第二節(jié)毒理學評價一、初步工作1、了解受試物的物理、化學性質、與受試物類似的或有關物質的毒性資料，以及所獲得樣品的代表性如何，要求受試物能代表人體進食的樣品。2、估計人體可能的攝入量。例如每人每日平均攝入量或某些特殊人群的最高攝入量。我國食品安全性毒理學評價程序中對不同受試物進行幾個階段試驗原則規(guī)定為：①凡屬我國創(chuàng)新的物質，特別是其化學結構提示有慢性毒性、遺傳毒性或致癌性可能的，或產量大、使用面廣、攝入機會多的，必須進行全部四個階段的毒性試驗；②凡屬與已知物質（指經(jīng)過安全性評價并允許使用者）的化學結構基本相同的衍生物或類似物，則可進行前三階段試驗，并按試驗結果判斷是否需要進行第四階段試驗；③凡屬已知的化學物質，世界衛(wèi)生組織對其已公布每人每日允許攝入量的，同時能證明我國產品的質量規(guī)格與國外產品一致，則可先進行第一、第二階段試驗。如果產品質量或試驗結果與國外資料一致，一般不要求進行進一步的毒性試驗，否則尚應該進行第三階段試驗。一、初步工作1、了解受試物的物理、化學性質、與受試物類似的或有關物質的毒性資料，以及所獲得樣品的代表性如何，要求受試物能代表人體進食的樣品。2、估計人體可能的攝入量。例如每人每日平均攝入量或某些特殊人群的最高攝入量。二、第一階段：急性毒性試驗急性毒性試驗是指一次給予受試物或在短期內多次給予受試物對機體所產生的毒性反應(中毒或死亡)。1、試驗目的（1）測定LD50，了解受試物的毒性強度、性質和靶器官。（2）為以后的蓄積性試驗和亞慢性毒性試驗的劑量和毒性判定指標的選擇提供依據(jù)。2、試驗要求分別用兩種性別的小鼠和/或大鼠進行。3、試驗項目測定LD50和7d喂養(yǎng)試驗。（1）LD50即半數(shù)致死量，它是指受試動物經(jīng)口一次或在24小時內多次染毒后，能使受試動物中有半數(shù)死亡的劑量，單位為mg/kg。（2）7d毒性試驗7d喂養(yǎng)試驗是以7d向幾組動物每日分別重復給予一定劑量，一般可設三個四個劑量組，在試驗中可得一最小有作用劑量，通過公式可即可估計90d以至二年喂養(yǎng)試驗的最小有作用劑量，再在此劑量上下各設幾個劑量組，就可以進行90d或二年毒性試驗了。4、結果判定（1）如LD50劑量或7d喂養(yǎng)試驗后最小有作用劑量小于人的可能攝入量的10倍者，則放棄該受試物用于食品，不再繼續(xù)其他毒性試驗。（2）如大于10倍者，可進行下一階段的毒理學試驗。（3）凡在10倍左右時，應進行重復試驗，或用另外一種方法驗證。三、遺傳毒性試驗（蓄積毒性試驗、致突變試驗）1、蓄積性試驗試驗目的是了解受試物在體內的蓄積情況。（1）分類：物質蓄積和功能蓄積（2）試驗內容：蓄積系數(shù)法或20天試驗法2、致突變試驗（1）細菌致突變試驗——Ames試驗亦稱鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶試驗法?；驹硎且砸环N致突變微生物與受試化學物質接觸，并以哺乳動物肝微粒體進行受試化學物的代謝活化，如受試物經(jīng)活化代謝后具有致突變性，則可使突變形微生物回復突變而重新成為野生型微生物。一般主要以沙門氏菌的組氨酸缺陷型的菌株，在被檢物質存在下，就又回到組氨酸的非缺陷型的野生菌。（2）小鼠微核試驗和骨髓細胞染色體畸變分析試驗微核是在細胞的有絲分裂后期染色體有規(guī)律的進入子細胞形成細胞核時，仍然留在細胞質中的染色體單體或染色體的斷片或環(huán)，由于比正常的細胞核小很多，所以稱為微核，微核的形成是由于染色全斷裂劑（致突變物）作用的結果。其測定方法比較簡便可靠，所以已經(jīng)成為致突變試驗的一種常用檢測方法。骨髓細胞染色體畸變分析試驗是在體細胞或生殖細胞內，直接觀察在化學致突變物作用下，生物細胞染色體所發(fā)生的結構或數(shù)目的改變。一般多以骨髓細胞或外周細胞代表體細胞，以睪丸精原細胞代表生殖細胞。染色體的數(shù)目和形態(tài)在有絲分裂中期最易觀察，所以染色體畸變分析多在有絲分裂中期細胞進行。（3）睪丸生殖細胞染色體畸變分析試驗和精子畸形試驗睪丸生殖細胞染色體畸變分析其基本原理與方法同骨髓細胞染色體畸變分析。實驗結束后取出動物睪丸，用低滲氯化鉀溶液進行處理后，固定、制片、染色，最后觀察精原細胞染色體畸變情況。精子畸形試驗根據(jù)受試化學物如能影響實驗動物的精子成熟過程，則可觀察到精子頭部或尾部的形態(tài)變化。（4）顯性致死試驗和DNA修復合成試驗DNA修復合成主要是程序外的修復合成，因為在正常情況下，在細胞的有絲分裂周期中，僅S期為DNA合成期，如果受突變物作用受損傷時，可能在其它細胞周期內也進行修復合成，因此稱為程序外DNA修復合成，因此可用程序外DNA修復合成的數(shù)量來判斷致突變性的強弱?？傊z傳毒性試驗（致突變試驗）可根據(jù)受試物的化學結構、理化性質的不同，并兼顧體外和體內試驗以及體細胞和生殖細胞的原則，在以上內容中選擇四項試驗進行判定。3、結果判定（1）如果其中三項試驗均為陽性，則無論積蓄性如何，均表示受試物很可能具有致癌作用，除非受試物具有十分重要的價值，一般應予以放棄，不需要進行其它項目的毒理學試驗。（2）如果其中兩項為陽性，而又有強積蓄性，則應予以放棄，如為弱積蓄性，由有關專家進行評議，根據(jù)受試物的重要性和可能攝入量等，綜合權衡利弊再作決定。（3）如果其中一項試驗為陽性，則再選擇備選遺傳毒性試驗中的兩項其他致突變試驗，如再選的兩項均為陽性，則無論蓄積性如何均放棄，如有一項為陽性，而且為強蓄積性，則應放棄，如果一項為陽性且為弱蓄積性，則可進入第三階段試驗。（4）如果四項試驗均為陰性，則無論蓄積性如何，均可進入第三階段亞慢性毒性試驗。四、第三階段：亞慢性毒性試驗亞慢性毒性是指實驗動物連續(xù)多日接觸較大劑量的外來化合物所出現(xiàn)的中毒效應。能了解試驗動物在多次給予受試物時所引起的毒性作用。1、試驗目的（1）觀察受試物以不同劑量水平較長期喂養(yǎng)，確定動物的毒性作用和靶器官，并初步確定最大無作用劑量。（2）了解受試物對動物繁殖及對仔代的致畸作用。（3）為慢性毒性和致癌試驗的劑量選擇提供依據(jù)。（4）為評價受試物能否應用于食品提供依據(jù)。2、試驗項目（1）90天喂養(yǎng)試驗（2）繁殖試驗（3）代謝試驗根據(jù)這三項試驗中所采用的最敏感指標所得的最大無作用劑量進行評價。3、代謝試驗代謝試驗是一種闡明外來化學物質進入機體后在體內吸收、分布與排泄等生物轉運過程和轉變?yōu)榇x物的生物轉化過程的試驗。其目的是：（1）了解受試物在體內的吸收、分布和排泄速度以及蓄積性；（2）尋找可能的靶器官；（3）為選擇慢性毒性試驗的合適動物種系提供依據(jù)；（4）了解有無毒性代謝產物的形成。4、結果判定方法為：（1）試驗項目中任何一項的最敏感指標的最大無作用劑量（MNL）小于或等于人體可能攝入量的100倍者，表示毒性較強，應放棄受試物用于食品。（2）最大無作用劑量大于100倍而小于300倍者，應進行慢性毒性試驗。（3）最大無作用劑量大于或等于300倍者，則不必進行慢性毒性試驗，可進行安全性評價。五、第四階段：慢性毒性試驗（包括致癌試驗）慢性毒性是指外源化學物長時間少量反復作用于機體后所引起的損害作用。能觀察動物長期攝入受試物所產生的毒性反應，尤其是進行性和不可逆毒性作用及致癌作用，最后確定最大無作用劑量。為受試物能否用于食品的最終評價提供依據(jù)。1、試驗項目：用兩種性別的大鼠和/或小鼠進行兩年期慢性毒性試驗和致癌試驗，并結合在一個動物試驗中。2、結果判斷（1）如果慢性毒性試驗所得的最大無作用劑量小于或等于人的可能攝入量的50倍者，表示毒性較強，應予以放棄；（2）最大無作用劑量大于50倍而小于100倍者，需由有關專家共同評議，經(jīng)安全評價后，決定該受試物能否用于食品；（3）最大無作用劑量大于或等于100倍者，可考慮用于食品中，并制定每日允許攝入量。xh1UEo8!Lvf-SCm5ZJsc(Qzj3XGqa&Nxh1UEo7!Lve-SCl5ZJsc(Qzj3XGqa%Nxh0UEo7!Lve-SCl5ZIsc(Pzj3WGqa%Nxh0UEn7!Lue-SBl5ZIsc(Pzj3WGq9%Nxg0UEn7!Lue-SBl5YIsc*Pzj2WGq9%Nxg0UEn7!Kue-RBl5YIsc*Pzj2WGp9%Nwg0UDn7!Kue-RBl4YIsb*Pzi2WGp9%Nwg0UDn7#Kue)RBl4YIsb*Pzi2WFp9%Mwg0TDn7#Kue)RBk4YIrb*Pyi2WFp9%Mwg0TDn6#Kud)RBk4YIrb*Pyi2VFp9$Mwg+TDn6#Kud)RAk4YHrb*Oyi2VFp9$Mwg+TDm6#Ktd)RAk4YHrb*Oyi1VFp8$Mwf+TDm6#Ktd)QAk4XHrb&Oyi1VFp8$Mwf+TCm6#Jtd)QAk4XHrb&Oyh1VFo8$Mvf+TCm6#Jtd(QAk3XHra&Oyh1VFo8$Mvf+SCm6ZJtd(QAk3XHra&Oxh1VEo8$Lvf+SCm6ZJtc(QAj3XHqa&Oxh1VEo8$Lvf-SCm5ZJtc(QAj3XHqa&Nxh1UEo8!Lvf-SCm5ZJsc(Qzj3XGqa&Nxh1UEo8!Lve-SCl5ZJsc(Qzj3XGqa%Nxh0UEo7!Bl5YIsc*Pzj2WGq9%Nwg0UDn7!Kue-RBl5YIsc*Pzi2WGp9%Nwg0UDn7!Kue)RBl4YIsb*Pzi2WGp9%Mwg0TDn7#Kue)RBl4YIsb*Pyi2WFp9%Mwg0TDn7#Kud)RBk4YIrb*Pyi2WFp9$Mwg+TDn6#Kud)RBk4YIrb*Oyi2VFp9$Mwg+TDn6#Ktd)RAk4YHrb*Oyi2VFp8$Mwf+TDm6#Ktd)RAk4YHrb&Oyi1VFp8$Mwf+TDm6#Jtd)QAk4XHrb&Oyi1VFo8$Mvf+TCm6#Jtd)QAk4XHra&Oyh1VFo8$Mvf+TCm6ZJtd(QAk3XHra&Oyh1VEo8$Lvf+SCm6ZJtd(QAk3XHqa&Oxh1VEo8$Lvf+SCm5ZJtc(QAj3XHqa&Oxe-RBl4YIsb*Pzi2WGp9%Nwg0UDn7#Kue)RBl4YIsb*Pzi2WFp9%Mwg0TDn7#Kue)RBk4YIrb*Pyi2WFp9%Mwg0TDn6#Kud)RBk4YIrb*Pyi2VFp9$Mwg+TDn6#Kud)RAk4YHrb*Oyi2VFp9$Mwg+TDm6#Ktd)RAk4YHrb*Oyi1VFp8$Mwf+TDm6#Ktd)QAk4XHrb&Oyi1VFp8$Mwf+TCm6#Jtd)QAk4XHrb&Oyh1VFo8$Mvf+TCm6#Jtd(QAk3XHra&Oyh1VFo8$Mvf+SCm6ZJtd(QAk3XHra&Oxh1VEo8$Lvf+SCm6ZJtc(QAj3XHqa&Oxh1VEo8$Lvf-SCm5ZJtc(QAj3XHqa&Nxh1UEo8!Lvf-SCm5ZJsc(Qzj3XGqa&Nxh1UEo8!Lve-SCl5ZJsc(Qzj3XGqa%Nxh0UEo7!Lve-SCl5ZIsc(Pzj3WGqa%Nxh0UEo7!Lue-SBl5ZIsc(Pzj3WGq9%Nxg0UEn7!Lu4YIsb*Pzi2WGp9%Mwg0TDn7#Kue)RBl4YIsb*Pyi2WFp9%Mwg0TDn7#Kud)RBk4YIrb*Pyi2WFp9$Mwg+TDn6#Kud)RBk4YIrb*Oyi2VFp9$Mwg+TDn6#Ktd)RAk4YHrb*Oyi2VFp8$Mwf+TDm6#Ktd)RAk4YHrb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