體單克隆抗體的帶色乳膠復(fù)合物吸附于濾紙上，將濾紙夾在兩塊塑料板中間，若加入的標(biāo)本為陽性，測標(biāo)本中的抗原與結(jié)合有乳膠的單抗結(jié)合，復(fù)合物因毛細(xì)作用向前擴(kuò)散移動至結(jié)果窗，可被該處含有的未標(biāo)記的鼠抗衣原體單抗所捕捉，在結(jié)果窗B中出現(xiàn)一條紅線，標(biāo)本即為陽性。過剩的未結(jié)合的帶色乳膠標(biāo)記鼠抗衣原體單抗可移動到質(zhì)控C，與該處的兔抗鼠抗體結(jié)合，出現(xiàn)一條紅線，如在結(jié)果窗B中無紅線出現(xiàn)，同時質(zhì)控窗C應(yīng)出現(xiàn)一條紅線，表示檢測結(jié)果陰性，檢測試劑有效

采取標(biāo)本

宮頸標(biāo)本：

1、在取樣前，用棉球除去宮頸外區(qū)的粘膿液，如標(biāo)本中含有大量血液或膿液，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

2、將拭子插入宮頸管內(nèi)，直到大部分拭子看不見，旋轉(zhuǎn)拭子15-30秒鐘，取出拭子時不要碰到陰道壁。

尿道標(biāo)本：

1、將男性拭子插入尿道舟狀窩處（2-4cm），旋轉(zhuǎn)3-5秒鐘后取出。

2、取樣最好在未排晨尿前，或者至少取樣前2小時內(nèi)未排尿。

實(shí)驗(yàn)操作

（1）加18滴（0.9ml）提取液（0.1%疊氮鈉）于過濾試管中；

（2）將標(biāo)本拭子浸入過濾試管中，反復(fù)在試管中旋轉(zhuǎn)拭子10秒鐘，以確保提取液與標(biāo)本充分混合；

（3）把裝有拭子的過濾試管靜放在試管架上室溫下孵育10-15分鐘；

（4）在10-15分鐘孵育過程中，分2-3次反復(fù)旋轉(zhuǎn)拭子使提取液與標(biāo)本充分混合；

（5）孵育10-15分鐘結(jié)束后，蓋上過濾吸頭。將檢測卡從密封袋中取出，放置于水平的臺面上。如從冰箱中取出，使其恢復(fù)至室溫再檢測；滴4滴（150ul）液體于檢測卡的樣品槽(A)中；10-15分鐘即讀出結(jié)果。結(jié)果判斷

（1）陰性結(jié)果：在對照區(qū)（C）有一條紅線，檢測區(qū)（B）無紅線出現(xiàn)。

（2）陽性結(jié)果：對照區(qū)（C）檢測區(qū)（B）均有紅線出現(xiàn)。

（3）無效結(jié)果：對照區(qū)（C）無紅線出現(xiàn)，應(yīng)更換新的檢測卡重新試孔。

陰性結(jié)果陽性結(jié)果A

BCABC注意事項(xiàng)

1、此法僅適用于體外診斷，檢測來源于宮頸管內(nèi)及男性尿道內(nèi)的衣原體抗原。

2、如標(biāo)本中含有大量血液或者膿液，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

3、本檢測結(jié)果如有陰性，而臨床癥狀持續(xù)存在，可以進(jìn)行其他方法來進(jìn)一步明確診斷。梅毒操作程序

梅毒快速血漿反應(yīng)素診斷（RPR）

操作程序靜脈采血

50ul血清+RPR試劑水平旋轉(zhuǎn)8分鐘觀察結(jié)果陰性陽性報(bào)告報(bào)告實(shí)驗(yàn)原理

梅毒患者血清中存在著能與VDRL抗原發(fā)生凝集反應(yīng)的反應(yīng)素，此試劑利用這一原理，將VDRL抗原吸附于活性炭顆粒表面，當(dāng)待測血清中存在反應(yīng)素時，即與其發(fā)生凝集反應(yīng)，出現(xiàn)肉眼可見的黑色凝塊。陽性者，將血清稀釋作定量試驗(yàn)。采取標(biāo)本

無菌采取靜脈血2ml實(shí)驗(yàn)操作

1、分別吸取50微升梅毒陽性對照和陰性對照均勻鋪加在紙卡的兩個圓圈中。

2、將待檢血清50微升用生理鹽水作倍比稀釋（原血清、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32…），均勻鋪加在紙卡的另外的圓中。

3、用盒中的專用針頭、滴管吸取RPR試劑，分別垂直滴加1滴于上述血清中。

4、用RPR旋轉(zhuǎn)儀或多功能振蕩儀水平轉(zhuǎn)動紙卡8分鐘，100轉(zhuǎn)/分鐘，然后3分鐘內(nèi)在光線充足處判斷結(jié)果。

結(jié)果判斷

1、陰性反應(yīng)（—）：可見均勻的抗原顆粒而無凝集物。

2、弱陽性反應(yīng)（+～++）：可見較小的黑色凝集物。

3、陽性反應(yīng)（+++～++++）：可見中等或較大的黑色凝塊，溶液清亮。

注意事項(xiàng)

1、RPR試劑在使用前應(yīng)充分搖勻。

2、血清中加入試劑后充分振蕩使其混勻。

3、定性試驗(yàn)呈弱陽性或陽性者必須做定量試驗(yàn)才能了解患者血清中的抗體滴度，然后對每個稀釋度的血清再進(jìn)行測定并判斷結(jié)果。

4、定性試驗(yàn)呈弱陽性或陽性反應(yīng)者，需結(jié)合臨床進(jìn)行綜合分析判斷，同時再做特異性密螺旋體試驗(yàn)加以確診。因?yàn)榇嗽囼?yàn)是梅毒非特異性反應(yīng)素試驗(yàn)，麻風(fēng)等患者可出現(xiàn)生物學(xué)假陽性反應(yīng)。

5、試劑盒中的專用滴管、針頭只能用來吸取RPR試劑，不能用來吸取血清或作他用。

梅毒螺旋體抗體診斷凝集試驗(yàn)（TPPA）操作程