HPLC法分析不同工藝干燥的玄參中梓醇的含量顏春潮梁晨洪偉聶詩明(湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北武漢430065)［摘要］目的：探討干燥工藝對玄參質(zhì)量的影響，分析不同工藝干燥的玄參中梓醇的含量。方法：將鮮玄參自然晾曬干燥、烘箱干燥和微波真空干燥，采用高效液相色譜法，分析不同工藝干燥玄參中梓醇的含量，色譜法條件為KromasilC-18色譜柱(250mmX4.6mm,5pm),流動相：乙腈-0.03%磷酸溶液梯度洗脫。檢測波長：206nm，柱溫：25°C,流速：1.0mL?min-i。結(jié)果:梓醇在0.812yg~10.150卩g范圍，線性良好，有較好的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和回收率；自然曬干、烘干和微波真空干燥的玄參藥材梓醇含量分別為0.68%、0.54%、2.79%。結(jié)論：該含量測定法專屬性好、準(zhǔn)確、穩(wěn)定可靠，微波真空用于中藥玄參的干燥，梓醇等有效成分有較高的含量，且工藝簡單、干燥時間短。［關(guān)鍵詞］玄參干燥工藝梓醇HPLCAbstractObjective:ToinvestigatethenewtechnologyofapplyingtoRadixscrophulariadrying.Usingnaturaldrying,ovendryingandmicrowavevacuumdryingtodryfreshroots,studyingthecontentofCatalpolindifferentdryingtechnologiesbycomparingexperiment,whichisprovidingthebasisforthequalitycontrolofRadixscrohularia.Method:TakeHPLCtomeasurethecontentofCatalpol.Chromatographicconditions:thecolumn:C18analyticalcolumn(250mmx4.6mm，5pm),mobilephase:gradientdilutedwithacetonitrile-0.03%phosphate,detectionwavelength:206nm,columntemperature:25C,flowrate:1.0mL?min-1.Results:thecontentofCatalpolwhichisdriedbymicrowavevacuumdryingismuchhigherthandriedbynaturaldryingandovendrying.Conclusions:Radixscrophulariadriedbymicrowavevacuumdryingtechnologycannotonlyshortenthedryingtime,butalsobeneficialforreservationoftheactiveingredients.Keywords：Radixscrophularia；microwavevacuumdrying；Catalpol；HPLC玄參為玄參科植物玄參ScrophuLarianingpoenSiemsl.的干燥根。冬季莖葉枯萎時采挖，除去根莖、幼芽、須根及泥沙，曬或烘至半于，堆放3?6天，反復(fù)數(shù)次至于燥［1］。主產(chǎn)于浙江、湖北、江蘇、江西等省。玄參為常用中藥，具有涼血滋陰，瀉火解毒的功效，臨床上用于熱病傷陰，舌絳煩渴，溫毒發(fā)斑，津傷便秘，骨蒸勞嗽，目赤，咽痛，瘰疬，白喉，臃腫瘡毒［1］。玄參主要含環(huán)烯醚萜類、苯丙素苷類，尚含植物甾醇、有機酸類、黃酮類、三萜皂苷、揮發(fā)油、糖類、生物堿及微量的單萜和二萜成分⑵。梓醇為其重要成分之一，【基金項目】國家中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(編號：201007012)【作者簡介】顏春潮【通訊作者】聶詩明，男，教授，研究方向中藥制劑技術(shù)，E-mail:163nsm@163.com具有抗腦缺血損傷、抗老年性癡呆、降血糖、抗癌、抗肝炎病毒、解痙、抑制毛細(xì)血管通透性等活性⑶。有關(guān)文獻(xiàn)報道，隨著干燥時間延長，由于氧化作用，玄參梓醇的含量明顯減少⑷。本文建立了玄參中梓醇的含量測定方法(HPLC法)，對鮮玄參用微波真空干燥、自然曬干和烘干法進行干燥，分析不同的干燥玄參梓醇的含量，探討干燥方法對玄參內(nèi)在質(zhì)量的影響，為提高玄參藥材質(zhì)量提供一定的理論依據(jù)。儀器與材料DionexP680型高效液相色譜儀，KromasilC-18色譜柱(250mmX4.6mmX5pm)；JC202-1SA型數(shù)顯恒溫干燥箱；CNWB-ZZK微波真空干燥設(shè)備(廣州萬程微波設(shè)備有限公司);BS110S十萬分之一分析天平(德國Sartorius)；鮮玄參采自湖北恩施建始GAP基地,2010年11月采挖，除去根莖、子芽、須根，洗去泥沙，瀝干表面的水分，備用。梓醇對照品購于中國藥品生物制品檢定所，批號：0808-9803)；乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純；水為重蒸餾水。方法與結(jié)果2.1玄參的干燥2.1.1烘干法：將鮮玄參晾曬1至2天，置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中，于60°C烘至干燥。2.1.2晾曬干燥：取鮮玄參，白天晾曬，晚上堆積發(fā)汗，晾曬至干燥。2.1.3微波真空干燥：取鮮玄參，置于微波真空干燥器中，于60C，真實度為-0.090Mp?-0.100Mp下干燥。2.2玄參中梓醇的測定2.2.1色譜條件色譜柱：KromasilC-18色譜柱(250mmX4.6mmX5pm)；流動相：乙腈(A)-0.03%磷酸溶液(B),按表1進行線性梯度洗脫。檢測波長206nm,柱溫25C，進樣量為20mL，流速l.OmL?min-1對照品、樣品HPLC色譜見圖1。供試品在梓醇對照峰位置有較好的分離。表1流動相線性比例時間.‘iniii流動相A(%)流動相B(%)時間;min流動相A(%)流動相B(%)*103-^1097-^9025--3050-^8050-^2010--2010-^3390-^6730-8020-2533->5067-^5035--3780-^320-^972.2.2溶液的制備

對照品溶液的制備：精密稱取減壓干燥至恒重的梓醇對照品10.15mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇定容，作儲備液備用。供試品溶液的制備：分別對微波真空干燥玄參、晾曬干燥玄參、烘干玄參照中國藥典一部附錄水分測定法，測定水分，并計算樣品含水量，精密稱取相當(dāng)干燥品約0.5g的藥材（粉或薄片），置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，靜置1h,加熱回流30min,補足溶劑，即得，臨用前過0.22pm濾膜。1-4.898Amin1-0.01.3 2.5 3.85.06.3min1-0.01.3 2.5 3.85.06.3||||||||||]????]????]????]????]00 13 25A?梓醇對照品亍電.烘箱干燥玄參 75C.自然曬干玄參 D.微波真空干燥玄參圖1?梓醇對照品及三種工藝干燥玄參的梓醇HPLC圖譜2.2.3線性關(guān)系考察：精密吸取梓醇對照品儲備液，配制濃度為0.0406mg?mL-10.1015mgmL-i、0.2030mg?mL-i、0.2538mg?mL-i、0.5075mg?mL-i,分別吸取20pL,注入液相色譜儀，以進樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y）,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=1.6538X+0.8678,r=0.9997（n=5）,表明梓醇在0.812卩g?10.150卩g,進樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.2.4精密度試驗：取“2.2.1”項下的對照品儲備液，精密吸取配制成濃度為0.2030mgmL-i,按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，測定峰面積。結(jié)果峰面積的RSD為1.62%，表明儀器精密度良好。2.2.5穩(wěn)定性試驗： 精密吸取同一批玄參供試品溶液，分別于1、3、6、8、10、24h，按“2.1”項下色譜條件進樣，峰面積RSD為0.32%,表明供試液至少在24h內(nèi)很穩(wěn)定。2.2.6重復(fù)性實驗：取同一批樣品，按“2.2.2”項下方法，平行制備供試液6份，按“2.1”項下色譜條件測定，按“2.1”項下色譜條件，測定梓醇的含量，RSD為3.69%。2.2.7加樣回收試驗：稱取已知含量5.360mg?g-i烘箱干燥玄參樣品6份，每份0.5g，精密稱定，置50mL的容量瓶中，每份精密加入梓醇對照品溶液，按'2.2.2”項下供試品溶液制備方法制備，并按“221”色譜條件測定并計算回收率。結(jié)果平均回收率為93.57%,RSD為2.65%。2.3不同工藝干燥玄參的梓醇含量按“2.2.2”項下方法制備供試液，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積，計算梓醇含量，結(jié)果見表1。自然曬干、烘箱干燥和微波真空干燥玄參的梓醇含量分別為0.68%、0.54%、2.79%。表1不同工藝干燥玄參的梓醇含量玄參樣品梓醇/%自然曬干玄參0.68烘箱干燥玄參0.54微波真空干燥玄參2.793.結(jié)論與討論3.1本實驗測定玄參中梓醇含量采用的HPLC法，方法專屬性好、準(zhǔn)確、穩(wěn)定可靠，可用于玄參中梓醇的含量測定。3.2測定結(jié)果表明，三種不同方法干燥的玄參藥材，梓醇的含量以微波真空干燥最高，晾曬干燥次之，烘箱干燥含量最低。3.3由圖1所示，玄參中梓醇的出峰時間在5min左右，微波真空干燥玄參與烘箱干燥、晾曬干燥玄參的圖譜比較，在5.8min處多出一色譜峰。王宏潔等⑸對梓醇成分進行的實驗，梓醇在酸、堿條件下極不穩(wěn)定，室溫放置30分鐘后測量，含量降低了50%以上，放置3小時之后均未檢測到。100°C加熱75分鐘，全部變成黑色沉淀物。有文獻(xiàn)對玄參中環(huán)烯醚萜苷類成分含量進行研究，結(jié)果表明，氧氣對梓醇的成分影響顯著，易使之發(fā)生氧化反應(yīng)而降低含量，或產(chǎn)生其他不明物質(zhì)[2]。本實驗結(jié)果表明，微波真空干燥玄參的梓醇含量為2.79%,顯著高于自然曬干和烘干的玄參。若以該活性成分為評價指標(biāo)，則微波真空干燥更能保證玄參的質(zhì)量。參考文獻(xiàn)：中國藥典?一部[S]?中國醫(yī)藥科技出版社2010:108胡瑛瑛，黃真?玄參的化學(xué)成分及藥理作用研究進展 .[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2008,32(3):268-270?；埒P，萬東，張芬?地黃活性成分梓醇的藥理研究進展[OL].中國科技論文在