第三節(jié)黃酮類(lèi)化合物的提取與分離一、提取 黃酮苷類(lèi)以及極性稍大的苷元（如羥基黃酮、雙黃酮等），一般可用丙酮、醋酸乙酯、乙醇提取。一些多糖苷類(lèi)可用沸水提取。在提取花青素類(lèi)化合物時(shí)，可加入少量酸（0.1%鹽酸，如果是黃酮苷應(yīng)當(dāng)慎用，避免苷鍵發(fā)生水解）。大多數(shù)黃酮苷元宜用用氯仿、乙醚、醋酸乙酯等中極性溶劑提取，而對(duì)多甲氧基黃酮類(lèi)游離苷元，甚至可用苯等低極性溶劑進(jìn)行提取。粗提物的精制處理方法有：（一）溶劑萃取法：利用黃酮類(lèi)化合物與混入的雜質(zhì)極性不同，選用不同溶劑進(jìn)行地萃取可達(dá)到精制純化目的。例如植物葉子的醇浸液，可用石油醚處理，以便除去葉綠素、胡蘿卜素等脂溶性色素。而某些藥料水溶液則可加入多倍量濃醇，以沉淀除去蛋白質(zhì)、多糖類(lèi)等水溶性雜質(zhì)。有時(shí)溶劑萃取過(guò)程也可以用逆流分配法連續(xù)進(jìn)行。常用的溶劑系統(tǒng)有：水-醋酸乙酯，正丁醇-石油醚等。溶劑萃取過(guò)程在除去雜質(zhì)的同時(shí)，往往還可以收到分離苷和苷元或極性苷元與非極性苷元的效果。（二）堿提取酸沉淀法黃酮苷類(lèi)雖有一定極性，可溶于水，但卻難溶于酸性水，易溶于堿性水，故可用堿性水提取，再于堿水提取液中加入酸，黃酮苷類(lèi)即可沉淀析出。此法簡(jiǎn)便易行，如蘆丁、橙皮苷、黃芩苷的提取都應(yīng)用了這個(gè)方法。槐米中蘆丁的提取槐米（槐樹(shù)SophorajaponicaL.花蕾）加約6倍量水，煮沸，在攪拌下緩緩加入石灰乳至pH8~9，在此pH條件下微沸20~30分鐘，趁熱抽濾，殘?jiān)显偌?倍水煎1次，趁熱抽濾。合并濾液，在60~70℃下，用濃鹽酸調(diào)至pH為5，攪勻，靜置24小時(shí)，抽濾。沉淀物水洗至中性，60℃干燥得蘆丁粗品，于水中重結(jié)晶，70~80℃干燥得蘆丁純品。在用堿酸法進(jìn)行提取純化時(shí)，應(yīng)當(dāng)注意所用堿液濃度不宜過(guò)高，以免在強(qiáng)堿性下，尤其加熱時(shí)會(huì)破壞黃酮母核。在加酸酸化時(shí)，酸性也不宜過(guò)強(qiáng)，以免生成（金羊）鹽，致使析出的黃酮類(lèi)化合物又重新溶解，降低產(chǎn)品收率。當(dāng)藥料中含有大量果膠、粘液等不溶性雜質(zhì)時(shí)，如花、果類(lèi)藥材，宜用石灰乳或石灰水代替其它堿性水溶液進(jìn)行提取，以使上述含羥基的雜質(zhì)生成鈣鹽沉淀，不致溶出。這也有利于黃酮類(lèi)化合物的純化處理。（三）炭粉吸附法主要適于苷類(lèi)的精制工作。通常，在植物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭，攪拌，靜置，直至定性檢查上清液無(wú)黃酮反應(yīng)時(shí)為止。過(guò)濾，收集吸苷炭末，依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/醇溶液進(jìn)行洗脫，各部分洗脫液進(jìn)行定性檢查（或用PPC鑒定）。二、分離較常用的分離方法有：（一）柱層析法分離黃酮類(lèi)化合物常用的吸附劑或載體有硅膠、聚酰胺及纖維素粉等。此外，也有用氧化鋁、氧化鎂及硅藻土等。1.硅膠柱層析：此法應(yīng)用范圍最廣，主要適于分離異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇及高度甲基化（或乙?；┑狞S酮及黃酮醇類(lèi)。少數(shù)情況下，在加水去活化后也可用于分離極性較大的化合物，如多羥基黃酮醇及其苷類(lèi)等。2.聚酰胺柱層析：對(duì)分離黃酮類(lèi)化合物來(lái)說(shuō)，聚酰胺是較為理想的吸附劑。其吸附強(qiáng)度主要取決于黃酮類(lèi)化合物分子中羥基的數(shù)目與位置及溶劑與黃酮類(lèi)化合物或與聚酰胺之間形成氫鍵締合能力的大小。聚酰胺柱層析可用于分離各種類(lèi)型的黃酮類(lèi)化合物，包括苷及苷元、查耳酮與二氫黃酮等。黃酮類(lèi)化合物從聚酰胺柱上洗脫時(shí)有下列規(guī)律：（1）苷元相同，洗脫先后順序一般是：三糖苷雙糖苷單糖苷苷元（2）母核上增加羥基，洗脫速度減緩。（3）不同類(lèi)型黃酮化合物，先后流出順序一般是：異黃酮二氫黃酮醇黃酮黃酮醇（4）分子中芳香核、共軛雙鍵多者則吸附力強(qiáng)，所以查耳酮往往比相應(yīng)的二氫黃酮難于洗脫。3.葡聚糖凝膠(Sephadexgel)柱層析：對(duì)于黃酮類(lèi)化合物的分離，主要用兩種型號(hào)的凝膠：Sephadex-G型及Sephadex-LH-20型。葡聚糖凝膠分離黃酮類(lèi)化合物的機(jī)理是：分離游離黃酮時(shí)，主要靠吸附作用。凝膠對(duì)黃酮類(lèi)化合物的吸附程度取決于游離酚羥基的數(shù)目。但分離黃酮苷時(shí)，則分子篩的屬性起主導(dǎo)作用。在洗脫時(shí)，黃酮苷類(lèi)大體上是按分子量由大到小的順序流出柱體。分離游離黃酮主要是吸附作用，極性小大順序洗脫。分離黃酮苷類(lèi)，主要是分子篩作用，分子大小順序洗脫?？偟南疵擁樞颍禾嵌嗟能仗巧俚能沼坞x苷元（極性小大）葡聚糖凝膠柱層析中常用的洗脫劑有：堿性水溶液（如0.1mol/LNH4OH），含鹽水溶液(0.5mol/LNaCl等)。醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水（不同比例）、t-丁醇-甲醇(3:1)、乙醇等。其它溶劑：如含水丙酮、甲醇-氯仿等。（二）梯度pH萃取法梯度pH萃取法適合于酸性強(qiáng)弱不同的黃酮苷元的分離。根據(jù)黃酮類(lèi)苷元酚羥基數(shù)目及位置不同其酸性強(qiáng)弱也不同的性質(zhì)，可以將混合物溶于有機(jī)溶劑（如乙醚）后，依次用5%NaHCO3、5%Na2CO3、0.2%

NaOH及4%NaOH水溶液萃取，來(lái)達(dá)到分離的目的。

酸性:7，4-二OH溶于5%NaHCO3液)7-或4-OH（5%Na2CO3液）

一般OH（0.2%NaOH）5-OH（4%NaOH液）（三）根據(jù)分子中某些特定官能團(tuán)進(jìn)行分離在黃酮類(lèi)成分的混合物中，具有鄰二酚羥基成分與無(wú)此結(jié)構(gòu)的成分，可用鉛鹽法分離。有鄰二酚羥基的成分可被醋酸鉛沉淀，不具有鄰二酚羥基的成分可被堿式醋酸鉛沉淀，達(dá)到分離的目的。與黃酮類(lèi)成分混存的其它雜質(zhì)，如分子中有羧基（如樹(shù)膠、粘液、果膠、有機(jī)酸、蛋白質(zhì)、氨基酸等）或鄰二酚羥基（如鞣質(zhì)等）時(shí)，也可被醋酸鉛沉淀達(dá)到去雜目的。具黃酮類(lèi)化合物與鉛鹽生成的沉淀，濾集后按常法懸浮在乙醇中，通入H2S進(jìn)行復(fù)分解，濾除硫化鉛沉淀，濾液中可得到黃酮類(lèi)化合物。但初生態(tài)的PbS沉淀具有較高的吸附性，因此現(xiàn)多不主張用H2S脫鉛，而