....第二章 核酸雜交技術(shù)（一）名詞解釋原位雜交核酸分子雜交技術(shù)探針反向點(diǎn)雜交缺口平移標(biāo)記法隨機(jī)引物標(biāo)記法末端標(biāo)記法8．Southernblot10．菌落雜交（二）選擇題【A型題】1．DNA鏈的Tm值主要取決于核酸分子的（ ）AG－CBA－TDA－CE T－G含量2．液相雜交是下列哪一種（ A Southem印跡雜交NorthemDotSlotRPA實(shí)驗(yàn)3．研究得最早的核酸分子雜交種類是（ A 菌落雜交BSouthernCNorthern液相雜交E原位雜交4．Southern雜交通常是指（ ）ADNA和RNA蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)雜交DNA和蛋白質(zhì)雜交5．最容易降解的核酸探針是( A cDNA探針BdsDNACssDNADgDNAE:RNA探針基因芯片技術(shù)的本質(zhì)就是（ ）核酸分子雜交技術(shù)蛋白質(zhì)分子雜交技術(shù)聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)基因重組技術(shù)酶切技術(shù)DNA探針的長(zhǎng)度通常為( A 1000～2000個(gè)堿基B 500～1000C 400～500D 100～400E.<100個(gè)堿基8．寡核苷酸探針的最大的優(yōu)勢(shì)是（ A 雜化分子穩(wěn)定可以區(qū)分僅僅一個(gè)堿基差別的靶序列易標(biāo)記易合成易分解在Southern印跡中常用的核酸變性劑A 甲醛乙醛氫氧化鈉碳酸鈉鹽酸10．鹽酸硝酸纖維素膜最大的優(yōu)點(diǎn)是（ A 脆性大本底低共價(jià)鍵結(jié)合

非共價(jià)鍵結(jié)合高結(jié)合力最常用的DNA探針標(biāo)記方法( A 隨機(jī)引物切口平移3′-末端標(biāo)記D5′-末端標(biāo)記EPCR為了除去探針，重復(fù)使用濾膜，以下哪種情不可以發(fā)生（ ）燥過潤(rùn)過探針在預(yù)雜交與除去探針之間的過程中曾經(jīng)溫) 浴過洗過探針在預(yù)雜交與除去探針之間的過程中曾經(jīng)標(biāo)記過13．5′一末端的DNA探針標(biāo)記主要依靠的酶是( )A 多聚核苷酸激B 末端轉(zhuǎn)移酶CAKPD DNAE DNApol14．血友病是一種（ ）染色體病X先天性代謝缺陷病先天畸形常染色體隠性遺傳病15．預(yù)雜交中最常用的封閉劑( A Denhavdt's溶液5×TBE1×TBE1×TAE1×TPE檢測(cè)目標(biāo)是RNA的技術(shù)是（ ）A Southern雜B Western雜交C Northern雜交D Eastern雜交E 雜交淋巴瘤檢測(cè)靶序列是DNA的技術(shù)是（ ）ASouthern雜交BWestern雜交CNorthern雜交Eastern雜交淋巴瘤DNA分子成為單鏈，這一過程稱（ ）變性復(fù)性復(fù)雜性雜交探針具有堿基互補(bǔ)區(qū)域的單鏈又可以重新結(jié)合形雙鏈，這一過程稱（ ）變性復(fù)性復(fù)雜性雜交探針一種標(biāo)記核酸與另一種核酸單鏈進(jìn)行配對(duì)形異源核酸分子的雙鏈，這一過程稱（ ）變性復(fù)性復(fù)雜性雜交探針點(diǎn)/狹縫雜交可以用于（）快速確定是否存在目的基因不僅可以檢測(cè)DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點(diǎn)分布的信息用于基因定位分析陽性菌落的篩選蛋白水平的檢測(cè)22．放射自顯影時(shí)反射光產(chǎn)生的潛影在低溫下穩(wěn)定，最適溫度是( )A -70℃B -30℃C -20℃D -10℃E 4℃Southern（） 不僅可以檢測(cè)DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點(diǎn)分布的信息C用于基因定位分析D陽性菌落的篩選E蛋白水平的檢測(cè)

TmATm=4(G+C)+2(A+T)BTm=2(G+C)+4(A+T)CTm=6(G+C)+4(A+T)DTm=2(G+C)+6(A+T)ETm=6(G+C)+2(A+T)Northern（）快速確定是否存在目的基因不僅可以檢測(cè)DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點(diǎn)分布的信息D用于基因定位分析E陽性菌落的篩選26熒光原位雜交可以用于（）快速確定是否存在目的基因C用于基因定位分析D陽性菌落的篩選E蛋白水平的檢測(cè)以等位基因特異的寡核苷酸探針雜交法診斷某常染色體隱性遺傳病時(shí)，若能與突變探針及正常（）正常人雜合體患者C純合體患者D攜帶者E不能確定在pH為下述何種范圍時(shí)，Tm值變化不明顯()ApH為3～5BpH為4～5CpH為5～6DpH為5～9EpH為8～11一般來說設(shè)計(jì)的寡核苷酸探針的長(zhǎng)度（ ）A 2-10bpB C 60-100bpD E 200-300bp變性劑可使核酸的Tm值降低，常用的變性是( )甲酰胺A90A90B80C75）D68濃鹽酸稀鹽酸甲醇cDNA（

利用mRNART-PCRcDNAcDNAcDNA由于cDNA探針自身所攜帶的y（T可能產(chǎn)生非特異性雜交的問題cDNA探針合成方便，成為探針的重要來源一般來說核酸雜交的溫度低于其Tm值的多度進(jìn)行( )A B C 5～10℃D E 40～50℃33．對(duì)于寡核苷酸探針，雜交溫度一般般低于Tm值( )A30～40℃B20～30℃CDE 5℃34．一般情況下，不含變性劑甲酰胺時(shí)，雜交反常在多少℃下進(jìn)行( )E 58在含50%甲酰胺時(shí)，雜交反應(yīng)在多少℃進(jìn)行()A70B65C55D42E35雜交時(shí)的溫度與錯(cuò)配率有關(guān)，錯(cuò)配率每增加1%，則Tm值下降( A 0.5℃B1～1.5℃C2～2.5℃D3～3.E4～4.5℃RNA/RNA的雜交體的Tm值一般應(yīng)增加( A 1～5℃B 5～10℃C D E 20～25℃雜交的時(shí)間一般為t的( A l倍B 1～3倍C 3～5D 5～8倍E 10倍以上39．為封閉非特異性雜交位點(diǎn)，可在預(yù)雜交液中入( )ssDNA

1×SSCC 10×SSCD E 50×TAE隨機(jī)引物法標(biāo)記探針常用的AGCT聚體的數(shù)目是( )4681012【X型題】下列哪些是影響DNA復(fù)性的因( A DNA濃度B DNA的分子C 溫度堿基組成DNADNA探針的優(yōu)點(diǎn)有（ ）制備方法簡(jiǎn)單DNADNA擇克隆在質(zhì)粒載體中，可以無限繁殖，取之不盡E 單鏈，不存在競(jìng)爭(zhēng)性的自身復(fù)性43．以下哪些方法可以用于探針的全程標(biāo)記（ A DNAB?降速度增加B DNAC浮力下降C 隨機(jī)引物標(biāo)記法D紫外光吸收增加D 末端標(biāo)記E紫外光吸收減少尾端標(biāo)記44．關(guān)于DNA變性的描述正確的( A 二級(jí)結(jié)構(gòu)破一級(jí)結(jié)構(gòu)破壞黏度降低生物活性喪失浮力密度增加45．以下哪些因素可以使DNA變性（ A 增加溶液的濃度加熱pH有機(jī)溶劑冷藏46．預(yù)雜交中，下列能起封閉作用的( A ssDNABSA小牛胸腺D 脫脂奶粉E DTT變性的DNA會(huì)發(fā)生哪些理化性質(zhì)的變（ ）粘度下降

下列物質(zhì)適于非放射性探針標(biāo)記的(A AKPACP生物素地高辛熒光素49．關(guān)于人工合成的寡核苷酸探針，下列描述正的是( )特異性高可依賴氨基酸序列推測(cè)其序列分子量小可用于相似基因順序差異性分析可用末端轉(zhuǎn)移酶進(jìn)行5′端標(biāo)記50．通過哪些措施可以提高雜交反應(yīng)的速度（ A 采用大片段探針少量的反應(yīng)體積高反應(yīng)溫度不斷的振搖大量的反應(yīng)體積51．關(guān)于切口平移法下述正確的(A 可標(biāo)記線性DNADNADNA可標(biāo)記存在缺口的雙鏈E 可標(biāo)記隨機(jī)引物2以下哪些方法可以用于從凝膠上轉(zhuǎn)移（ ）A毛細(xì)轉(zhuǎn)移B真空轉(zhuǎn)移C負(fù)壓轉(zhuǎn)移D電泳轉(zhuǎn)移E 冷凍轉(zhuǎn)移53．關(guān)于隨機(jī)引物法標(biāo)記探針下述正確的(A 可標(biāo)記單鏈DNAB 可標(biāo)記雙鏈RNAC 可標(biāo)記單鏈108cpm／μgDNASephadexG-50A雜交標(biāo)記法B 切口平移標(biāo)記C 5’-末端的標(biāo)記D 3’-末端的標(biāo)記E 化學(xué)法延長(zhǎng)標(biāo)55．整個(gè)雜交反應(yīng)主要以下哪些步驟組成（ ）預(yù)雜交雜交

洗脫固定轉(zhuǎn)移56．放射自顯影可以被分為（ A 直接放射自顯影氧化顯影封閉顯影間接放射自顯影固定顯影57．關(guān)于電轉(zhuǎn)移下列描述正確的( A 快速、高效需要特殊設(shè)備緩沖液用TAE或D 可產(chǎn)生高溫E常用NC膜作為支持介質(zhì)58．預(yù)雜交的主要目的是（ A 平衡濾膜B封閉非特異性雜交的位置CD便于從濾膜上除去探針E 清除用于雜交反應(yīng)檢測(cè)的顯色物質(zhì)關(guān)于非放射性探針標(biāo)記下列描述正確的( A 對(duì)人體危害小需要特殊設(shè)備可長(zhǎng)時(shí)間使用靈敏度不如放射性探針重新雜交新探比較容易對(duì)于改變DNA片段長(zhǎng)度的突變，可以由于缺失或插入產(chǎn)生，或由于限制性酶切位點(diǎn)改變而導(dǎo)致（APCRRAPDSoutherm印跡雜D Northern印跡雜交E 以上都不是重組DNADNA（）菌落印跡雜交NorthernWestern原位雜交E斑點(diǎn)雜交RNAA可用于隨機(jī)引物標(biāo)記特異性高靈敏度高可用非同位素標(biāo)記法標(biāo)記不易降解

下列哪些可以作為核酸探針使用（ ）A B 單鏈DNAC 寡核苷酸D mRNAE 雙鏈RNA64．關(guān)于核酸探針的描述下列正確的(A 可以是DNARNA可用放射性標(biāo)記可用非放射性標(biāo)記必須是單鏈核酸（三）問答題1幾類？2．簡(jiǎn)述反義核酸技術(shù)的基本原理及其應(yīng)用范圍3．試述Northernblot雜交的操作步驟？4．什么是肽核酸？并簡(jiǎn)述其應(yīng)用？5面的應(yīng)用。6．請(qǐng)敘述雜交探針標(biāo)記方法的種類。7．簡(jiǎn)述直接放射自顯影的原理。（一） 名詞解釋

參考答案

coliDNA聚合酶I的5’3’外切酶活性和5’3’聚合酶活性，使DNA鏈上的核苷酸不斷被切除，而4．反向點(diǎn)雜交：是將多種探針固定在同一膜上，同時(shí)參與檢測(cè)的樣品DNA又互不干擾，故能一次性篩查出多種不同的序列，而不是像傳統(tǒng)的雜交法，一次僅能檢測(cè)一個(gè)未知序列。1．原位雜交：是首先應(yīng)用核酸探針與組織或細(xì)胞中的核酸按堿基互補(bǔ)配對(duì)原則進(jìn)行特異性結(jié)合形交檢測(cè)靶序列的一類技術(shù)稱核酸分子雜交技術(shù)。3．探針：是一段單鏈或雙鏈核苷酸，用放射性核4．反向點(diǎn)雜交：是將多種探針固定在同一膜上，同時(shí)參與檢測(cè)的樣品DNA又互不干擾，故能一次性篩查出多種不同的序列，而不是像傳統(tǒng)的雜交法，一次僅能檢測(cè)一個(gè)未知序列。5．缺口平移標(biāo)記法：該法是利用低濃度DNaseIDNAE.

帶放射性核素標(biāo)記的dNTP不斷地被填入缺口位置，從而形成兩條鏈被均勻標(biāo)記的高放射活性的探針。6．隨機(jī)引物標(biāo)記法：隨機(jī)引物是各種可能序列的DNADNaseIDNA模板結(jié)合。首先使雙鏈DNA分子變性成為單鏈，然后退火使隨機(jī)引物結(jié)合于兩條單鏈模板上，當(dāng)反應(yīng)液中存在的4種dNTP中有一種帶放射性核素標(biāo)記時(shí)，在DNA聚合酶催化下合成新的帶標(biāo)記的DNA鏈。反應(yīng)結(jié)束后經(jīng)純化即可得到標(biāo)記的DNA探針。7．末端標(biāo)記法：寡核苷酸探針由于較其他類型的探針短，需要采用末端標(biāo)記法。該法需要DNA分子的5’端本身即為羥基。其原理是利用多核苷酸激酶將[-ATP分子上7位磷酸基轉(zhuǎn)移至寡核苷酸鏈的5’末3’端進(jìn)行。blotDNADNAPCR針與待測(cè)樣本的DNA進(jìn)行原位雜交，在熒光顯微36．B37．E38．B39．A40.B鏡下對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行辨別和計(jì)數(shù)，從而對(duì)染色體或基因異常的細(xì)胞、組織樣本進(jìn)行檢測(cè)和診斷，為各【X41．ABCD42．ACD43．BC44．ACDE45．種基因相關(guān)疾病的分型、預(yù)前和預(yù)后提供準(zhǔn)確的依47．ABD48．ACDE49．ABCD50．BCD針與待測(cè)樣本的DNA進(jìn)行原位雜交，在熒光顯微36．B37．E38．B39．A40.B鏡下對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行辨別和計(jì)數(shù)，從而對(duì)染色體或基因異常的細(xì)胞、組織樣本進(jìn)行檢測(cè)和診斷，為各【X41．ABCD42．ACD43．BC44．ACDE45．種基因相關(guān)疾病的分型、預(yù)前和預(yù)后提供準(zhǔn)確的依47．ABD48．ACDE49．ABCD50．BCD51．據(jù)。53．ABCD54．BCD55．ABC56．AD57．10．菌落雜交：用于重組細(xì)菌克隆篩選的固相雜交，59．ABCD60．AC61．ADE62．ABCD63．稱菌落雜交，主要步驟包括：①菌落平板培養(yǎng)；②濾膜滅菌后放到細(xì)菌平板上，是菌落粘附到經(jīng)適當(dāng)（三）問答題

X板相比較，就可以確定陽性菌落。（二）選擇題【A型題】1A 2E D 4B 5E 6A31．E 32．A 33．E 34．D 35．DDNAP

1．根據(jù)哪三種不同的分類標(biāo)準(zhǔn)可以將雜交分為哪幾類？①根據(jù)雜交核酸分子的種類，可以分為DNA與DNA雜交，DNA與RNA雜交，RNA與RNA雜交；②根據(jù)雜交探針標(biāo)記的不同，可以分為同素雜交和非同位素雜交；③根據(jù)雜交介質(zhì)的不同可以分為液相雜交、固相雜交和原位雜交；其中相雜交又可以分為菌落雜交、 Southern雜交、Northern雜交、點(diǎn)雜交和狹縫雜交。2．簡(jiǎn)述反義核酸技術(shù)的基本原理及其應(yīng)用范圍反義核酸技術(shù)是近幾年發(fā)展起來的一項(xiàng)新的RNADNA，從而影響RNADNA技術(shù)及核酶技術(shù)。Northernblot①RNA的變性瓊脂糖電泳；②將硝酸纖維膜放在含有RNA電泳條帶的凝膠上；③轉(zhuǎn)印盤的轉(zhuǎn)移緩沖液將逐漸為膠和膜上覆蓋的吸水紙吸收，從而利用④毛細(xì)作用將膠中的變性RNA分轉(zhuǎn)移到硝酸纖維薄膜上；⑤轉(zhuǎn)印完成后，使 RNA⑦經(jīng)放射自顯影或其他檢測(cè)技術(shù)顯示出雜交區(qū)帶。

什么是肽核酸？并簡(jiǎn)述其應(yīng)用？DNA202-氨基乙基苷氨酸鍵取代了DNA中的戊糖磷DNAPNADNA或RNA序列，形成穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu)。由于PNADNARNADNARNA的雜交能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于DNA、DNA或DNA、RNA雜交，表現(xiàn)在很高的雜交穩(wěn)定性、優(yōu)良的特異性，而且不被蛋白酶和核酸酶水解等方面。鑒于上述諸義核酸的研究和應(yīng)用。特別是PNA可取代核酸用于基因芯片的制備，被認(rèn)為是基因芯片的升級(jí)產(chǎn)品。PNA還可用于定量PCR分析。隨著對(duì)PNAA為廣闊的應(yīng)用前景。5．請(qǐng)舉例說明雜交技術(shù)在臨床檢驗(yàn)科基因診斷方面的應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)科，雜交技術(shù)最常用于基因診斷的例子是鐮狀細(xì)胞