地中海貧血基因檢測的臨床應用演示文稿第一頁，共四十一頁。優(yōu)選地中海貧血基因檢測的臨床應用第二頁，共四十一頁。一、地中海貧血3第三頁，共四十一頁。

全球有3.5億人為地中海貧血基因攜帶者（占總人口的2%）中國南方高發(fā)地區(qū)人群攜帶率最高可達到24%4地中海貧血的地域分布α-地貧分布β-地貧分布第四頁，共四十一頁。中國南方地貧基因攜帶率

地區(qū)攜帶率(%)

地貧β地貧合計廣東

8.532.5411.07廣西

14.956.7821.73四川

1.922.184.1臺灣

4.201.105.3香港

5.023.418.43Xu,etal.JClinPathol2004,57:517-22.

Cai,etal.ChiJEpidemiol

2002,23:281-5.

在我國，地中海貧血主要在南方廣東、廣西、海南、四川、重慶等省市發(fā)病率較高，以廣西、廣東最為嚴重。5第五頁，共四十一頁。遺傳性血紅蛋白病三大類?地中海貧血(地貧)（Thalassemias

）常見為-地貧

和-地貧?異常血紅蛋白病珠蛋白結構異常，絕大部分沒有或有輕度臨床診斷?遺傳性持續(xù)性胎兒血紅蛋白珠蛋白的合成不隨著胎兒的發(fā)育而發(fā)生改變，胎兒血紅蛋白持續(xù)表達。第六頁，共四十一頁。地中海貧血定義及分類地中海貧血（Thalassemia）簡稱地貧（Thal），是由于血紅蛋白的珠蛋白肽鏈基因突變或缺失，使某種珠蛋白肽鏈合成障礙而致的一種遺傳性慢性溶血性貧血。血紅蛋白分子是由珠蛋白+血紅素組成，珠蛋白由兩對（4條）肽鏈構成。第七頁，共四十一頁。根據(jù)珠蛋白肽鏈基因（簡稱α基因或β基因）缺失、缺陷或基因突變和珠蛋白肽鏈合成障礙的不同，可將地貧分為α型、β型、δβ型和δ型四種，其中以α型和β型地貧較為常見。地中海貧血定義及分類第八頁，共四十一頁。人類血紅蛋白的合成和演變胚胎期胎兒期成人gower1-ζ2ε2gower2-α2ε2

Portland-ζ2γ2HbF-α2γ2HbA-α2β2HbA-α2β2HbA2-α2δ2HbF-α2γ2第九頁，共四十一頁。地貧血紅蛋白的組成正常成人血紅蛋白（Hb）有三種：HbA(α2β2)(

2.5—3.5%)、HbA2(α2δ2)(96.5-97.5%)、HbF(α2γ2)(0-1.0%)。第十頁，共四十一頁。α地中海貧血及基因型a2a1a2a1a2a2a1a2a1a2a1a2a1a2a1a2a1血紅蛋白正常輕型：2個α基因缺失或突變中間型（HbH疾?。?個α基因缺失或突變HbBart‘s：3個α基因缺失或突變靜止型：1個α缺失或突變第十一頁，共四十一頁。α地中海貧血的臨床特征臨床特點靜止型（α地貧2）輕型或標準型（α地貧1）中間型（HbH病/CS型HbH?。┲匦虷bBart’s胎兒水腫綜合征）發(fā)病年齡＜3個月兒童，成人兒童，成人胎兒貧血程度無無或輕度中度～重度重度黃疸無無輕度～中度無或輕度肝脾腫大無無或輕度輕度～中度重度血片RBC：形態(tài)異常正常輕度中度～重度重度血紅蛋白電泳正常正常HbH帶或伴HbBart’sHbConstantSpring大量HbBart’s伴HbPortland少量HbHHbF正常正常正?；蜉p度減少無HbH包涵體無無或可有強陽性陽性α/β1∶10.7～0.950.3～0.6基因診斷缺失1個或突變αα/α-，ααT/αα缺失2個或突變αα/--或αα/αT-缺失3個或突變α-/--，ααT/--缺失4個--/--第十二頁，共四十一頁。α-地貧血紅蛋白比較表型HbAHbBart’sHbH正常人97-98%00靜止型攜帶者96-98%0-2%(Atbirth)0輕型地貧癥狀85-95%2-8%(Atbirth)<2%HbH疾病下降<10%(Atbirth)5-40%HbBart‘s070-80%(with20%HbPortland)0-20%第十三頁，共四十一頁。β地中海貧血及基因型βGeneβGeneβGeneβGeneβGeneβGene純合子:兩個基因正常雜合子:一個正常，另一個不正常純合子:兩個基因都不正常XXX第十四頁，共四十一頁。β地中海貧血的基因型和臨床類型基因型遺傳型分子遺傳基礎臨床類型臨床特點Hb電泳β0/β0純合子無β肽鏈合成重型重度貧血HbF99.6%β+/β+純合子有少量β肽鏈合成重型或中間型取決于β基因缺失程度和α基因代償和度HbF、HbA2β0/β+雙重雜合子等位基因均有病變，β肽鏈合成10%重型或中間型一般重于β+/β+純合子HbF、HbA2β0/β雜合子點突變，病變基因不成β肽鏈輕型無癥狀，偶然發(fā)現(xiàn)HbA2、HbFβ+/β雜合子點突變，仍可做成β肽鏈輕型無癥狀，偶然發(fā)現(xiàn)HbA2、HbFβ+/βE雙重雜合子β肽鏈合成減少，βE肽鏈合成重型中重度貧血HbE、HbFβ+/βS雙重雜合子β肽鏈合成減少，βS肽鏈合成重型中重度貧血HbE、HbF第十五頁，共四十一頁。表現(xiàn)型HbAHbA2HbF正常正常正常正常靜止型攜帶者正常正常正常βTHAL輕型降低正?；蛟黾诱；蛟黾应耇HAL中間型降低正?；蛟黾釉黾应耇HAL重型降低通常增加增加β地中海貧血血紅蛋白組成第十六頁，共四十一頁。地貧的危害輕度地貧患者無特別不良反應中、重度地貧患者有貧血癥狀，如渾身無力、

肝脾腫大等，隨著年齡增長會越來越嚴重。重型α地貧患兒在出生24－48小時之內死亡，而且產婦因胎兒水腫、大胎盤，極易導致死產。

重型β地貧以及部分中間型α地貧患者在出生后半年左右出現(xiàn)進行性貧血，只能靠輸血維持生命，多在童年夭折。17第十七頁，共四十一頁。地貧患者的困境4000元：重型地貧患兒平均每月需4000元的治療費用以維持生命。成年人每月的治療費用接近萬元，每年治療費用至少10萬元，每例重癥地貧患兒出生給社會和家庭帶來的經濟負擔高達100-300萬元。20歲：重型β地貧患兒需要終生輸血治療，平均存活年齡僅10歲左右，得不有效治療的重型地貧患兒很難活到20歲。造血干細胞：根治重型地貧患兒的唯一方法移植造血干細胞。費用超過40萬，且有90%的患者配對不成功。18第十八頁，共四十一頁。地貧預防手段19地貧的病因決定了它難治卻可防19第十九頁，共四十一頁。社會關注-世界地貧日2013年5月8日第20個“世界地貧日”中國宣傳主題：地貧防控從婚前孕前開始20第二十頁，共四十一頁。地貧遺傳模式若夫婦二人是同一種地貧基因的攜帶者，那么他們每次懷孕都有1/4的概率懷有重度地貧患兒的可能。若夫婦二人確診一方為地貧基因的攜帶者，而另一方完全正常，則每次懷孕，孩子有1/2幾率是地貧基因攜帶者1/2完全正常。21第二十一頁，共四十一頁。篩查對象地中海貧血患者-病因診斷孕前夫妻雙方-明確生育地中海貧血兒風險高危人群-已經生育地中海貧血兒的夫妻雙方新生兒篩查-盡早診斷、盡早治療孕期夫妻雙方-防止生育地中海貧血兒22第二十二頁，共四十一頁。正常人群也需要進行地貧基因檢測！

全民注重優(yōu)生優(yōu)育；

人口流動性大，地貧患者分散性高；

正常人群中地貧基因攜帶者約占2%；23第二十三頁，共四十一頁。病因探究找到方法地中海貧血α點突變/缺失β地中海貧血基因輕型β－地中海貧血、中間型β－地中海貧血、重型－β海貧血遺傳性胎兒血紅蛋白持續(xù)癥α地中海貧血基因靜止型、標準型、HbH病、Bart’s胎兒水腫綜合征β點突變24第二十四頁，共四十一頁。地貧產品介紹第二十五頁，共四十一頁。26通量高—每次檢測可分析96個樣本品質優(yōu)—陰、陽性符合率均為100%時間短—報告時間最短可至5小時分型強—每個突變位點準確分型覆蓋廣—可覆蓋中國人95%以上突變種類多—外周血、羊水、絨毛、臍帶血、足血片第二十六頁，共四十一頁。序號基因縮寫突變位點描述序號基因縮寫突變位點描述1HBAWS122Codon122(C->G)13HBBCD43CD43G>T2HBAQS125Codon125(T->C)14HBB-29-29A>G3HBACS142Codon142(T->C)15HBBInt起始密碼子ATG>AGG4HBA-SEASEA缺失16HBBCD14-15CD14-15(+G)5HBA-3.73.7缺失17HBBCD27-28CD27-28(+C)6HBA-4.24.2缺失18HBB-32-32C>A7HBBCD41-42CD41-42(-TCTT)19HBB-30-30T>C8HBBIVS-2-654IVS-2-654C>T20HBBIVS-1-1IVS-1-1G>T9HBBCD17CD17A>T21HBBIVS-1-5IVS-1-5G>C10HBB-28-28A>G22HBBCD31CD31(-C)11HBBCD26CD26G>A23HBBCapCAP+40-+43(-AAAC)12HBBCD71-72CD71-72(+A)\\\\本試劑盒適用于人DNA樣本的地中海貧血基因型（包含3種α突變、3種α缺失及17種β突變）中國常見的突變基因型的檢測，可用于人地中海貧血的輔助診斷及適用于大樣本量的攜帶者篩查和產前基因診斷。覆蓋廣27第二十七頁，共四十一頁。品質優(yōu)點突變與測序結果符合率高達100%三家臨床醫(yī)院廣東省婦幼保健院、廣西省婦幼保健院及湖北省婦幼保健院結果匯總見下表：陽性符合率（臨床靈敏度）=711/（711+0）=100%；陰性符合率（臨床特異性）=709/（0+709）=100%；總符合率=（711+709）/（711+0+0+709）=100%；28檢測方法陽性樣品陰性樣品α點突變β點突變現(xiàn)代高達試劑盒260478573測序260478573共計738573第二十八頁，共四十一頁。檢測方法陽性樣品陰性樣品現(xiàn)代高達試劑盒428217Gap-PCR428217品質優(yōu)缺失突變與Gap-PCR結果符合率高達100%陽性符合率（臨床靈敏度）=428/（428+0）=100%；陰性符合率（臨床特異性）=217/（0+217）=100%；總符合率=（428+217）/（428+0+0+217）=100%；第二十九頁，共四十一頁。時間短檢測流程樣本核酸提取20min多重PCR擴增2.5hr液相雜交15min結果檢測與判讀

1min/test30第三十頁，共四十一頁。分型強全新液相芯片技術簡介二維數(shù)字編碼磁珠31藻第三十一頁，共四十一頁。分型強全新液相芯片技術簡介第三十二頁，共四十一頁。

目前，國內地貧分子診斷方法主要有Gap-PCR、反向斑點雜交、導流雜交、測序等。其中Gap-PCR只能檢測出α地貧中的缺失型，反向斑點雜交需要兩次檢測才能完整的檢出α、β-地貧；導流雜交技術不能做到基因位點的準確分型；而測序方法需要昂貴的儀器，復雜序列分析，人工經驗要求高，不利于大規(guī)模篩查。國內現(xiàn)有地中海貧血基因檢測技術及現(xiàn)狀第三十三頁，共四十一頁。α-地中海貧血β-地中海貧血亞能生物技術(深圳)有限公司α-地中海貧血基因檢測試劑盒(gap-PCR法)(國食藥監(jiān)械(準)字2012第3401088號β-地中海貧血基因檢測試劑盒(反向點雜交法)(國食藥監(jiān)械(準)字2013第3400676號中山大學達安基因股份有限公司α-地中海貧血基因檢測試劑盒(gap-PCR法)(國食藥監(jiān)械(準)字2011第3401628號β-地中海貧血基因分型檢測試劑盒(PCR-反向點雜交法)(國食藥監(jiān)械(準)字2012第3401665號珠海經濟特區(qū)海泰生物制藥有限公司東南亞型α-地中海貧血Zeta鏈蛋白檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)(國食藥監(jiān)械(準)字2011第3400228號深圳益生堂生物企業(yè)有限公司β地中海貧血基因檢測試劑盒(PCR探針法)(國食藥監(jiān)械(準)字2012第3400354號廈門致善生物科技有限公司β-地中海貧血基因檢測試劑盒(熒光PCR熔解曲線法)(國食藥監(jiān)械(準)字2013第3401294號潮州凱普生物化學有限公司α-和β-地中海貧血基因檢測試劑盒(PCR+膜雜交法)(國食藥監(jiān)械(準)字2012第3400399號北京現(xiàn)代高達生物技術有限責任公司α-和β-型地中海貧血基因檢測試劑盒(PCR-雜交法)(國食藥監(jiān)械(準)字2013第3401572號地中海貧血檢測試劑盒第三十四頁，共四十一頁。現(xiàn)代高達同類產品（Gap-PCR、膜雜交）樣本收集樣本收集基因組DNA獲取基因組DNA獲取缺失和突變分2管進行PCR擴增α缺失，α點突變和β點突變分別進行PCR擴增多重微珠雜交（30min）Gap-PCR核酸電泳（1h）膜雜交（2-4h）自動化洗滌（5min）人工洗滌（膜雜交）電腦軟件自動判讀人工判斷，UV下觀察α缺失突變人工判讀，2張膜條分別對α和β進行判讀同類產品操作流程對比第三十五頁，共四十一頁。比較內容現(xiàn)代高達同類產品（Gap-PCR、膜雜交）檢測位點同時對α缺失、α突變及β突變檢測分別對α缺失、α突變及β突變檢測基因分型可以準確區(qū)分雜合和純合型只能區(qū)分少數(shù)位點結果分析儀器自動分析判斷人工分析判讀，耗時耗力報告時間1天4-7天（96個樣品）分析通量96樣本/次，適合大樣本量檢測單個樣本分析自動化程度高，樣本轉管無需再次標記，電腦自動化判讀結果等低，樣本標記繁多，易出錯，結果檢測靠手工操作等準確度高，自動化高，減少人工錯誤，較高，但穩(wěn)定性差，受經驗、環(huán)境因素等影響耗材費用低低環(huán)境污染無使用EB，有致癌性（Gap-PCR）自備試劑只需純水，用于顯色液和洗液稀釋需自己配制或購買雜交液、電泳液等同類產品優(yōu)勢對比第三十六