..TESTMETHODVALIDATIONProtocol分析方法驗(yàn)證方案方案編號(hào)<版本號(hào):>:ProtocolNo.<Version:>:<V:>TMP-07-077分析方法名稱TESTMETHOD:QualificationofDisinfectantEffectivenessandStability消毒劑效力及有效期確認(rèn)方案protocolAPPROVALPAGE方案批準(zhǔn)頁P(yáng)ROTOCOLPREPARATION方案準(zhǔn)備WYETHPHARMACEUTICALCO.,LTD.惠氏制藥SIGNATURE簽名DATE日期QCMicrobialAnalystQCMicrobialAnalystPROTOCOLREVIEW方案復(fù)核QCSeniorAnalystQCManagerQAValidationOfficerPROTOCOLAPPROVAL方案批準(zhǔn)SeniorQOManagerprotocolREVISIONHISTORYPAGE方案修訂歷史記錄頁REVISIONNUMBER修訂次數(shù)VERSION版本號(hào)REVISIONCONTENT修訂內(nèi)容01Original原稿TOC\o"1-2"\h\z1.目的PURPOSE52.范圍SCOPE53.引言INTRODUCTION54.參考資料REFENRENCE65.驗(yàn)證方法TESTMETHOD65.1.所用儀器和物料65.2.測試工作菌種65.3.實(shí)驗(yàn)程序66.接受標(biāo)準(zhǔn)86.1.消毒效力接受標(biāo)準(zhǔn)：86.2.中和效力控制及其接受標(biāo)準(zhǔn)：8目的PURPOSE驗(yàn)證惠氏XX工廠目前使用的幾種消毒劑ProcessLpHse:酸性、ProcessVespheneⅡse:堿性、Ethanol酒精溶液、快活溶液,在不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面等不同材質(zhì)上的消毒效力,同時(shí)驗(yàn)證消毒劑的使用有效期。范圍SCOPE本驗(yàn)證需要驗(yàn)證的消毒劑有：ProcessLpHse:<酸性>、ProcessVespheneⅡse:<堿性>、Ethanol酒精溶液、快活溶液FORWARDdisinfectant四種。表1：各消毒劑使用時(shí)涉及的材質(zhì)消毒劑類型適用對(duì)象所涉及的材質(zhì)ProcessLpHse:酸性酚類消毒劑〔廣譜、中效生產(chǎn)設(shè)備/器具/車間地面、墻壁、天花板不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面ProcessVespheneⅡse:堿性酚類消毒劑〔廣譜、中效車間設(shè)備/器具/操作間地漏不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面Ethanol酒精溶液醇類消毒劑〔中效生產(chǎn)設(shè)備/器具/微生物實(shí)驗(yàn)室不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面快活溶液季銨鹽類消毒劑〔低效車間地面、墻壁、天花板/非控制區(qū)域、車間公用區(qū)不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面引言INTRODUCTION本驗(yàn)證的原理是,在某種材質(zhì)表面接種0.1ml<104-105CFU>的菌種,室溫下自然風(fēng)干后,將消毒劑直接噴在材質(zhì)表面,等消毒劑作用一段時(shí)間后,檢驗(yàn)沒有被殺滅的細(xì)菌數(shù)；根據(jù)細(xì)菌被殺滅的數(shù)量,來判斷消毒劑的殺菌效果。實(shí)際消毒操作時(shí),消毒劑噴到要消毒物體表面后,再通過人為的涂擦等操作使消毒劑與物體表面充分接觸,同時(shí),此操作也會(huì)機(jī)械去除掉一部分微生物。在該驗(yàn)證中,消毒劑是噴到材質(zhì)表面,這種方法要比實(shí)際消毒時(shí)的效果差,因此驗(yàn)證的結(jié)果更能體現(xiàn)實(shí)際的消毒效果。參考資料REFENRENCEDisinfectantEffectivenessStudy〔812-AnalyticalReport-0807-1.0SOPTS-35<V5>驗(yàn)證方法TESTMETHOD所用儀器和物料所用培養(yǎng)皿、移液管、容器均在121度下滅菌30分鐘后使用無菌一次性培養(yǎng)皿,移液管。生物安全柜<BHC-1300ⅡA/B3生物安全柜>工作窗口吸入風(fēng)速為≥0.5m/s滅菌鍋培養(yǎng)箱〔25度和32度各一個(gè)測試工作菌種大腸埃希菌〔CMCC<B>44102菌種斜面金黃色葡萄球菌〔CMCC<B>26003菌種斜面白色念珠菌〔CMCC98001菌種斜面環(huán)境菌種科氏葡萄球菌斜面〔六、九、十月環(huán)境檢測沉降菌平板上連續(xù)檢出科氏葡萄球菌,特選此菌為環(huán)境菌種需驗(yàn)證的消毒劑應(yīng)質(zhì)量合格并在有效期即將結(jié)束時(shí)開始驗(yàn)證試驗(yàn),實(shí)驗(yàn)所用的儀器設(shè)備均在校正合格期限內(nèi)。實(shí)驗(yàn)程序消毒劑的配置：消毒劑按照相關(guān)的程序進(jìn)行稀釋,配置好的消毒劑溶液儲(chǔ)存在實(shí)際操作時(shí)使用的噴壺中,在有效期內(nèi)〔7天每天模擬日常使用方法使用,第8天開始驗(yàn)證試驗(yàn)。消毒劑配置方法及消毒反應(yīng)時(shí)間見表2.材質(zhì)的準(zhǔn)備：所需的材質(zhì)均是在實(shí)際操作中消毒劑所消毒的表面材質(zhì),準(zhǔn)備的材質(zhì)需為無菌材質(zhì),在實(shí)驗(yàn)過程中,每個(gè)實(shí)驗(yàn)組需3塊同種材質(zhì)同時(shí)進(jìn)行。表2.消毒劑配置方法及消毒反應(yīng)時(shí)間消毒劑稀釋比例反應(yīng)時(shí)間菌種ProcessLpHse:酸性1:256<v/v>3,5,10minutes大腸埃希菌金黃色葡萄球菌白色念珠菌科氏葡萄球菌ProcessVespheneⅡse:堿性1:128<v/v>3,5,10minutes大腸埃希菌金黃色葡萄球菌白色念珠菌科氏葡萄球菌Ethanol酒精溶液75%2,3,5minutes大腸埃希菌金黃色葡萄球菌白色念珠菌科氏葡萄球菌快活溶液1:10<v/v>3,5,10minutes大腸埃希菌金黃色葡萄球菌白色念珠菌科氏葡萄球菌菌懸液的制備：取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌及環(huán)境菌種科氏葡萄球菌的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物,接種至營養(yǎng)瓊脂斜面上,在35~37℃培養(yǎng)20~22小時(shí)。再接種上述菌種的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,在35~37℃培養(yǎng)18~24小時(shí),上述營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物用0.9%無菌生理鹽水溶液逐級(jí)10倍稀釋,制成每0.1ml含菌落數(shù)104-105CFU的菌懸液。實(shí)驗(yàn)操作：準(zhǔn)備3塊待測表面材質(zhì)于生物安全柜內(nèi),分別吸取0.1ml<104-105CFU>接種于3塊待測表面材質(zhì)上,讓其在生物安全柜中自然風(fēng)干后待測,將配置好的的消毒裝入噴壺中,均勻地噴灑在材質(zhì)的表面后立即開始計(jì)時(shí),按表2等計(jì)時(shí)多少時(shí)間？結(jié)束后,迅速把該材質(zhì)放入100ml的D/E中和液中,充分振蕩1min后經(jīng)0.45微米的濾膜過濾,用100ml/次的D/E中和液沖洗3次,取濾膜放在D/E中和瓊脂平板上培養(yǎng)。培養(yǎng)條件：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌及環(huán)境菌種科氏葡萄球菌在30-35℃,至少3天,重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)操作3次,完成驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。多少時(shí)間？陰性控制實(shí)驗(yàn)：100ml的D/E中和液經(jīng)0.45-micron的濾膜后,取濾膜放在D/E中和瓊脂平板上培養(yǎng),培養(yǎng)條件：細(xì)菌30-35℃,至少3天,陽性控制實(shí)驗(yàn)：準(zhǔn)備3塊無菌的待測表面材質(zhì)于生物安全柜內(nèi),分別吸取0.1ml<10-100CFU>陽性菌接種于3塊待測表面材質(zhì)上,讓其在生物安全柜中自然風(fēng)干后,將每種帶菌的材質(zhì)放入100ml無菌的緩沖溶液中,充分振蕩1min,經(jīng)0.45微米的濾膜過濾,用100ml/次的D/E中和液沖洗3次,取濾膜放置于D/E中和瓊脂平板上培養(yǎng)。培養(yǎng)條件：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌及環(huán)境菌種科氏葡萄球菌在30-35℃,至少3天。接受標(biāo)準(zhǔn)消毒效力接受標(biāo)準(zhǔn)：計(jì)算LogReduction,評(píng)價(jià)該種消毒劑對(duì)該菌種的殺滅效果,LogReduction=Log<Average#ofOrganismsinControlPlates>-Log<Average#ofOrganismsinTestPlates>接受標(biāo)準(zhǔn)：LogReduction≥3中和效力控制及其接受標(biāo)準(zhǔn)：吸5ml已配制好的消毒劑,經(jīng)0.45微米的濾膜過濾后,用100ml/次中和液沖洗3次,加入1ml菌懸液〔10-100cfu置濾膜上,用100ml/次中和液沖