CST常見問題與回答（最新版本）unllv生物免費查詢皖務1、我該如何儲存我的抗體？多高的溫度會影響抗體的穩(wěn)定性？unllv生物免費查詢皖務答：請將抗體的原始管儲存到-20°C，不要分裝，否則有可能引起抗體的改變和浪費。提供的抗體貯存在包含50%甘油緩沖液中，在推薦的儲存溫度下不會冷凍。這避免了由于反復凍融導致的抗體降解。偶聯(lián)抗體可能儲存在4°C，請參照產(chǎn)品說明書上的建議儲存。2、 如何儲存SDS裂解的磷酸化蛋白樣本？答：如果短期內(nèi)使用（少于3個月），SDS樣本細胞裂解液可以儲存在-201，如果長期儲存，應保存于-80°C?；罨牡鞍讟颖镜慕到庾兓艽螅浣到饴嗜Q于每種蛋白的性質(zhì)和樣本里究竟含有多少活化的蛋白。3、 能用室溫孵育抗體1小時代替4C過夜嗎？答：不建議。CST公司活化特異的抗體用于區(qū)分一或兩個翻譯后修飾的氨基酸殘基。這些修飾包括磷酸化，乙?；兔盖懈?。與識別總蛋白的抗體相比，大多數(shù)針對這些修飾位點的抗體具有較低的親和性。因此，通過4C孵育過夜延長抗原和抗體的反應時間以獲得最好的信噪比是非常關鍵的。4、 當我準備細胞裂解液樣品時，需使用什么緩沖液？答：請檢查每個產(chǎn)品說明書中包含的Westernblot操作步驟中推薦的緩沖液。CST提供以下緩沖液（見下表），或者，如果你想自己配制，CST網(wǎng)站上列出了特別的緩沖液組分。CHAPS緩沖液專為獲得細胞質(zhì)的提取物而設計，適應于Caspase的檢測，但并非關鍵。樣本處理 推薦使用緩沖液全細胞裂解物，使用標準的SDS全細胞裂解物，使用標準的SDS上樣緩沖液#7722或#7723免疫沉淀和/或激酶分析，使用#9803切割的半胱天冬酶和其底物的免疫印跡，使用#9852藍色的上樣緩沖液包裝#7722或紅色的上樣緩沖液包裝#7723細胞裂解緩沖液（10X）#9803CHAPS緩沖液（10X）#98525、CST的抗體是否適用于全組織樣本裂解物？答：CST并未測試所有抗體是否適用于全組織樣本裂解物，但是CST的很多抗體已經(jīng)被其他客戶用于整個組織而且取得巨大成功。優(yōu)寧維微信公眾號：優(yōu)寧維抗體專家/UNIVSUBC6、 如何為磷酸化目標蛋白準備陽性細胞裂解液對照？答：請參考CST網(wǎng)站上該產(chǎn)品的Westernblot圖，使用圖述的細胞系和藥物處理，能夠得到陽性對照蛋白。也可參見：/support/controls.html查閱7、 假如說明書上某個種屬未被列出與CST抗體有交叉反應，是否意味著這個種屬未被檢測過呢？答：可能未被檢測過。CST科學家檢測所有CST抗體在多個物種的交叉反應性，如果可能的話（這個依賴于目標蛋白和實驗系統(tǒng)的可行性）。假如我們沒有獲得某個種屬的交叉反應的陽性結(jié)果，我們就不會列出這個種屬。然而，有可能我們檢測的這個細胞系包含一個低水平的特定蛋白，或者，我們使用的誘導條件對那個特定的細胞系不起作用。如果您需要針對某個種屬交叉反應的更多信息，請隨時聯(lián)系我們的技術支持團隊support@或者優(yōu)寧維公司來獲取幫助。8、 使用CST抗體時，為什么我不能使用我們自己實驗室的免疫印跡操作流程？答：CSPM抗體經(jīng)過優(yōu)化以提供最強的信號，最少的背景，使用CST推薦的免疫印跡操作流程，對于終端客戶的優(yōu)點是節(jié)約時間和材料。9、 如何確保Westernblot結(jié)果的可重復性答：至于為什么看起來較難重復Westernblot結(jié)果，這里有幾種可能性。要發(fā)現(xiàn)這種情況的原因，可考慮以下：9-1）你是如何儲存抗體的？請參考問題1,2?？贵w稀釋后不能重復使用。許多抗體有一個非常低的工作濃度，很可能這個濃度隨著連續(xù)的Westernblot會減少。9-2）你確定你的樣本中包含活化的蛋白？細胞裂解液樣品制備活化蛋白會由于細胞數(shù)量，藥物誘導時間，細胞傳代數(shù)量和儲存條件不同而改變。CST產(chǎn)品在其保質(zhì)期內(nèi)都有最佳表現(xiàn)。請訪問/support/shelflife.html產(chǎn)品保質(zhì)期頁面獲得列表。請注意：不能分裝抗體。10、 如何使用固相抗體來做免疫沉淀？答：要得到最佳的結(jié)果，獲得均勻的微珠懸浮液是重要的。以下步驟可確保同質(zhì)：?將包含微珠懸浮液的管子放入冰桶10分鐘。?倒置管子幾次以獲得50%微珠-緩沖液懸浮液。?假如可能，溫和漩渦管子。?為了迅速吸出產(chǎn)品，切掉吸管端頭，將吸管端頭插入微珠懸浮液使靠近固相抗體微珠混合物。孵育抗體和200歸的細胞裂解物（約1mg/ml）4C過夜，用推薦的抗體稀釋濃度。11、 當有多種抗體可以選擇時，哪一種在我的實驗中表現(xiàn)最優(yōu)？答：通常，CST會針對一個目標蛋白提供多個抗體。選擇在您接下來的實驗中表現(xiàn)最優(yōu)的抗體，可以訪問抗體對照表格或者聯(lián)系CST技術支持support@或優(yōu)寧維公司來獲取幫助，進而選擇最適合您實驗的最優(yōu)抗體。12、 CST如何確?？贵w的質(zhì)量？答：CST科學家努力檢測所有產(chǎn)品的主要應用，例如免疫印跡，免疫沉淀，免疫熒光，免疫組織化學，流式細胞術，和染色質(zhì)免疫沉淀。當一個抗體被推薦用來某個特定的應用，說明這個抗體已經(jīng)通過了嚴格的特異性實驗測試的標準。此外，我們的科學家針對每個產(chǎn)品創(chuàng)建了專門的（優(yōu)化的）免疫染色的方法，為您節(jié)約時間和試劑。我們也常規(guī)檢測我們的抗體在不同物種的應用，包括人類，猴子，小鼠和大鼠。產(chǎn)品的高質(zhì)量是CST最關心的。如果您對某個沒有在產(chǎn)品頁面列出的某個特定的應用感興趣，請聯(lián)系CST技術支持support@，來獲取更多的信息。13、 對于不同的批次，CST如何對質(zhì)量進行控制？答：CST科學家努力達到每批產(chǎn)品的一致性。作為標準，我們在新的批次中檢測以往批次的所有應用。每個批次每個應用推薦的濃度都經(jīng)過優(yōu)化，所以請遵循我們的操作步驟。您可以瀏覽我們的免疫印跡驗證頁面獲取更多知識。14、我能夠訂購一個定制配方的抗體嗎？答：針對客戶（不含載體）的訂單，許多制備在不含BSA或甘油的PBS中的抗體都有庫存。這個配方可以為了偶聯(lián)而更改，能夠連接到熒光素，微珠，或者染料。為了滿足您分析的需要或者您實驗室的需要，我們也很高興向您整批出售。關于價格和可用性的問題，您可以聯(lián)系我們info@或者優(yōu)寧維公司。15、 CST能夠定制我的抗體嗎？答：CST不會開發(fā)定制抗體，但是我們很高興接受您的目標蛋白抗體建議。請發(fā)送您的建議到info@,CST科學家將在短期之內(nèi)聯(lián)系您。16、 為什么我們的抗體能夠在常溫下運輸？答：與CST在環(huán)境方面的巨大努力一致，我們從2003年開始，在常溫下運輸抗體，盡可能的減少包裝材料的浪費。每個CST?抗體都需經(jīng)過穩(wěn)定性檢測，先在常溫和37°C下放置一周，然后進行免疫印跡測試以確?？贵w的性能沒有改變。如果你收到的抗體保存在常溫中，請放心它已經(jīng)通過穩(wěn)定性測試，抗體的性能仍然是最優(yōu)的。抗體接收后，請按照產(chǎn)品說明書中的推薦溫度儲存。17、 這個抗體是否做夠做這些實驗（免疫印跡，免疫沉淀，免疫熒光，免疫組織化學，流式細胞術，染色體免疫沉淀）？答：CST會例行在相關的實驗中測試抗體。這些被推薦的應用，都通過了嚴格的應用特定的驗證標準。我們僅會推薦通過嚴格驗證標準的應用，如果這個實驗數(shù)據(jù)是模棱兩可的，我們是不會推薦這個應用的。關于某個特定的抗體的更多信息或者咨詢哪種抗體將在您的實驗中表現(xiàn)最佳，可以聯(lián)系CST的技術支持團隊support@或優(yōu)寧維共公司。18、 這個抗體能否用來做熒光免疫印跡？答：CS并沒有對抗體是否能夠做熒光免疫印跡進行常規(guī)測試，盡管在這個實驗中許多抗體是發(fā)揮作用的。使用CST的抗體做熒光免疫印跡時，需要使用經(jīng)修改過的免疫印跡的操作流程。我們發(fā)現(xiàn)去除封閉步驟中的Tween?20去污劑（在TBS中只使用5%的脫脂奶粉）和在顯影前干燥膜是針對標準流程做出的僅有的必要改變。詳細信息能夠在熒光Western免疫印跡操作步驟（一抗用BSA孵育）和熒光Western免疫印跡操作步驟（一抗用牛奶孵育）中找至iJ。另夕卜，PrestainedProteinMarker,BroadRange（PremixedFormat）